【技術(shù)實現(xiàn)步驟摘要】
本專利技術(shù)屬于生物醫(yī)藥領(lǐng)域。具體地說，本專利技術(shù)涉及肺癌的診斷和鑒別診斷，特別是血液胞外囊泡microrna的組合及其在肺癌的早期診斷中的應(yīng)用。
技術(shù)介紹
1、原發(fā)性支氣管肺癌簡稱肺癌，是我國及世界各國發(fā)病率和死亡率均居高位的惡性腫瘤，嚴(yán)重危害人類健康。肺癌大致分為兩種主要組織亞型：非小細(xì)胞肺癌(non-smallcell?lung?cancer，nsclc)和小細(xì)胞肺癌，(small?cell?lung?cancer，sclc)，其中非小細(xì)胞肺癌約占80％-85％，包括腺癌、鱗癌、大細(xì)胞未分化癌。由于臨床癥狀隱匿，缺乏有效的指導(dǎo)臨床早期診斷的篩查方法，約75％肺癌患者在確診時已是局部晚期或轉(zhuǎn)移性疾病，錯過了根治性手術(shù)治療的最佳時機(jī)，5年生存率在20％左右。而早期肺癌患者術(shù)后五年生存率是77％-92％。因此，肺癌的早期篩查和早期診斷對于改善患者的預(yù)后至關(guān)重要。
2、目前臨床上用于肺癌早期診斷的方法主要有影像學(xué)檢查(ct、pet-ct等)、病理學(xué)檢查和實驗室檢查等，但這些診斷方法均有一定的局限性。影像學(xué)檢查中廣泛應(yīng)用的低劑量螺旋ct(low-dose?computed?tomography，ldct)存在輻射暴露、假陽性率高和過度診斷等問題。病理學(xué)檢查如支氣管鏡檢查、ct引導(dǎo)下經(jīng)皮肺穿刺活檢術(shù)等，均是有創(chuàng)操作，有氣胸和出血的風(fēng)險。實驗室檢查如痰脫落細(xì)胞學(xué)、血清腫瘤抗原標(biāo)記物(如cea、cyfra21-1等)，對肺癌診斷的敏感性或特異性較差，不能滿足早期診斷的需求。開發(fā)基于液體活檢的無創(chuàng)/微創(chuàng)技術(shù)輔助早期肺癌的鑒別診斷是
3、研究人員利用小rna測序技術(shù)檢測不確定性肺結(jié)節(jié)(indeterminate?pulmonarynodules，ipns)患者血漿外泌體mirnas表達(dá)譜，通過lasso方法構(gòu)建了基于5個mirnas(let-7b-3p、mir-101-3p、mir-125b-5p、mir-150-5p和mir-3168)的循環(huán)外泌體mirna(circulating?sev?mirna，cirsev-mir)診斷模型，用于區(qū)分ipn患者良惡性(pmid:35366907；cn?111218513?a)。另有研究人員采用mirna芯片檢測技術(shù)，確定了小細(xì)胞肺癌患者血清中特異性的外泌體mirna，鑒定了3個血清外泌體mirna組成的panel(mir-200b-3p、mir-3124-5p和mir-92b-5p)可以作為sclc的診斷和預(yù)后標(biāo)志物(pmid:37705067)。這些研究表明，血清/血漿外泌體mirna可作為肺癌早期診斷潛在生物標(biāo)記物。
技術(shù)實現(xiàn)思路
1、本專利技術(shù)的目的在于通過發(fā)現(xiàn)和驗證高特異性的血液胞外囊泡mirna生物標(biāo)志物模型，用于提高肺癌早期診斷的特異性。
2、為此，本專利技術(shù)提供了一種生物標(biāo)志物，這種生物標(biāo)志物能夠在臨床上作為肺癌早期診斷的生物標(biāo)記物。
3、本專利技術(shù)還提供了能夠用于肺癌早期診斷的芯片和試劑盒。
4、本專利技術(shù)還提供了利用所述生物標(biāo)志物進(jìn)行肺癌早期診斷的方法。
5、在第一方面，本專利技術(shù)提供了血液胞外囊泡mirna在制備用于肺癌早期診斷的芯片、檢測試劑或檢測試劑盒中的用途。
6、在具體的實施方式中，所述的血液胞外囊泡mirna是：
7、(i)序列如seq?id?no:1所示的mirna和序列如seq?id?no:2所示的mirna的組合；或者
8、(ii)與(i)所述mirna序列互補的mirna。
9、在優(yōu)選的實施方式中，所述的mirna是分離自人的mirna。
10、在第二方面，本專利技術(shù)提供一種mirna芯片，所述的mirna芯片包括：
11、固相載體；以及
12、有序固定在所述固相載體上的寡核苷酸探針，所述的寡核苷酸探針特異性地結(jié)合mirna；
13、其中，所述的mirna是：
14、(i)序列如seq?id?no:1所示的mirna和序列如seq?id?no:2所示的mirna的組合；或者
15、(ii)與(i)所述mirna序列互補的mirna。
16、在優(yōu)選的實施方式中，所述的寡核苷酸探針含有：
17、互補結(jié)合區(qū)；和/或
18、與固相載體相連的連接區(qū)。
