【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】
本專(zhuān)利技術(shù)涉及生物醫(yī)藥，具體涉及一種負(fù)載原花青素的no釋放型普魯士藍(lán)仿生復(fù)合材料及其制備方法和應(yīng)用。
技術(shù)介紹
1、矽肺是最常見(jiàn)、進(jìn)展最快、危害最嚴(yán)重的職業(yè)性塵肺類(lèi)型，是指由于長(zhǎng)期反復(fù)吸入游離二氧化硅晶體顆粒導(dǎo)致的以肺部彌漫性肺纖維化為主的全身性疾病，病理特征為間質(zhì)性肺纖維化。在肺纖維化發(fā)病過(guò)程中，肺組織局部微環(huán)境的改變決定了組織對(duì)各種損傷的應(yīng)答反應(yīng)，這些反應(yīng)的性質(zhì)和強(qiáng)度決定了組織炎癥反應(yīng)，創(chuàng)傷愈合和纖維化的發(fā)生發(fā)展與轉(zhuǎn)歸。在矽肺纖維化發(fā)展過(guò)程中的主要效應(yīng)細(xì)胞有巨噬細(xì)胞、成纖維細(xì)胞、上皮細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞和淋巴細(xì)胞等。當(dāng)巨噬細(xì)胞功能紊亂時(shí)，其修復(fù)和穩(wěn)態(tài)功能被顛覆并分泌大量炎性細(xì)胞因子和促進(jìn)血小板衍生生長(zhǎng)因子，間接激活并調(diào)節(jié)肺組織中內(nèi)皮細(xì)胞、上皮細(xì)胞以及成纖維細(xì)胞的激活和遷移并誘導(dǎo)細(xì)胞外基質(zhì)沉積影響纖維化的進(jìn)程。巨噬細(xì)胞和成纖維細(xì)胞在結(jié)構(gòu)和功能上相互調(diào)控，在病理過(guò)程中巨噬細(xì)胞表現(xiàn)為極化、調(diào)節(jié)免疫和體液平衡為主，成纖維細(xì)胞則被激活分化為肌成纖維細(xì)胞并分泌膠原，二者相互作用共同導(dǎo)致矽肺纖維化。
2、因此，調(diào)控巨噬細(xì)胞極化是一種非常有前景的治療矽肺纖維化的手段。雖然原花青素可以抑制raw264.7巨噬細(xì)胞nlrp3炎癥小體的激活，以及單核細(xì)胞來(lái)源巨噬細(xì)胞向肺部募集從而發(fā)揮抗矽肺纖維化作用，但是單純的原花青素系統(tǒng)性給藥在體內(nèi)呈現(xiàn)非特異性分布、生物利用度低、滯留時(shí)間短以及應(yīng)用有效劑量大等缺陷，從而限制治療效果。如何提高原花青素的生物利用度以及靶向分布是原花青素治療矽肺纖維化的關(guān)鍵問(wèn)題。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路>
1、針對(duì)上述現(xiàn)有技術(shù)的不足，本專(zhuān)利技術(shù)的目的是提供一種負(fù)載原花青素的no釋放型普魯士藍(lán)仿生復(fù)合材料及其制備方法和應(yīng)用，本專(zhuān)利技術(shù)的納米復(fù)合物材料抗矽肺纖維化效果良好，能實(shí)現(xiàn)緩解矽肺纖維化，可用于開(kāi)發(fā)治療矽肺纖維化的潛在藥物。
2、為解決上述技術(shù)問(wèn)題，本專(zhuān)利技術(shù)采用如下技術(shù)方案：
3、一種負(fù)載原花青素的no釋放型普魯士藍(lán)仿生復(fù)合材料，簡(jiǎn)寫(xiě)為hmp?nps，所述復(fù)合材料包括no釋放型普魯士藍(lán)、原花青素、仿生膜和透明質(zhì)酸，所述原花青素物理封裝于no釋放型普魯士藍(lán)納米顆粒中，所述仿生膜偽裝在no釋放型普魯士藍(lán)的最外層，所述透明質(zhì)酸修飾到所述仿生膜的表面。
