【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】
本專利技術(shù)涉及生物分析，具體涉及幽門螺桿菌ureb分子印跡電化學(xué)傳感器及其制備方法。
技術(shù)介紹
1、隨著城市化和工業(yè)化的不斷發(fā)展，水污染已經(jīng)成為當(dāng)今社會(huì)最嚴(yán)重的環(huán)境問題之一。在水體中存在的病原體污染物不僅對人類健康構(gòu)成潛在威脅，而且對生態(tài)系統(tǒng)的平衡也造成了不可忽視的影響。在這些病原體污染物中，幽門螺桿菌的存在引起了人類的廣泛關(guān)注，它是一種革蘭氏陰性細(xì)菌，是引起胃病和十二指腸疾病的主要致病因子，包括慢性胃炎、消化性胃潰瘍和胃癌等。然而，現(xiàn)有的hp流行病學(xué)分析報(bào)告均是基于不同時(shí)空環(huán)境下收集的臨床診斷數(shù)據(jù)所開展的統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，其結(jié)果無法避免地具有時(shí)效滯后性和數(shù)據(jù)的不確定性。因此，使用合理的檢測技術(shù)精準(zhǔn)定量分析hp有助于推動(dòng)hp流行病學(xué)調(diào)查與相關(guān)誘發(fā)疾病關(guān)聯(lián)性的理論研究進(jìn)展，可為城市應(yīng)對未來公共衛(wèi)生突發(fā)事件提供相關(guān)環(huán)境衛(wèi)生分析技術(shù)支撐。
2、目前，傳統(tǒng)的檢測方法在實(shí)際應(yīng)用中表現(xiàn)出明顯的局限性，不僅檢測時(shí)間較長，操作過程復(fù)雜繁瑣，而且對實(shí)驗(yàn)室設(shè)備和專業(yè)技能的依賴性極高，這些因素都在不同程度上限制了檢測的效率和普及程度。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
1、該
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
是本專利技術(shù)的各個(gè)方面的高級概述，并且介紹了在下面的具體實(shí)施方式部分中進(jìn)一步詳細(xì)描述的一些概念。該
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
不旨在識別所要求保護(hù)的主題的關(guān)鍵或必要特征，也不旨在單獨(dú)用于確定所要求保護(hù)的主題的范圍。應(yīng)該通過參考整個(gè)說明書的適當(dāng)部分、任何或所有附圖以及每個(gè)權(quán)利要求來理解主題。
2、基于現(xiàn)有技術(shù)的不足，本專利技術(shù)提供幽門螺桿菌
3、本專利技術(shù)提供一種幽門螺桿菌ureb蛋白分子印跡電化學(xué)傳感器制備方法，包括以下步驟：
4、步驟一、將鍍金電極經(jīng)4-氨基苯硫酚的乙醇溶液孵育，得到4-atp/au/spe，再經(jīng)蛋白交聯(lián)劑dtssp的pbs緩沖液孵育，得到可裂解共價(jià)鍵固定支架dtssp/4-atp/au/spe。
5、本專利技術(shù)使用4-氨基苯硫酚的乙醇溶液孵育鍍金電極，其硫原子與金形成化學(xué)鍵固定于電極表面，增加導(dǎo)電性；與電極表面多位點(diǎn)吸附，提高覆蓋率，減少金鍍層腐蝕磨損，延長電極壽命；氨基還能與蛋白交聯(lián)劑dtssp兩端的n-羥基琥珀酰亞胺活性酯結(jié)合，實(shí)現(xiàn)dtssp在電極表面的固定。
6、蛋白交聯(lián)劑dtssp兩端的n-羥基琥珀酰亞胺活性酯與電極表面4-氨基苯硫酚中的氨基結(jié)合，從而固定在電極表面；dtssp分子中含有二硫鍵，使用dtssp作為裂解層，有利于在電極表面生成ureb分子印記聚合物。
7、步驟二、將可裂解共價(jià)鍵固定支架dtssp/4-atp/au/spe經(jīng)ureb溶液孵育，得到ureb/dtssp/4-atp/au/spe，再經(jīng)da功能單體溶液滴鑄到ureb/dtssp/4-atp/au/spe表面，通過電化學(xué)聚合法形成epda薄膜，得到epda薄膜覆蓋的epda/ureb/dtssp/4-atp/au/spe。
