【技術實現步驟摘要】
本專利技術涉及生物醫藥，尤其涉及一種具有雙重靶向作用的納米藥物及其制備方法和應用。
技術介紹
1、多形性膠質母細胞瘤(glioblastoma?multiforme，gbm)是一種惡性程度極高的中樞神經系統腫瘤，屬于神經上皮性腫瘤。
2、在治療惡性膠質母細胞瘤時，血腦屏障(blood-brain?barrier，bbb)的限制是一個重要的問題，bbb通過嚴格控制物質從循環進入大腦，確保大腦正常功能，然而，它也阻礙了約98％的小分子藥物和幾乎所有的大分子藥物進入腦部；bbb提供的物理(緊密連接和粘附連接)和生物化學(轉運體介導的外排)屏障，阻止了抗瘤劑的腦滲透，限制小分子靶向治療的累積，盡管研究發現部分新型納米載體能跨bbb，但大部分載藥體系在體內循環時間短、靶向差，在瘤內的累積濃度遠遠達不到治療濃度，導致療效不佳。因此，亟需尋找一種循環時間長、生物安全性好且能跨bbb-靶向gbm的遞送體系來提高藥物的遞送效率。
3、現有技術如申請號的2023108928046的專利技術專利提供了一種靶向中樞神經系統的藥物遞送載體復合物及其制備方法和應用，其制備方法包括以下步驟：將載體細胞進行疊氮修飾，得到疊氮修飾載體細胞；將巰基和膽固醇分別修飾至治療性mirna的兩端，再將修飾后治療性mirna與丙烯基復合物進行連接反應，形成mirna復合物；將所述疊氮修飾載體細胞和所述mirna復合物共同孵育，通過點擊化學反應形成所述藥物遞送載體復合物。但上述方法使用活細胞作為藥物遞送載體可能引發免疫反應或被體內的免疫系統清除，這會影
4、外泌體粒徑較小，體內滲透效果好，不僅能通過epr效應、趨化、歸巢等特性富集在腫瘤部位，還能透過血腦屏障用于腦部疾病的治療。且外泌體內部和表面攜帶母細胞的遺傳物質、脂質與蛋白質，具有免疫調控、腫瘤微環境調控等功能，其可通過多種途徑抑制腫瘤生長。
5、鐵蛋白是由輕鏈亞基和重鏈亞基組裝而成的天然籠型納米材料，其特殊結構和性質使其作納米遞送載體具有得天獨厚的優勢。鐵蛋白內有空腔、表面積大，其空腔不僅可能負載很多分子藥物，還可以負載納米晶等，其大的表面積更是能夠允許許多抗腫瘤的修飾，進而實現藥物的空間差異化裝載，是理想的藥物載體。同時，研究顯示鐵蛋白受體在多種惡性腫瘤中的過表達，使得重鏈鐵蛋白成為抗腫瘤藥物遞送的理想體系。進一步研究發現，bbb和膠質瘤細胞上均高表達鐵蛋白受體，使用重鏈鐵蛋白構建納米藥物，能夠成功地跨越bbb進入中樞神經系統。且通過與鐵蛋白受體相互作用，基于鐵蛋白構建的納米藥物能夠有效地被膠質瘤細胞攝取，明顯增強藥物對腫瘤細胞的殺傷作用。
技術實現思路
1、為了解決上述
技術介紹
中的問題，本專利技術的目的一，在于提供一種具有雙重靶向作用的納米藥物，包括外泌體以及鐵蛋白；所述外泌體表面修飾有疊氮基團，所述鐵蛋白表面修飾有環決基團，所述外泌體與所述鐵蛋白通過疊氮基團與環決基團之間的點擊化學反應進行連接。
2、本申請的納米藥物通過外泌體和鐵蛋白在提高藥物搭載效率的同時，能有效穿過腦血屏障并被膠質瘤細胞攝取，增強藥物對腫瘤細胞的殺傷作用。
3、優選的，所述鐵蛋白為重鏈鐵蛋白。
4、優選的，所述重鏈鐵蛋白的粒徑為12nm。
5、優選的，所述外泌體為m1型小膠質細胞外泌體，m1型巨噬細胞外泌體或間充質干細胞外泌體中的一種或幾種。
6、本申請使用具有趨化或歸巢功能的外泌體，通過上述設計，提高納米藥物的靶向性。
7、優選的，所述外泌體空腔內可通過電轉負載有替莫唑胺、順鉑或小干擾rna。
8、優選的，所述鐵蛋白空腔內可裝載有納米錳、納米金或納米四氧化三鐵。
9、通過上述技術方案，使納米藥物能協同多模式治療膠質母細胞瘤。
10、本專利技術的目的二，在于提供一種具有雙重靶向作用的納米藥物的制備方法，包括以下步驟：
11、s1，制備表面修飾有疊氮基團的外泌體
12、將疊氮膽堿加入細胞完全培養基中，所述培養基中疊氮膽堿的濃度為100～1600μμ，隨后將細胞放入培養溫度為37℃、co2濃度為5％的恒溫培養箱中培養24～48h，再收集細胞上清液，隨后對細胞上清液進行超速離心，獲得表面修飾有疊氮基團的外泌體，所述外泌體的粒徑為30～150nm；
13、s2，制備表面修飾有環決基團的鐵蛋白