4、在本專(zhuān)利技術(shù)優(yōu)選的實(shí)施方式中，所述復(fù)合材料粒徑為200nm～250nm。
5、本專(zhuān)利技術(shù)的另一個(gè)目的是提供一種上述所述的負(fù)載原花青素的no釋放型普魯士藍(lán)仿生復(fù)合材料的制備方法，包括以下步驟：
6、將收集的巨噬細(xì)胞超聲破碎后反復(fù)凍融，經(jīng)離心，得到仿生膜，再經(jīng)pbs溶解制得仿生膜溶液；
7、將透明質(zhì)酸在活化劑作用下攪拌活化后，加入氨基聚乙二醇2000，得到混合液，混合液經(jīng)透析去除游離的n-羥基丁二酰亞胺和1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亞胺后，冷凍干燥得到活化后的透明質(zhì)酸，將活化后的透明質(zhì)酸溶于pbs溶液中，得到透明質(zhì)酸溶液；
8、將原花青素和no釋放型普魯士藍(lán)加入水中，攪拌得到負(fù)載原花青素的no釋放型普魯士藍(lán)；
9、將負(fù)載原花青素的no釋放型普魯士藍(lán)和仿生膜的pbs溶液混合后反復(fù)擠壓，再加入透明質(zhì)酸溶液，孵育，得到負(fù)載原花青素的普魯士藍(lán)仿生復(fù)合材料。
10、在本專(zhuān)利技術(shù)優(yōu)選的實(shí)施方式中，所述透明質(zhì)酸與dspe-peg2000-nh2的質(zhì)量比為3～5:1。
11、在本專(zhuān)利技術(shù)優(yōu)選的實(shí)施方式中，所述原花青素與no釋放型普魯士藍(lán)的質(zhì)量比為1～2:1。
12、在本專(zhuān)利技術(shù)優(yōu)選的實(shí)施方式中，所述仿生膜、透明質(zhì)酸、負(fù)載原花青素的no釋放型普魯士藍(lán)的質(zhì)量比為5～8:5～8:4。
13、在本專(zhuān)利技術(shù)優(yōu)選的實(shí)施方式中，所述活化劑為1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亞胺和n-羥基丁二酰亞胺，1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亞胺和n-羥基丁二酰亞胺的質(zhì)量比為0.5～1:2，透明質(zhì)酸與n-羥基丁二酰亞胺的質(zhì)量比為1:10。
14、在本專(zhuān)利技術(shù)優(yōu)選的實(shí)施方式中，活化反應(yīng)攪拌轉(zhuǎn)速為600～800rmp/min，活化反應(yīng)時(shí)間為18～24h，所述超聲功率為80～100w，超聲時(shí)間為8～10min，反復(fù)凍融溫度為-80℃和25～37℃，所述反復(fù)凍融次數(shù)為3～5次，離心轉(zhuǎn)速為13000～18000rmp/min。
15、在本專(zhuān)利技術(shù)優(yōu)選的實(shí)施方式中，原花青素和no釋放型普魯士藍(lán)加入水中的攪拌轉(zhuǎn)速為600～800rmp/min，反應(yīng)溫度為25～30℃。
16、本專(zhuān)利技術(shù)的第三個(gè)目的是提供一種上述所述的負(fù)載原花青素的普魯士藍(lán)仿生復(fù)合材料在靶向治療矽肺纖維化中的應(yīng)用。