8、ureb表面含有許多氨基酸殘基，例如含有伯胺基團(tuán)的賴氨酸殘基，可以和dtssp兩端的n-羥基琥珀酰亞胺活性酯發(fā)生親核取代反應(yīng)，形成穩(wěn)定的酰胺鍵，從而固定在電極表面，實(shí)現(xiàn)電極對ureb的特異性識別。
9、通過分子對接模擬da作為合適的功能單體，是因?yàn)橄噍^于間苯二胺、對苯二胺和苯胺與ureb的結(jié)合能，da的結(jié)合能最強(qiáng)為-5.1kcal/mol；多巴胺可以與電極表面的ureb進(jìn)行組裝從而形成聚合物，從而實(shí)現(xiàn)對ureb的特定印記。
10、步驟三、用2-巰基乙醇的乙醇溶液裂解epda/ureb/dtssp/4-atp/au/spe表面的s–s鍵，后用乙酸溶液沖洗裂解后的epda/ureb/dtssp/4-atp/au/spe，得到分子印跡聚合物電極ureb-mips。
11、2-巰基乙醇中的巰基具備強(qiáng)親核性，會(huì)攻擊dtssp的s–s鍵，從而導(dǎo)致dtssp的s–s鍵斷裂，釋放ureb；da的自聚合反應(yīng)在中性或堿性條件下更容易發(fā)生，利用乙酸溶液使電極表面處于酸性環(huán)境，從而抑制da的自聚合反應(yīng)；da分子是一種極性分子，乙酸溶液作為一種極性溶劑，可以降低da分子在電極表面的聚集程度，從而減少分子間基團(tuán)的碰撞，從而抑制da分子的自聚合反應(yīng)。
12、步驟四、以飽和氯化鉀為參比電極，鉑絲電極為對電極，分子印跡聚合物電極ureb-mips為工作電極，制成幽門螺桿菌ureb蛋白分子印跡電化學(xué)傳感器。
13、優(yōu)選地，步驟一中，所述鍍金電極的制備方法包括以下步驟：
14、a1、配置鍍金電解液：將氯金酸水溶液、去離子水、硫酸鈉溶液混合均勻，得到鍍金電解液；
15、a2、取電極基體用超純水潤洗后，用鍍金電解液處理電極基體，通過循環(huán)伏安法在電極基體表面沉積金，得到鍍金電極。
16、所述氯金酸水溶液、去離子水、硫酸鈉溶液的質(zhì)量比為2.5~3.5:4~8:0.8~1.2；
17、所述硫酸鈉溶液的濃度為80~120mm；
18、所述電極基體為絲網(wǎng)印刷電極或玻碳電極；
19、所述循環(huán)伏安法的電位參數(shù)范圍為-1～1v，參比電極為ag/agcl，掃描圈數(shù)為8~12圈，掃描速率為50mv/s。
20、金的導(dǎo)電率高，通過在電極基體上鍍金，能夠使電子在電極和電解質(zhì)之間快速傳遞，從而使電化學(xué)傳感器對檢測物質(zhì)響應(yīng)更加靈敏。
21、優(yōu)選地，所述步驟一中，4-氨基苯硫酚的乙醇溶液濃度為80~120mm，蛋白交聯(lián)劑dtssp的pbs緩沖液濃度為8~20mm；4-氨基苯硫酚的乙醇溶液孵育時(shí)間為20～40min，蛋白交聯(lián)劑dtssp的pbs緩沖液孵育時(shí)間為20～40min。
22、優(yōu)選地，步驟二中，所述da功能單體溶液是將da功能單體溶解于tris-hcl緩沖液中制得。
23、優(yōu)選地，所述步驟二中，ureb溶液濃度為0.14~0.18μm，da功能單體溶液濃度為0.25~0.35mm；ureb溶液孵育時(shí)間為20～40min。
24、優(yōu)選地，步驟二中，所述電化學(xué)聚合法的電位參數(shù)范圍為-0.8～0.8v，參比電極為ag/agcl，掃描圈數(shù)為8~12圈，掃描速率為50mv/s。
25、優(yōu)選地，所述步驟三中，2-巰基乙醇的乙醇溶液濃度為0.05~0.15m，乙酸溶液的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為8%～12%。
26、本專利技術(shù)還提供上述幽門螺桿菌ureb蛋白分子印跡電化學(xué)傳感器制備方法制備的幽門螺桿菌ureb蛋白分子印跡電化學(xué)傳感器。
27、本專利技術(shù)還提供上述幽門螺桿菌ureb蛋白分子印跡電化學(xué)傳感器對幽門螺桿菌的檢測方法，包括以下步驟：
28、b1、使用去離子水沖洗分子印跡聚合物電極ureb-mips表面，用不同濃度的ureb溶液孵育分子印跡聚合物電極ureb-mips，持續(xù)10min；
29、b2、以fe(cn)63-/4-作為氧化還原探針，用方波陽極溶出伏安法測量分子印跡聚合物電極ureb-m本文檔來自技高網(wǎng)...
