本發(fā)明專利技術(shù)公開了一種重組禽流感病毒滅活疫苗，所述疫苗中的重組禽流感病毒包含H9亞型禽流感病毒HA基因，該HA基因的信號肽序列后插入有兩個重復的P29基因。本發(fā)明專利技術(shù)還公開了上述重組禽流感病毒滅活疫苗的應用。本發(fā)明專利技術(shù)的重組禽流感病毒滅活疫苗，在免疫動物體內(nèi)可迅速誘導良好的體液免疫與細胞免疫應答，并且能克服母源抗體的干擾，具有很好的應用前景。
【技術(shù)實現(xiàn)步驟摘要】
本專利技術(shù)涉及生物工程，尤其涉及一種穩(wěn)定表達h9亞型禽流感病毒ha和兩個重復的補體蛋白c3d的最小結(jié)合區(qū)域p29融合蛋白的重組禽流感病毒滅活疫苗及其應用。
技術(shù)介紹
1、h9n2禽流感病毒(aiv)是世界上傳播最廣、危害最大的低致病性禽流感病毒，可以感染包括雞、鴨、鵪鶉等禽類，也可以為其它亞型如h5和h7高致病性禽流感提供內(nèi)部基因，還可以跨宿主直接感染人，每年給我國家禽養(yǎng)殖業(yè)帶來巨大的經(jīng)濟損失，同時也對公共衛(wèi)生造成巨大損害。出于安全性考慮，在全世界范圍內(nèi)，滅活疫苗主要用于防控禽流感病毒。在我國，雖然h9n2?aiv滅活疫苗的使用已經(jīng)超過25年，但是由于母源抗體對疫苗免疫效果的干擾等問題，導致這些疫苗在現(xiàn)地家禽養(yǎng)殖廠中的免疫效果較差，進而導致h9n2?aiv在我國現(xiàn)地家禽養(yǎng)殖廠中持續(xù)不斷地傳播。
2、母源抗體(mdas)是來源于胎盤(人類和哺乳動物)或卵黃囊(禽類)的母本抗體。一方面，mdas可以保護幼齡動物在生命之初的脆弱時期免受許多病原微生物的感染。另一方面，mdas會干擾幼齡動物對疫苗的免疫反應。mdas會隨著年齡的增長而減少，由于mdas干擾疫苗的免疫效果，這會導致免疫空窗期的形成。同時考慮到給幼齡動物接種疫苗的便利性和成本效益，因此開發(fā)一種用于克服幼齡動物mdas干擾的新型禽流感滅活疫苗至關(guān)重要。
3、p29是禽類補體蛋白c3的最終降解產(chǎn)物c3d的最小結(jié)合結(jié)構(gòu)域，已被證明在與抗原結(jié)合時可增強抗體反應和th2免疫反應，但p29或多重復的p29是否可以幫助疫苗克服mdas的干擾尚不清楚。
/>技術(shù)實現(xiàn)思路
1、本專利技術(shù)要解決目前缺乏能克服mdas干擾的安全有效的禽流感滅活疫苗的技術(shù)問題，提供一種重組禽流感病毒滅活疫苗，該疫苗能穩(wěn)定表達h9亞型禽流感病毒主要抗原蛋白ha和兩個重復的補體蛋白c3d的最小結(jié)合區(qū)域p29的融合蛋白，其在免疫動物體內(nèi)，即使存在高滴度的mdas情況下，仍可誘導良好的體液免疫與細胞免疫應答，適用于作為克服mdas干擾的禽流感疫苗。
2、為了解決上述技術(shù)問題，本專利技術(shù)通過如下技術(shù)方案實現(xiàn):
3、在本專利技術(shù)的一個方面，提供了一種重組禽流感病毒，所述重組禽流感病毒包含h9亞型禽流感病毒ha基因，該ha基因的信號肽序列后插入有兩個重復的p29基因，該p29基因編碼的蛋白氨基酸序列如seq?id?no.1所示。
4、優(yōu)選的，所述p29基因的核苷酸序列如seq?id?no.2所示。
5、優(yōu)選的，所述兩個p29基因之間，以及第一個p29基因前端和第二個p29基因末端分別設(shè)有接頭序列。
6、在本專利技術(shù)一個具體實施例中，所述重組禽流感病毒中，兩個重復的p29基因插入在h9亞型禽流感病毒ha基因的信號肽序列后，該兩個p29基因之間，以及第一個p29基因前端和第二個p29基因末端分別設(shè)有接頭序列(linker)，該接頭序列的氨基酸序列如seq?idno.3所示。
7、優(yōu)選的，所述h9亞型禽流感病毒ha基因和插入的兩個重復的p29基因所表達的融合蛋白的氨基酸序列如seq?id?no.4所示。所述h9亞型禽流感病毒ha基因和插入的兩個重復的p29基因的核苷酸序列如seq?id?no.5所示。
8、在本專利技術(shù)的另一方面，還提供了一種重組禽流感病毒滅活疫苗，包含滅活的上述重組禽流感病毒和佐劑。
9、所述重組禽流感病毒滅活疫苗的制備方法，包括以下步驟：
10、在h9亞型禽流感病毒ha基因的信號肽序列后插入兩個重復的p29基因，構(gòu)建重組禽流感病毒，所述p29基因編碼的蛋白氨基酸序列如seq?id?no.1所示；
11、將β-丙內(nèi)脂加入到重組禽流感病毒中，滅活該重組病毒；
12、將滅活的重組禽流感病毒與佐劑混合，得重組禽流感病毒滅活疫苗。
13、在本專利技術(shù)的另一方面，還提供了上述重組禽流感病毒在制備預防和/或治療禽流感的疫苗中的應用。