19、在優(yōu)選的實施方式中，所述mirna芯片用于肺癌的早期診斷。
20、在優(yōu)選的實施方式中，所述的mirna是分離自人的mirna。
21、在優(yōu)選的實施方式中，所述的mirna是血液胞外囊泡mirna。
22、在第三方面，本專利技術(shù)通過第二方面所述的mirna芯片的用途，用于制備肺癌的早期診斷試劑盒。
23、在第四方面，本專利技術(shù)提供一種檢測試劑盒，所述的檢測試劑盒裝有檢測mirna的檢測試劑；
24、其中，所述的mirna是：
25、(i)序列如seq?id?no:1所示的mirna，和序列如seq?id?no:2所示的mirna的組合；或者
26、(ii)與(i)所述mirna序列互補的mirna
27、或者，所述檢測試劑盒裝有權(quán)利要求3所述的mirna芯片。
28、在優(yōu)選的實施方式中，所述檢測試劑盒用于肺癌的早期診斷。
29、在優(yōu)選的實施方式中，所述的mirna是分離自人的mirna。
30、在優(yōu)選的實施方式中，所述的mirna是血液胞外囊泡mirna。
31、在第五方面，本專利技術(shù)提供一種分離自血液胞外囊泡的mirna，用于肺癌的早期診斷；
32、其中，所述的mirna是：
33、(i)序列如seq?id?no:1所示的mirna，和序列如seq?id?no:2所示的mirna的組合；或者
34、(ii)與(i)所述mirna序列互補的mirna。
35、在優(yōu)選的實施方式中，所述的mirna是分離自人的mirna。
36、在優(yōu)選的實施方式中，所述的mirna是血液胞外囊泡mirna。
37、在第六方面，本專利技術(shù)提供一種分離的或人工構(gòu)建的前體mirna，所述的前體mirna能在人細(xì)胞內(nèi)剪切并表達(dá)成第五方面所述的mirna。
38、在第七方面，本專利技術(shù)提供一種分離的多核苷酸，所述的多核苷酸能被人細(xì)胞轉(zhuǎn)錄成前體mirna，所述的前體mirna能在人細(xì)胞內(nèi)被剪切且表達(dá)成第五方面所述的mirna。
39、在優(yōu)選的實施方式中，所述的多核苷酸具有式i所示的結(jié)構(gòu)：
40、seq正向-x-seq反向式i
41、式i中，
42、seq正向為能在人細(xì)胞中表達(dá)成所述的mirna的核苷酸序列；
43、seq反向為與seq正向基本上互補或完全互補的核苷酸序列；
44、x為位于seq正向和seq反向之間的間隔序列，并且所述間隔序列本文檔來自技高網(wǎng)...
【技術(shù)保護(hù)點】
1.血液胞外囊泡miRNA在制備用于肺癌早期診斷的芯片、檢測試劑或檢測試劑盒中的用途。
2.如權(quán)利要求1所述的用途，其特征在于，所述的血液胞外囊泡miRNA是：
3.一種miRNA芯片，所述的miRNA芯片包括：
4.權(quán)利要求3所述的miRNA芯片的用途，用于制備肺癌的早期診斷試劑盒。
5.一種檢測試劑盒，所述的檢測試劑盒裝有檢測miRNA的檢測試劑；
6.一種分離自血液胞外囊泡的miRNA，用于肺癌的早期診斷；
7.一種分離的或人工構(gòu)建的前體miRNA，所述的前體miRNA能在人細(xì)胞內(nèi)剪切并表達(dá)成權(quán)利要求6所述的miRNA。
8.一種分離的多核苷酸，所述的多核苷酸能被人細(xì)胞轉(zhuǎn)錄成前體miRNA，所述的前體miRNA能在人細(xì)胞內(nèi)被剪切且表達(dá)成權(quán)利要求6所述的miRNA。
9.一種載體，所述載體含有權(quán)利要求6所述的miRNA或權(quán)利要求8所述的多核苷酸。
10.一種早期診斷肺癌的方法，包括步驟：
11.一種早期診斷肺癌的設(shè)備，所述設(shè)備具有儲存裝置，所述儲存裝置儲存有
...【技術(shù)特征摘要】
1.血液胞外囊泡mirna在制備用于肺癌早期診斷的芯片、檢測試劑或檢測試劑盒中的用途。
2.如權(quán)利要求1所述的用途，其特征在于，所述的血液胞外囊泡mirna是：
3.一種mirna芯片，所述的mirna芯片包括：
4.權(quán)利要求3所述的mirna芯片的用途，用于制備肺癌的早期診斷試劑盒。
5.一種檢測試劑盒，所述的檢測試劑盒裝有檢測mirna的檢測試劑；
6.一種分離自血液胞外囊泡的mirna，用于肺癌的早期診斷；
7.一種分離的或人工構(gòu)建的前體...
【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：毛偉敏，呂巧莉，張大東，馮雁，趙安，郭揚中，李俊玉，劉冬雨，李志寬，
申請(專利權(quán))人：江西省腫瘤醫(yī)院江西省第二人民醫(yī)院，江西省癌癥中心，
類型：發(fā)明
國別省市：
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