【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】
1.一種幽門螺桿菌ureB蛋白分子印跡電化學(xué)傳感器制備方法，其特征在于，包括以下步驟：
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述幽門螺桿菌ureB蛋白分子印跡電化學(xué)傳感器制備方法，其特征在于，步驟一中，所述鍍金電極的制備方法包括以下步驟：
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述幽門螺桿菌ureB蛋白分子印跡電化學(xué)傳感器制備方法，其特征在于，所述步驟一中，4-氨基苯硫酚的乙醇溶液濃度為80~120mM，蛋白交聯(lián)劑DTSSP的PBS緩沖液濃度為8~20mM；4-氨基苯硫酚的乙醇溶液孵育時(shí)間為20～40min，蛋白交聯(lián)劑DTSSP的PBS緩沖液孵育時(shí)間為20～40min。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述幽門螺桿菌ureB蛋白分子印跡電化學(xué)傳感器制備方法，其特征在于，步驟二中，所述DA功能單體溶液是將DA功能單體溶解于Tris-HCl緩沖液中制得。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述幽門螺桿菌ureB蛋白分子印跡電化學(xué)傳感器制備方法，其特征在于，所述步驟二中，ureB溶液濃度為0.14~0.18μM，DA功能單體溶液濃度為0.25~0.35mM；ureB溶液孵育時(shí)間為20～40min。
...【技術(shù)特征摘要】
1.一種幽門螺桿菌ureb蛋白分子印跡電化學(xué)傳感器制備方法，其特征在于，包括以下步驟：
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述幽門螺桿菌ureb蛋白分子印跡電化學(xué)傳感器制備方法，其特征在于，步驟一中，所述鍍金電極的制備方法包括以下步驟：
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述幽門螺桿菌ureb蛋白分子印跡電化學(xué)傳感器制備方法，其特征在于，所述步驟一中，4-氨基苯硫酚的乙醇溶液濃度為80~120mm，蛋白交聯(lián)劑dtssp的pbs緩沖液濃度為8~20mm；4-氨基苯硫酚的乙醇溶液孵育時(shí)間為20～40min，蛋白交聯(lián)劑dtssp的pbs緩沖液孵育時(shí)間為20～40min。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述幽門螺桿菌ureb蛋白分子印跡電化學(xué)傳感器制備方法，其特征在于，步驟二中，所述da功能單體溶液是將da功能單體溶解于tris-hcl緩沖液中制得。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述幽門螺桿菌ureb蛋白分子印跡電化學(xué)傳感器制備方法，其特征在于，所述步驟二中，ureb溶液濃度為0.14~0.18μm，da功能單體溶液濃度為0.25~0.35mm；ureb溶...
【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：盧鼎南，甘慧慧，高豆豆，駱佳悅，劉宇，
申請(專利權(quán))人：寧波大學(xué)，
類型：發(fā)明
國別省市：
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