14、將二苯并環辛炔-五聚乙二醇-活性酯(dbco-peg5-nhs)加入鐵蛋白溶液，形成混合溶液一，其中鐵蛋白與dbco-peg5-nhs的摩爾比為1:12～1:120；
15、隨后在25～37℃下，將混合溶液一置于垂直混懸儀內以20r/min的轉速進行垂直混懸，混懸時間為1h～6h，再使用10kda超濾管進行超濾離心，除去混合溶液一內未反應的dbco-peg5-nhs，獲得表面修飾有環決基團的鐵蛋白；
16、s3，制備具有雙重靶向作用的納米顆粒
17、將表面修飾有疊氮基團的外泌體與表面修飾有環決基團的鐵蛋白混合在一起，形成混合溶液二，其中表面修飾有疊氮基團的外泌體與表面修飾有環決基團的鐵蛋白的個數比為1:10～1:100；
18、隨后在25～37℃下，將混合溶液二置于垂直混懸儀內以20r/min的轉速進行垂直混懸，混懸時間為2h～6h，再進行離心分離，獲得雙重靶向作用的納米顆粒。
19、優選的，所述步驟一中的細胞為m1型小膠質細胞hmc3。
20、本專利技術的目的三，在于提供一種納米藥物在治療膠質母細胞瘤制劑中的應用。
21、本專利技術的目的四，在于提供一種藥物遞送系統。
22、綜上所述，本專利技術的有益效果為：
23、利用外泌體和鐵蛋白構建具有雙重靶向作用的納米藥物，通過鐵蛋白-鐵蛋白受體和外泌體歸巢/趨化的雙重作用跨越bbb，靶向gbm；
24、在外泌體空腔內通過電轉等方式負載替莫唑胺、順鉑或小干擾rna等抗腫瘤藥物，提高藥物穩定性、增強藥物療效；
25、在鐵蛋白空腔內通過原位生長等方式裝載納米錳、金、四氧化三鐵等納米晶，構建具有雙重靶向作用且能協同多模式治療膠質母細胞瘤的納米藥物；
26、同時鐵蛋白內也可以搭載藥物，提高藥物搭載效率，增強治療效率。
27、上述說明僅是本專利技術的技術方案的概述，為了能夠更清楚了解本專利技術的技術手段，而可依照說明書的內容予以實施，并且為了讓本專利技術的上述和其他目的、特征和優點能夠更明顯易懂，以下特舉較佳實施例，并配合附圖，詳細說明如下。
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1.一種具有雙重靶向作用的納米藥物，其特征在于，包括外泌體以及鐵蛋白；所述外泌體表面修飾有疊氮基團，所述鐵蛋白表面修飾有環決基團，所述外泌體與所述鐵蛋白通過疊氮基團與環決基團之間的點擊化學反應進行連接。
2.根據權利要求1所述的一種具有雙重靶向作用的納米藥物，其特征在于，所述鐵蛋白為重鏈鐵蛋白。
3.根據權利要求2所述的一種具有雙重靶向作用的納米藥物，其特征在于，所述重鏈鐵蛋白的粒徑為12nm。
4.根據權利要求1所述的一種具有雙重靶向作用的納米藥物，其特征在于，所述外泌體為M1型小膠質細胞外泌體，M1型巨噬細胞外泌體或間充質干細胞外泌體中的一種或幾種。
5.根據權利要求1所述的一種具有雙重靶向作用的納米藥物，其特征在于，所述外泌體空腔內通過電轉負載有替莫唑胺、順鉑或小干擾RNA。
6.根據權利要求1所述的一種具有雙重靶向作用的納米藥物，其特征在于，所述鐵蛋白空腔內裝載有納米錳、納米金或納米四氧化三鐵。
7.一種權利要求1-6任一所述的具有雙重靶向作用的納米藥物的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：
<...【技術特征摘要】
1.一種具有雙重靶向作用的納米藥物，其特征在于，包括外泌體以及鐵蛋白；所述外泌體表面修飾有疊氮基團，所述鐵蛋白表面修飾有環決基團，所述外泌體與所述鐵蛋白通過疊氮基團與環決基團之間的點擊化學反應進行連接。
2.根據權利要求1所述的一種具有雙重靶向作用的納米藥物，其特征在于，所述鐵蛋白為重鏈鐵蛋白。
3.根據權利要求2所述的一種具有雙重靶向作用的納米藥物，其特征在于，所述重鏈鐵蛋白的粒徑為12nm。
4.根據權利要求1所述的一種具有雙重靶向作用的納米藥物，其特征在于，所述外泌體為m1型小膠質細胞外泌體，m1型巨噬細胞外泌體或間充質干細胞外泌體中的一種或幾種。
5.根據權利要求1所述的一種具有雙重靶...
【專利技術屬性】
技術研發人員：盧貴紅，李維平，譚回，王亞超，王文婧，
申請(專利權)人：深圳市第二人民醫院深圳市轉化醫學研究院，
類型：發明
國別省市：
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