【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】
本專利技術(shù)屬于微生物，具體涉及一株裂解k1莢膜型肺炎克雷伯菌的噬菌體及其應(yīng)用。
技術(shù)介紹
1、肺炎克雷伯桿菌(klebsiella?pneumoniae)是重要的人獸共患病原菌,該菌除了可引起嚴(yán)重的牛乳房炎感染，也是人醫(yī)臨床上常見的條件致病菌之一，可以導(dǎo)致包括肺炎、尿路感染、肝膿腫、菌血癥、結(jié)膜炎和腦膜炎等在內(nèi)的各種疾病，給養(yǎng)殖業(yè)和醫(yī)療業(yè)造成了不小的經(jīng)濟(jì)損失。隨著抗生素在臨床和養(yǎng)殖業(yè)的無限制使用，肺炎克雷伯菌耐藥情況也愈發(fā)嚴(yán)峻尤其是產(chǎn)碳青霉烯酶高毒力菌株(carbapenem-resistant?hypervirulentklebsiellapneumoniae)的出現(xiàn)，更是讓肺炎克雷伯菌的抗生素治療陷入幾乎“無藥可用”的境地。病原細(xì)菌對(duì)抗生素的耐藥性日益增強(qiáng)，給人類健康、公共衛(wèi)生安全和養(yǎng)殖業(yè)健康發(fā)展帶來巨大威脅。肺炎克雷伯桿菌是耐藥性最嚴(yán)重的人畜共患機(jī)會(huì)性致病菌之一，包含k1和k2莢膜型在內(nèi)的一些肺炎克雷伯桿菌毒力極強(qiáng)，可引起動(dòng)物和人的多種感染性疾病。這些強(qiáng)耐藥與強(qiáng)毒力并存的肺炎克雷伯桿菌菌株引起的感染極難防控，目前缺乏有效的藥物和治療策略。
2、噬菌體(bacteriophage)作為一類特異性感染細(xì)菌的病毒,能感染細(xì)菌、真菌、放線菌或螺旋體等微生物并引起宿主菌的裂解，是天然的殺菌物質(zhì)，曾廣泛應(yīng)用于耳喉科、腔科、眼科、皮膚科、兒科及肺部疾病等的治療。在全球醫(yī)療領(lǐng)域面臨日益嚴(yán)峻的細(xì)菌耐藥性威脅時(shí)，噬菌體因其高效的、特異性的殺菌作用在治療或預(yù)防疾病具有極大的潛力。此前，高毒力且具有耐藥性的肺炎克雷伯菌已有報(bào)道，但關(guān)于
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
1、本專利技術(shù)要解決的技術(shù)問題為治療高毒力肺炎克雷伯菌感染提供一種新選擇。
2、本專利技術(shù)的技術(shù)方案是肺炎克雷伯噬菌體yongunavirus?kp03，保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心(cctcc)，保藏地址：中國·武漢·武漢大學(xué)，郵編430072；保藏號(hào)為cctccno：m20241155。
3、本專利技術(shù)還提供了所述噬菌體yongunavirus?kp03在制備防治k1莢膜型肺炎克雷伯桿菌的制劑中的應(yīng)用。
4、本專利技術(shù)還提供了防治k1莢膜型肺炎克雷伯桿菌的制劑的制備方法，包括如下步驟：
5、s1、將k1莢膜型肺炎克雷伯桿菌培養(yǎng)至對(duì)數(shù)生長初期，加入噬菌體yongunaviruskp03，培養(yǎng)至溶液澄清，加入1％氯仿使細(xì)菌破裂，加入nacl至終濃度為1mol/l，攪拌至完全溶解，冰浴6h，離心，收集上清液，得到裂解液；
6、s2、向裂解液中加入peg8000，輕緩顛倒使其溶解(禁劇烈)，冰浴，離心，收集沉淀；
7、s3、sm緩沖液溶解沉淀、加入氯仿抽提，收集上層水相，過濾，得到制劑。
8、具體的，步驟s1中，加入其活噬菌體數(shù)量應(yīng)與肺炎克雷伯菌宿主菌活菌比例為1：10。
9、其中，步驟s1中，培養(yǎng)至溶液澄清后加入dnasei和rnasea至終濃度1μg/ml，振蕩培養(yǎng)30min。
10、進(jìn)一步的，步驟s1中，離心條件為4℃、10000×g離心15min。
11、其中，步驟s2，peg8000的加入量為：每100ml裂解液中加入10gpeg8000。加入peg8000的目的是使噬菌體沉淀，從而濃縮噬菌體，進(jìn)一步提高噬菌體效價(jià)。
12、特別的，步驟s2中，離心條件為4℃、12000rpm離心15min。
13、具體的，步驟s3中，過濾采用0.22μm孔徑的濾膜。
