【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】
本專利技術(shù)屬于油菜育種，具體涉及一類用于甘藍(lán)型油菜抗旱性鑒定及遺傳改良的分子標(biāo)記及其應(yīng)用。
技術(shù)介紹
1、全球人口的不斷增加使得糧油短缺現(xiàn)象日益嚴(yán)重，目前我國(guó)的植物油自給率只有三分之一。甘藍(lán)型油菜是我國(guó)第一大油料作物，其產(chǎn)量占所有油料作物產(chǎn)量的一半以上。此外，油菜還具有飼料、菜用和旅游觀光等多重價(jià)值，也是一種重要的經(jīng)濟(jì)作物。油菜的種植具有不與主糧爭(zhēng)地的優(yōu)勢(shì)，因此，提高油菜的種植面積和產(chǎn)能，對(duì)國(guó)家食用油安全具有重要的意義。
2、甘藍(lán)型油菜主要種植于我國(guó)的長(zhǎng)江流域和西北地區(qū)，這兩個(gè)地區(qū)的油菜生長(zhǎng)容易受到季節(jié)性干旱和長(zhǎng)期干旱的不利影響。2022年長(zhǎng)江中下游地區(qū)受到罕見(jiàn)的夏秋冬連旱，油菜大幅減產(chǎn)。因此，選育抗旱的油菜品種，提高油菜對(duì)干旱脅迫的抵抗能力是維持和提高油菜種植面積和產(chǎn)量的基礎(chǔ)。甘藍(lán)型油菜在苗期遭遇干旱脅迫后造成幼苗失水、葉片萎蔫等現(xiàn)象，抑制油菜正常生長(zhǎng)甚至造成植株死亡。
3、植物幼苗的大部分水分通過(guò)氣孔散失，此外還有一小部分水分通過(guò)葉片表面的角質(zhì)層蒸騰散失。因此，通過(guò)氣孔性狀鑒定甘藍(lán)型油菜中重要的抗旱qtl，篩選并驗(yàn)證抗旱功能基因，開(kāi)發(fā)相應(yīng)的分子標(biāo)記，可用于分子標(biāo)記輔助育種，對(duì)提高甘藍(lán)型油菜的抗旱性和產(chǎn)量、擴(kuò)大種植面積以及提高植物油自給率都具有重要的意義。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
1、本專利技術(shù)的目的在于提供一類用于甘藍(lán)型油菜抗旱性鑒定及遺傳改良的分子標(biāo)記及其應(yīng)用。
2、為實(shí)現(xiàn)上述目的，首先是利用一個(gè)包含167份種質(zhì)資源的甘藍(lán)型油菜自然群體，通過(guò)分析輕度
3、本專利技術(shù)設(shè)計(jì)的分子標(biāo)記引物共有四對(duì)，分別為yx1、yx2、yx3、yx4，核苷酸序列如下所示：
4、yx1正向引物：gacctgagaatgagtctattac（seq?id?no.1）
5、yx1反向引物：tcttgtccatgccagacttg（seq?id?no.2）
6、yx2正向引物：acacgtctcgcttacgtgtt（seq?id?no.3）
7、yx2反向引物：tcggtgagcatgtcccatta（seq?id?no.4）
8、yx3正向引物：gatgtgaccatcaggtctct（seq?id?no.5）
9、yx3反向引物：gctcatcatcaccgattctac（seq?id?no.6）
10、yx4正向引物：tcaccgagcaaagcatcgaa（seq?id?no.7）
11、yx4反向引物：tgaagctgtttccttcatcg（seq?id?no.8）
12、其中，yx1正反引物的擴(kuò)增片段長(zhǎng)度為920-931bp，包含5種單倍型的變異位點(diǎn)，通過(guò)對(duì)擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行一次sanger測(cè)序可實(shí)現(xiàn)5種單倍型油菜的區(qū)分，進(jìn)而分辨其是否屬于抗旱性品種。yx2正反引物的擴(kuò)增片段長(zhǎng)度為122-127?bp，yx3正反引物的擴(kuò)增片段長(zhǎng)度為99-101?bp，yx4正反引物的擴(kuò)增片段長(zhǎng)度為123-130?bp，利用這三對(duì)引物的組合能夠?qū)崿F(xiàn)非抗旱單倍型背景材料的遺傳改良。
13、本專利技術(shù)還提供了所述分子標(biāo)記在甘藍(lán)型油菜抗旱性鑒定及遺傳改良中的應(yīng)用。