14、在本專利技術(shù)的另一方面，還提供了上述重組禽流感病毒滅活疫苗在制備預防和/或治療禽流感的生物制品中的應用。
15、本專利技術(shù)的重組禽流感病毒滅活疫苗，是利用低致病性h9n2?aiv為載體，在其主要抗原h(huán)a蛋白的基因序列中插入兩個重復的補體蛋白c3d的最小結(jié)合區(qū)域p29的基因序列，由此構(gòu)建了表達h9亞型禽流感病毒ha融合兩個重復的c3d的最小結(jié)合區(qū)域p29融合蛋白的重組禽流感病毒。本專利技術(shù)獲得的重組禽流感病毒(rh9n2-p29.2)滅活疫苗，可以在有mdas存在的情況下刺激動物產(chǎn)生高水平的免疫反應，能有效克服母源抗體(mdas)的干擾，具有良好的應用前景。
本文檔來自技高網(wǎng)...
【技術(shù)保護點】
1.一種重組禽流感病毒，其特征在于，所述重組禽流感病毒包含H9亞型禽流感病毒HA基因，該HA基因的信號肽序列后插入有兩個重復的P29基因，該P29基因編碼的蛋白氨基酸序列如SEQ?ID?NO.1所示。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的重組禽流感病毒，其特征在于，所述P29基因的核苷酸序列如SEQ?ID?NO.2所示。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的重組禽流感病毒，其特征在于，所述兩個P29基因之間，以及第一個P29基因前端和第二個P29基因末端分別設(shè)有接頭序列。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的重組禽流感病毒，其特征在于，所述接頭序列的氨基酸序列如SEQ?ID?NO.3所示。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的重組禽流感病毒，其特征在于，所述H9亞型禽流感病毒HA基因和插入的兩個重復的P29基因所表達的融合蛋白的氨基酸序列如SEQ?ID?NO.4所示。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的重組禽流感病毒，其特征在于，所述H9亞型禽流感病毒HA基因和插入的兩個重復的P29基因的核苷酸序列如SEQ?ID?NO.5所示。
7.一種重組禽流感病毒滅活疫苗，其特征在于，包含權(quán)利要求1-6任一項所述的重組禽流感病毒的滅活病毒和佐劑。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的重組禽流感病毒滅活疫苗，其特征在于，所述重組禽流感病毒滅活疫苗的制備方法，包括以下步驟：
9.權(quán)利要求1-6任一項所述的重組禽流感病毒在制備預防和/或治療禽流感的疫苗中的應用。
10.權(quán)利要求7或8所述重組禽流感病毒滅活疫苗在制備預防和/或治療禽流感的生物制品中的應用。
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【技術(shù)特征摘要】
1.一種重組禽流感病毒，其特征在于，所述重組禽流感病毒包含h9亞型禽流感病毒ha基因，該ha基因的信號肽序列后插入有兩個重復的p29基因，該p29基因編碼的蛋白氨基酸序列如seq?id?no.1所示。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的重組禽流感病毒，其特征在于，所述p29基因的核苷酸序列如seq?id?no.2所示。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的重組禽流感病毒，其特征在于，所述兩個p29基因之間，以及第一個p29基因前端和第二個p29基因末端分別設(shè)有接頭序列。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的重組禽流感病毒，其特征在于，所述接頭序列的氨基酸序列如seq?id?no.3所示。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的重組禽流感病毒，其特征在于，所述h9亞型禽流感病毒ha基因和插入...
【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：李澤君，潘學，劉芹防，閆大為，滕巧泱，周凡，苑純秀，許榜豐，
申請(專利權(quán))人：中國農(nóng)業(yè)科學院上海獸醫(yī)研究所中國動物衛(wèi)生與流行病學中心上海分中心，
類型：發(fā)明
國別省市：
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