17、為避免機(jī)體免疫系統(tǒng)清除，本專(zhuān)利技術(shù)采用巨噬細(xì)胞膜仿生膜系統(tǒng)偽裝no釋放型普魯士藍(lán)納米粒子以降低系統(tǒng)免疫原性，并能夠?qū)崿F(xiàn)免疫逃逸。然而，盡管仿生復(fù)合材料具有許多優(yōu)點(diǎn)，但在制備過(guò)程和應(yīng)用過(guò)程中也存在一些缺陷，如高成本，靶向性低等缺陷。因此，本專(zhuān)利技術(shù)利用透明質(zhì)酸可以特異性識(shí)別肺纖維化區(qū)域炎癥巨噬細(xì)胞cd44受體的特性，最終修飾巨噬細(xì)胞膜仿生膜系統(tǒng)偽裝no釋放型普魯士藍(lán)納米粒子，以實(shí)現(xiàn)藥物靶向遞送治療矽肺纖維化的目的。
18、與現(xiàn)有技術(shù)相比，本專(zhuān)利技術(shù)具有的有益效果是：
19、1、本專(zhuān)利技術(shù)設(shè)計(jì)了一種安全性高、可生物降解的仿生納米復(fù)合物，利用仿生膜和透明質(zhì)酸修飾的設(shè)計(jì)特點(diǎn)，實(shí)現(xiàn)藥物在病變部位的特異性聚集、滲透和提高靶細(xì)胞對(duì)藥物的生物利用度。本專(zhuān)利技術(shù)的復(fù)合納米材料由no釋放型普魯士藍(lán)對(duì)原花青素進(jìn)行物理封裝，巨噬細(xì)胞仿生膜偽裝于納米復(fù)合材料的最外層，透明質(zhì)酸修飾到仿生膜表面。在矽肺纖維化發(fā)病過(guò)程中，巨噬細(xì)胞作為平衡組織微環(huán)境的關(guān)鍵調(diào)節(jié)因子參與到機(jī)體固有免疫之中，單核細(xì)胞來(lái)源巨噬細(xì)胞向肺部進(jìn)行募集，最外層的仿生膜通過(guò)其源細(xì)胞(巨噬細(xì)胞)固有免疫逃逸和被招募特性，實(shí)現(xiàn)納米復(fù)合材料向病變部位募集。利用透明質(zhì)酸與炎性巨噬細(xì)胞表面受體cd44相互結(jié)合的特性，實(shí)現(xiàn)靶細(xì)胞對(duì)納米復(fù)合材料的有效利用，提高其防治矽肺纖維化效果。以上述結(jié)果設(shè)計(jì)制備的一種負(fù)載原花青素的仿生hmp@pc?nps復(fù)合材料，利用原花青素抗矽肺纖維化效應(yīng)，實(shí)現(xiàn)矽肺纖維化的靶向治療。
20、2、本專(zhuān)利技術(shù)采用π-π堆疊和疏水相互作用將原花青素裝載到no釋放型-pb?nps中，制得負(fù)載原花青素的no釋放型-pb@pc?nps，將負(fù)載原花青素的no釋放型-pb@pc?nps與仿生膜混合并反復(fù)擠壓進(jìn)行生物偽裝，最后將透明質(zhì)酸修飾到仿生膜表面即得最終產(chǎn)物hmp@pcnps，本專(zhuān)利技術(shù)的納米復(fù)合物材料抗矽肺纖維化效果良好，能實(shí)現(xiàn)緩解矽肺纖維化，可用于開(kāi)發(fā)治療矽肺纖維化的潛在藥物。
21、3、除了負(fù)載治療和/或預(yù)防矽肺纖維化的藥物，本專(zhuān)利技術(shù)提供的這種負(fù)載藥物的仿生納米復(fù)合材料可以通過(guò)替代不同仿生膜類(lèi)型和藥物，利用仿生膜的“歸巢效應(yīng)”和不同藥物的作用機(jī)理，作為其他疾病治療的替代平臺(tái)，如腫瘤、肝纖維化等，故本專(zhuān)利技術(shù)結(jié)合了仿生膜膜涂層和靶向修飾的納米復(fù)合材料，可以提供多種功能和優(yōu)勢(shì)來(lái)治療多種疾病。
22、4、本專(zhuān)利技術(shù)可改善藥劑的免疫原性和本文檔來(lái)自技高網(wǎng)...