14、本專利技術(shù)還提供了所述制備方法得到的防治k1莢膜型肺炎克雷伯桿菌的制劑。
15、進(jìn)一步的，所述制劑為噴灑劑或注射劑。
16、本專利技術(shù)的有益效果：本專利技術(shù)公開了一株新型裂解k1莢膜型高毒力肺炎克雷伯菌的噬菌體。該噬菌體不僅對(duì)分離于牛場污水的宿主多重耐藥高毒力肺炎克雷伯桿菌具有較好的消殺效果；對(duì)另外3株分離于醫(yī)院的多重耐藥肺炎克雷伯桿菌也有很強(qiáng)的消殺效果，抗菌譜比較特異，可應(yīng)用于制備防治高毒力肺炎克雷伯桿菌的藥物。且該噬菌體潛伏期短，能快速殺死宿主菌，且毒副作用小，安全性高，溫度、酸堿耐受范圍比較廣且具有良好的親水性，易制成噴灑劑和注射劑，對(duì)感染多重耐藥肺炎克雷伯桿菌的動(dòng)物和被多重耐藥肺炎克雷伯桿菌污染的環(huán)境均有很好的治療、殺滅作用。
17、本專利技術(shù)的裂解k1莢膜型肺炎克雷伯菌的噬菌體yongunavirus?kp03于2024年6月6日保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心(cctcc)，保藏地址：中國·武漢·武漢大學(xué)，郵編430072；保藏號(hào)為cctcc?no：m20241155。
本文檔來自技高網(wǎng)...【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】
1.一株裂解K1莢膜型肺炎克雷伯菌的噬菌體Yongunavirus?KP03，其特征在于：其保藏號(hào)為CCTCCNO：M20241155。
2.權(quán)利要求1所述噬菌體Yongunavirus?KP03在制備防治K1莢膜型肺炎克雷伯桿菌的制劑中的應(yīng)用。
3.防治K1莢膜型肺炎克雷伯桿菌的制劑的制備方法，其特征在于：包括如下步驟：
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述制備方法，其特征在于：步驟S1中，加入噬菌體YongunavirusKP03時(shí)，其活噬菌體與肺炎克雷伯菌宿主菌的數(shù)量比例為1：10。
5.根據(jù)權(quán)利要求3所述制備方法，其特征在于：步驟S1中，培養(yǎng)至溶液澄清后加入DNaseI和RNase?A至終濃度1μg/mL，振蕩培養(yǎng)30min。
6.根據(jù)權(quán)利要求3所述制備方法，其特征在于：步驟S1中，離心條件為4℃、10000×g離心15min。
7.根據(jù)權(quán)利要求3所述制備方法，其特征在于：步驟S2，PEG8000的加入量為：每100mL裂解液中加入10gPEG8000。
8.根據(jù)權(quán)利要求3所述制備方法，其特征在于：步驟
9.根據(jù)權(quán)利要求3所述制備方法，其特征在于：步驟S3中，過濾采用0.22μm孔徑的濾膜。
10.權(quán)利要求3～9任一項(xiàng)所述制備方法得到的防治K1莢膜型肺炎克雷伯桿菌的制劑；進(jìn)一步的，所述制劑為噴灑劑或注射劑。
...【技術(shù)特征摘要】
1.一株裂解k1莢膜型肺炎克雷伯菌的噬菌體yongunavirus?kp03，其特征在于：其保藏號(hào)為cctccno：m20241155。
2.權(quán)利要求1所述噬菌體yongunavirus?kp03在制備防治k1莢膜型肺炎克雷伯桿菌的制劑中的應(yīng)用。
3.防治k1莢膜型肺炎克雷伯桿菌的制劑的制備方法，其特征在于：包括如下步驟：
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述制備方法，其特征在于：步驟s1中，加入噬菌體yongunaviruskp03時(shí)，其活噬菌體與肺炎克雷伯菌宿主菌的數(shù)量比例為1：10。
5.根據(jù)權(quán)利要求3所述制備方法，其特征在于：步驟s1中，培養(yǎng)至溶液澄清后加入dnasei和rnase?a至終濃度...
【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：龔俞，李維，李晨，王玥，潘蘭兵，賴躍，劉鏡，彭昊，王樂平，
申請(qǐng)(專利權(quán))人：貴州省畜牧獸醫(yī)研究所，
類型：發(fā)明
國別省市：
還沒有人留言評(píng)論。發(fā)表了對(duì)其他瀏覽者有用的留言會(huì)獲得科技券。