14、本專利技術(shù)還提供了一種甘藍(lán)型油菜抗旱性鑒定及遺傳改良的方法，所述方法包括以下步驟：
15、步驟1：提取待測(cè)植株的dna；
16、步驟2：以步驟1得到的dna作為模板，以上述的分子標(biāo)記yx1作為引物，進(jìn)行pcr擴(kuò)增；
17、步驟3：將pcr擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行檢測(cè)。
18、進(jìn)一步的，步驟2中pcr擴(kuò)增的反應(yīng)體系為10μl，包括：5?μl?vazyme?2×taq?plusmaster?mix，0.25?μl正向引物，0.25?μl反向引物，2?μl?dna模板，2.5?μl?ddh2o。
19、進(jìn)一步的，步驟2中pcr擴(kuò)增的反應(yīng)程序?yàn)椋?5℃預(yù)變性5?min；95℃變性30s，58℃退火15s，72℃延伸30s，35個(gè)循環(huán)；最后72℃延伸10?min。
20、與現(xiàn)有技術(shù)相比，本專利技術(shù)的有益效果是：本專利技術(shù)通過(guò)全基因組關(guān)聯(lián)分析定位并篩選得到了候選基因 bnaa10.lea4-5，功能研究結(jié)果表明該基因正向調(diào)控甘藍(lán)型油菜的抗旱性。基于該抗旱功能基因進(jìn)行了單倍型分析并設(shè)計(jì)了相應(yīng)的分子標(biāo)記，該分子標(biāo)記可特異性擴(kuò)增該功能基因或其單倍型，從而判斷待測(cè)植株的抗旱性，并能夠?qū)崿F(xiàn)非抗旱單倍型對(duì)應(yīng)材料的抗旱遺傳改良，該方法簡(jiǎn)單快速、準(zhǔn)確性和重復(fù)性好。將該分子標(biāo)記與田間選擇相結(jié)合，可快速鑒定并選擇抗旱的甘藍(lán)型油菜品種，有助于推進(jìn)甘藍(lán)型油菜抗旱育種的進(jìn)程。
本文檔來(lái)自技高網(wǎng)...【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】
1.?一類用于甘藍(lán)型油菜抗旱性鑒定及遺傳改良的分子標(biāo)記，所述分子標(biāo)記的引物核苷酸序列為：
2.權(quán)利要求1所述的分子標(biāo)記在甘藍(lán)型油菜抗旱性鑒定及遺傳改良中的應(yīng)用。
3.一種甘藍(lán)型油菜抗旱性鑒定及遺傳改良的方法，其特征在于包括以下步驟：
4.如權(quán)利要求3所述的甘藍(lán)型油菜抗旱性鑒定及遺傳改良的方法，其特征在于：所述PCR擴(kuò)增的反應(yīng)體系為5?μL?Vazyme?2×Taq?Plus?Master?Mix，0.25?μL正向引物，0.25?μL反向引物，2?μL?DNA模板，2.5?μL?ddH2O。
5.如權(quán)利要求3所述的甘藍(lán)型油菜抗旱性鑒定及遺傳改良的方法，其特征在于，所述PCR擴(kuò)增的反應(yīng)程序?yàn)椋?5℃預(yù)變性5?min；95℃變性30s，58℃退火15s，72℃延伸30s，35個(gè)循環(huán)；最后72℃延伸10?min。
【技術(shù)特征摘要】
1.?一類用于甘藍(lán)型油菜抗旱性鑒定及遺傳改良的分子標(biāo)記，所述分子標(biāo)記的引物核苷酸序列為：
2.權(quán)利要求1所述的分子標(biāo)記在甘藍(lán)型油菜抗旱性鑒定及遺傳改良中的應(yīng)用。
3.一種甘藍(lán)型油菜抗旱性鑒定及遺傳改良的方法，其特征在于包括以下步驟：
4.如權(quán)利要求3所述的甘藍(lán)型油菜抗旱性鑒定及遺傳改良的方法，其特征在于：所述pcr擴(kuò)增的反應(yīng)體系為5?μl?va...
【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：姚璇，郭亮，房帥，張曉暉，王朝陽(yáng)，
申請(qǐng)(專利權(quán))人：華中農(nóng)業(yè)大學(xué)，
類型：發(fā)明
國(guó)別省市：
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