【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】
1.一種負(fù)載原花青素的NO釋放型普魯士藍(lán)仿生復(fù)合材料，其特征在于，所述復(fù)合材料包括NO釋放型普魯士藍(lán)、原花青素、仿生膜和透明質(zhì)酸，所述原花青素物理封裝于NO釋放型普魯士藍(lán)中，所述仿生膜偽裝在NO釋放型普魯士藍(lán)的最外層，所述透明質(zhì)酸修飾到所述仿生膜的表面。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的負(fù)載原花青素的NO釋放型普魯士藍(lán)仿生復(fù)合材料，其特征在于，所述復(fù)合材料粒徑為200nm～250nm。
3.一種權(quán)利要求1或2所述的負(fù)載原花青素的NO釋放型普魯士藍(lán)仿生復(fù)合材料的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的負(fù)載原花青素的NO釋放型普魯士藍(lán)仿生復(fù)合材料的制備方法，其特征在于，所述透明質(zhì)酸與氨基聚乙二醇2000的質(zhì)量比為3～5:1。
5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的負(fù)載原花青素的NO釋放型普魯士藍(lán)仿生復(fù)合材料的制備方法，其特征在于，所述原花青素與NO釋放型普魯士藍(lán)的質(zhì)量比為1～2:1。
6.根據(jù)權(quán)利要求3所述的負(fù)載原花青素的NO釋放型普魯士藍(lán)仿生復(fù)合材料的制備方法，其特征在于，所述仿生膜、透明質(zhì)酸、負(fù)載原花青素的NO釋放型普魯
7.根據(jù)權(quán)利要求3所述的負(fù)載原花青素的NO釋放型普魯士藍(lán)仿生復(fù)合材料的制備方法，其特征在于，所述活化劑為1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亞胺和N-羥基丁二酰亞胺，1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亞胺和N-羥基丁二酰亞胺的質(zhì)量比為0.5～1:2，透明質(zhì)酸與N-羥基丁二酰亞胺的質(zhì)量比為1:10。
8.根據(jù)權(quán)利要求3所述的負(fù)載原花青素的NO釋放型普魯士藍(lán)仿生復(fù)合材料的制備方法，其特征在于，活化反應(yīng)溫度為25℃，活化反應(yīng)時(shí)間為18～24h。
9.根據(jù)權(quán)利要求3所述的負(fù)載原花青素的NO釋放型普魯士藍(lán)仿生復(fù)合材料的制備方法，其特征在于，制備負(fù)載原花青素的NO釋放型普魯士藍(lán)時(shí)，反應(yīng)溫度為25～30℃。
10.一種權(quán)利要求1或2所述的負(fù)載原花青素的NO釋放型普魯士藍(lán)仿生復(fù)合材料在制備靶向治療矽肺纖維化藥物中的應(yīng)用。
...【技術(shù)特征摘要】
1.一種負(fù)載原花青素的no釋放型普魯士藍(lán)仿生復(fù)合材料，其特征在于，所述復(fù)合材料包括no釋放型普魯士藍(lán)、原花青素、仿生膜和透明質(zhì)酸，所述原花青素物理封裝于no釋放型普魯士藍(lán)中，所述仿生膜偽裝在no釋放型普魯士藍(lán)的最外層，所述透明質(zhì)酸修飾到所述仿生膜的表面。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的負(fù)載原花青素的no釋放型普魯士藍(lán)仿生復(fù)合材料，其特征在于，所述復(fù)合材料粒徑為200nm～250nm。
3.一種權(quán)利要求1或2所述的負(fù)載原花青素的no釋放型普魯士藍(lán)仿生復(fù)合材料的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的負(fù)載原花青素的no釋放型普魯士藍(lán)仿生復(fù)合材料的制備方法，其特征在于，所述透明質(zhì)酸與氨基聚乙二醇2000的質(zhì)量比為3～5:1。
5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的負(fù)載原花青素的no釋放型普魯士藍(lán)仿生復(fù)合材料的制備方法，其特征在于，所述原花青素與no釋放型普魯士藍(lán)的質(zhì)量比為1～2:1。
6.根據(jù)權(quán)利要求3所述的負(fù)載原花青素的no釋放型...
【專(zhuān)利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：孫岳，楊安寧，姜怡鄧，張慧萍，余夢(mèng)雪，
申請(qǐng)(專(zhuān)利權(quán))人：寧夏醫(yī)科大學(xué)，
類(lèi)型：發(fā)明
國(guó)別省市：
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