【技術實現步驟摘要】
本專利技術屬于生物，具體涉及一種促進干細胞造血分化的方法及其應用。
技術介紹
1、造血干細胞(hematopoietic?stem?cells，hscs)是血液系統中的成體干細胞，是一個異質性的群體，具有長期自我更新的能力和分化成各類成熟血細胞的潛能。由于其具有造血重建能力，在臨床上造血干細胞被廣泛用于治療各種血液疾病，包括：遺傳性疾病(如：地中海貧血癥、鐮刀形貧血癥、再生障礙性貧血或范可尼貧血癥等)以及非遺傳性疾病(如：白血病等)。但是由于造血干細胞具有來源有限，配型困難，體外擴增障礙等問題，極大限制其在臨床上的應用。
2、造血干細胞的分化途徑非常復雜，造血系統通常分為兩個主要分支：髓系和淋巴系。骨髓系負責三個主要功能：氧氣轉運，止血和先天免疫；淋巴譜系產生b、t和自然殺傷(nk)細胞，這些細胞負責適應性免疫。
3、cn112226409a提供了一種改進的擬胚體(eb)分化系統，所述分化系統能夠使擬胚體(eb)在常氧、無異種來源細胞的條件下向cd34+造血祖細胞的分化。該專利技術還提供了利用改進的擬胚體分化系統對所述擬胚體進行分化培養的方法，實現了擬胚體的高效形成，而且克服了擬胚體分化球易粘連的問題。
4、雖然現有技術公開了多種造血分化方法，但是現有的造血分化方法在效率上仍然有待改進，因此，提供一種提升造血分化效率的造血分化的方法，促進人多能干細胞(hpscs)的臨床應用很有必要。
技術實現思路
1、針對現有技術存在的不足，本專利技術的目的在于
2、為達到此專利技術目的，本專利技術采用以下技術方案：
3、第一方面，本專利技術提供一種促進干細胞造血分化的方法，在造血分化培養基中添加去乙酰化酶抑制劑。
4、優選地，所述去乙酰化酶抑制劑為組蛋白去乙酰化酶抑制劑。
5、優選地，所述組蛋白去乙酰化酶抑制劑選自丁酸鈉或丙戊酸鈉。
6、本專利技術中，對不同種類的組蛋白去乙酰化酶抑制劑進行了實驗，結果發現，相比于其他的組蛋白去乙酰化酶抑制劑丁酸鈉或丙戊酸鈉這兩種物質在促進干細胞造血分化具有顯著的效果。專利技術人發現對于干細胞的造血分化，添加與不添加丁酸鈉或丙戊酸鈉對干細胞的造血分化的效率具有很大影響，在添加丁酸鈉或丙戊酸鈉時，干細胞的分化效率更高，細胞得率更高；而在不添加丁酸鈉或丙戊酸鈉時，干細胞的分化效率降低。
7、優選地，所述方法包括：依次采用含有組蛋白去乙酰化酶抑制劑的培養基對干細胞進行造血分化培養；所述含有組蛋白去乙酰化酶抑制劑的培養基包括培養基i、培養基ii和培養基iii；
8、其中，所述培養基i包括基礎培養基、組蛋白去乙酰化酶抑制劑、bmp4和activina；
9、所述培養基ii包括基礎培養基、組蛋白去乙酰化酶抑制劑、bfgf和vegf；
10、所述培養基iii包括基礎培養基、組蛋白去乙酰化酶抑制劑、bfgf、vegf和sb431542。
11、優選地，所述組蛋白去乙酰化酶抑制劑在培養基i、培養基ii和培養基iii中的終濃度各自獨立的為1-1000μm，例如可以是1μm、100μm、200μm、400μm、500μm、600μm、800μm或1000μm等。
12、優選地，所述組蛋白去乙酰化酶抑制劑為丁酸鈉時，所述丁酸鈉在培養基i、培養基ii和培養基iii中的終濃度各自獨立的為100-500μm，例如可以是100μm、μm、200μm、300μm、400μm或500μm等。
13、優選地，所述組蛋白去乙酰化酶抑制劑為丙戊酸鈉時，所述丙戊酸鈉在培養基i、培養基ii和培養基iii中的終濃度各自獨立的為1-1000μm，例如可以是1μm、100μm、200μm、400μm、500μm、600μm、800μm或1000μm等。
14、本專利技術中組蛋白去乙酰化酶抑制能夠顯著增加干細胞的造血分化效率，尤其是采用丁酸鈉或丙戊酸鈉時具有更好的促進造血分化效果，其中丁酸鈉的濃度范圍在100-500μm，或者丙戊酸鈉的濃度范圍在1-1000μm時，促進造血分化效果最好；當組蛋白去乙酰化酶抑制劑的添加量過低時，其促進分化的作用減弱，當組蛋白去乙酰化酶抑制劑的添加量過高時，也不利于細胞分化，因此需要控制組蛋白去乙酰化酶抑制劑在適宜的添加范圍。
15、本專利技術中，所述培養基i包括基礎培養基、組蛋白去乙酰化酶抑制劑、bmp4(人骨形態發生蛋白-4)和activin?a(激活素a)。
16、優選地，所述培養基i中的基礎培養基為e6培養基。
17、優選地，所述培養基i按終濃度計包括：1-1000μm組蛋白去乙酰化酶抑制劑、2-100ng/ml?bmp4和10-100ng/ml?activin?a。
