【技術實現步驟摘要】
本專利技術屬于作物育種，具體涉及一種獲得防控煙草普通花葉病的煙草品種的方法。
技術介紹
1、煙草普通花葉病，是由煙草花葉病毒（tobacco?mosaic?virus，tmv）引起的煙草病害，是煙草生產中的常見病害之一，在世界范圍內各產煙區均有發生。目前，煙草普通花葉病的防控措施主要有培育抗病品種，加強田間管理，采用化學藥劑或生物藥劑進行防治等，其中培育抗病能力強的煙草品種是最為有效的防控方式。鐵氧還蛋白（ferredoxin，簡稱fd），是一類酸性、低分子量的鐵硫蛋白，在植物、動物、細菌及藻類等普遍存在。植物體內fd一般由95?~?100?個氨基酸殘基組成，含有[2fe-2s]簇的氧化還原中心，具有較負的氧化還原電勢，不僅存在于質體中，還存在于非光合作用的器官例如根中。植物fd的主要功能有參與光合作用、固氮作用、抗病過程響應等。例如，朱麗等發現水稻osfd1參與水稻碳、氮、硫的同化（cn111100867b）；賴鐘雄等將龍眼鐵氧還蛋白基因導入文心蘭，轉化植株不僅移栽成活率提高，抗軟腐病能力也提高（cn103898156b）；程玉琴等在玉米原生質體中超量表達fdv可有效抑制甘蔗花葉病毒scmv的復制（cn102379305b）；孫現超等采用抗體檢測表明番茄花葉病毒tomv侵染可降低煙草鐵氧還蛋白fdn?i的表達（中國農業科學,?2010,?43(19):3981-3987）；鄧樂樂等發現煙草鐵氧化還原蛋白基因ntab0899580表達降低后，編輯植株株高降低、葉數減少，葉片總糖和還原糖含量升高（cn117024541a）。以上研
技術實現思路
1、本專利技術的目的在于提供一種獲得防控煙草普通花葉病的煙草品種的方法，以填補現有煙草ntfd基因防控普通花葉病技術的空白，為煙草抗病品系培育提供材料基礎。
2、為實現上述目的，本申請是通過以下技術方案實現的：
3、一種獲得防控煙草普通花葉病的煙草品種的方法，利用如seq?id?no.1所示煙草ntfd基因的第120?-142位堿基進行人工干預突變，突變后的核苷酸片段序列如seq?idno.2所示。
4、進一步的，seq?id?no.1所示煙草ntfd基因的編碼蛋白序列如seq?id?no.3所示。
5、進一步的，突變后的煙草ntfd基因命名為煙草鐵氧還原蛋白基因ntfd。
6、進一步的，煙草鐵氧還原蛋白基因ntfd由煙草紅花大金元樣品獲得的煙草ntfd基因通過基因編輯技術獲得。
7、進一步的，煙草鐵氧還原蛋白基因ntfd的pcr擴增引物序列設計如下：
8、f：5'-aactggtgaatcctgctaag-3'，
9、r：5'-agactggtccgtacttgttt-3'。
10、進一步的，pcr擴增的反應條件為：95℃?10sec，52℃?30sec，72℃?2.5min，共30個循環；72℃?10min；12℃?hold。
11、本專利技術的有益效果是：
12、1、本專利技術獲得的煙草ntfd突變基因序列，在煙草普通花葉病防控方面具有顯著效果。
13、2、本專利技術提供了煙草ntfd突變基因防控普通花葉病技術的新可能，填補了相關
的空白。
【技術保護點】
1.一種獲得防控煙草普通花葉病的煙草品種的方法，其特征在于，利用如SEQ?ID?NO.1所示煙草NtFd基因的第120?-142位堿基進行人工干預突變，突變后的核苷酸片段序列如SEQ?ID?NO.2所示。
2.根據權利要求1所述的獲得防控煙草普通花葉病的煙草品種的方法，其特征在于，SEQ?ID?NO.1所示煙草NtFd基因的編碼蛋白序列如SEQ?ID?No.3所示。
3.根據權利要求1所述的獲得防控煙草普通花葉病的煙草品種的方法，其特征在于，突變后的煙草NtFd基因命名為煙草鐵氧還原蛋白基因ntfd。
4.根據權利要求3所述的獲得防控煙草普通花葉病的煙草品種的方法，其特征在于，煙草鐵氧還原蛋白基因ntfd由煙草紅花大金元樣品獲得的煙草NtFd基因通過基因編輯技術獲得。
5.根據權利要求4所述的獲得防控煙草普通花葉病的煙草品種的方法，其特征在于，煙草鐵氧還原蛋白基因ntfd的PCR擴增引物序列設計如下：
6.根據權利要求4所述的獲得防控煙草普通花葉病的煙草品種的方法，其特征在于，PCR擴增的反應條件為：95℃?10sec，
...【技術特征摘要】
1.一種獲得防控煙草普通花葉病的煙草品種的方法，其特征在于，利用如seq?id?no.1所示煙草ntfd基因的第120?-142位堿基進行人工干預突變，突變后的核苷酸片段序列如seq?id?no.2所示。
2.根據權利要求1所述的獲得防控煙草普通花葉病的煙草品種的方法，其特征在于，seq?id?no.1所示煙草ntfd基因的編碼蛋白序列如seq?id?no.3所示。
3.根據權利要求1所述的獲得防控煙草普通花葉病的煙草品種的方法，其特征在于，突變后的煙草ntfd基因命名為煙草鐵氧還原蛋白基因ntfd。
...
【專利技術屬性】
技術研發人員：米其利，李雪梅，楊乾翃，苗翠蘋，高茜，楊文武，曾婉俐，許力，楊葉昆，
申請(專利權)人：云南中煙工業有限責任公司，
類型：發明
國別省市：
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