18、本專利技術中，所述組蛋白去乙酰化酶抑制劑的濃度為1-1000μm，例如可以是1μm、100μm、200μm、400μm、500μm、600μm、800μm或1000μm等。所述bmp4的濃度為2-100ng/ml，例如可以是2ng/ml、10ng/ml、20ng/ml、40ng/ml、50ng/ml、60ng/ml、80ng/ml或100ng/ml等。所述activin?a的濃度為10-100ng/ml，例如可以是10ng/ml、20ng/ml、40ng/ml、50ng/ml、60ng/ml、80ng/ml或100ng/ml等。
19、本專利技術中，所述組蛋白去乙酰化酶抑制劑為丁酸鈉時，所述培養基i按終濃度計包括：100-500μm丁酸鈉、2-100ng/ml?bmp4和10-100ng/ml?activin?a。
20、本專利技術中，所述組蛋白去乙酰化酶抑制劑為丙戊酸鈉時，所述培養基i按終濃度計包括：1-1000μm丙戊酸鈉、2-100ng/ml?bmp4和10-100ng/ml?activin?a。
21、本專利技術中，所述培養基i能有效促進中胚層分化。其中e6培養基可以用于人胚胎干(es)細胞和誘導多能干(ips)細胞的譜系分化；bmp-4是一種多效性配體蛋白，屬于tgfβ家族，參與血管系統循環，可以激活血管細胞上的受體，能夠促進誘導分化；activin?a是一種多功能細胞因子，是tgf-β超家族的成員，能夠調節造血細胞增殖。
22、本專利技術中，所述培養基ii包括基礎培養基、組蛋白去乙酰化酶抑制劑、bfgf(堿性成纖維細胞生長因子)和vegf(血管內皮生長因子)。
23、優選地，所述培養基ii中的基礎本文檔來自技高網...
【技術保護點】
1.一種促進干細胞造血分化的方法，其特征在于，在造血分化培養基中添加去乙酰化酶抑制劑。
2.根據權利要求1所述的促進干細胞造血分化的方法，其特征在于，所述去乙酰化酶抑制劑為組蛋白去乙酰化酶抑制劑；
3.根據權利要求2所述的促進干細胞造血分化的方法，其特征在于，所述方法包括：依次采用含有組蛋白去乙酰化酶抑制劑的培養基對干細胞進行造血分化培養；所述含有組蛋白去乙酰化酶抑制劑的培養基包括培養基I、培養基II和培養基III；
4.根據權利要求3所述的促進干細胞造血分化的方法，其特征在于，所述組蛋白去乙酰化酶抑制劑在培養基I、培養基II和培養基III中的終濃度各自獨立的為1-1000μM；
5.根據權利要求3或4所述的促進干細胞造血分化的方法，其特征在于，所述培養基I中的基礎培養基為E6培養基；
6.根據權利要求3-5中任一項所述的促進干細胞造血分化的方法，其特征在于，所述方法包括：
7.根據權利要求3-6中任一項所述的促進干細胞造血分化的方法，其特征在于，在采用培養基I培養之前，預先將所述干細胞接種在培養板中，所述干
8.根據權利要求7所述的促進干細胞造血分化的方法，其特征在于，將接種后的干細胞預先在含有8-10μM?Y27632的mTeSR1培養基中培養10-12h。
9.一種促進干細胞造血分化的培養基，其特征在于，所述培養基包括培養基I、培養基II和培養基III；
10.權利要求1-8中任一項所述的促進干細胞造血分化的方法和/或權利要求9所述的促進干細胞造血分化的培養基在定向造血分化中應用。
...【技術特征摘要】
1.一種促進干細胞造血分化的方法，其特征在于，在造血分化培養基中添加去乙酰化酶抑制劑。
2.根據權利要求1所述的促進干細胞造血分化的方法，其特征在于，所述去乙酰化酶抑制劑為組蛋白去乙酰化酶抑制劑；
3.根據權利要求2所述的促進干細胞造血分化的方法，其特征在于，所述方法包括：依次采用含有組蛋白去乙酰化酶抑制劑的培養基對干細胞進行造血分化培養；所述含有組蛋白去乙酰化酶抑制劑的培養基包括培養基i、培養基ii和培養基iii；
4.根據權利要求3所述的促進干細胞造血分化的方法，其特征在于，所述組蛋白去乙酰化酶抑制劑在培養基i、培養基ii和培養基iii中的終濃度各自獨立的為1-1000μm；
5.根據權利要求3或4所述的促進干細胞造血分化的方法，其特征在于，所述培養基i中的基礎培養基為e...
【專利技術屬性】
技術研發人員：請求不公布姓名，
申請(專利權)人：深圳市濟因生物科技有限公司，
類型：發明
國別省市：
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