【技術(shù)實現(xiàn)步驟摘要】
本專利技術(shù)屬于生物，具體涉及一種分泌中和活性的產(chǎn)氣莢膜梭菌etx單克隆抗體的雜交瘤細胞株及其應(yīng)用。
技術(shù)介紹
1、產(chǎn)氣莢膜梭菌（clostridium?perfringens,cp）又名魏氏梭菌，是一種重要的人畜共患革蘭氏陽性厭氧菌，雖屬于厭氧菌，但其仍然可以在有氧環(huán)境以及低濃度超氧化物的情況下生存，傳播范圍廣，危害大（kiu?r,?hall?l?j.?an?update?on?the?human?andanimal?enteric?pathogen?clostridium?perfringens[j].?emerg?microbes?infect,2018,7(1):141.）。菌體呈粗桿狀，邊緣筆直，兩頭鈍圓，菌端較齊，沒有鞭毛，不能運動，單個或者成對存在，偶爾呈現(xiàn)短鏈排列，能夠產(chǎn)孢子，有莢膜，作為動物體內(nèi)的病原菌，能夠產(chǎn)生莢膜是區(qū)別于其他梭菌的特點之一。繁殖溫度范圍廣（35℃-37℃），生長最佳ph值為6.5至7.5（dave?g?a.?a?rapid?qualitative?assay?for?detection?of?clostridiumperfringens?in?canned?food?products[j].?acta?biochim?pol,?2017,64(2):207-213.）。在富含碳源的培養(yǎng)基中，菌落呈灰白色，表面光滑且有邊緣，中央稍凹陷，散發(fā)出惡臭氣味。該菌種的芽孢對外界環(huán)境條件具有極強的耐受性，可以在干燥、高溫等極端條件下存活，并在適宜條件下重新萌發(fā)生長。此外，產(chǎn)氣莢膜梭菌的細胞壁含有較多的乙酸
2、產(chǎn)氣莢膜梭菌可分泌?20?多種已鑒定的毒素，毒素分型依賴于其攜帶?cpa/plc、cpb、etx、iap/ibp/itx、cpe?和?netb?基因，這些基因分別編碼?α、β、ε、ι、cpe和?netb?六種毒素（yao?p?y,?annamaraju?p.?clostridium?perfringens?infection[j].?2024）。ε毒素（etx）由產(chǎn)氣莢膜梭菌?b?型和?d?型菌株的?etx?基因質(zhì)粒編碼，它是一種無活性的原毒素，在蛋白酶去除?n?端和?c?端肽后被激活（minami?j,?katayama?s,?matsushita?o,?etal.?lambda-toxin?of?clostridium?perfringens?activates?the?precursor?ofepsilon-toxin?by?releasing?its?n-and?c-terminal?peptides?[j].?microbiologyand?immunology,?2013,?41(7):?527-35.）。etx?會導(dǎo)致綿羊、山羊和牛等反芻家畜產(chǎn)生迅速的致命的腸毒血癥，每年導(dǎo)致畜牧業(yè)遭受巨大損失。當(dāng)注射到大鼠體內(nèi)時，毒素主要積聚在腎臟和大腦中，導(dǎo)致血腦屏障損傷并可能導(dǎo)致死亡。etx?是第三種最有效的生物毒素，僅次于肉毒桿菌神經(jīng)毒素和破傷風(fēng)毒素，對小鼠的?50%?致死劑量（ld50）為?65-110?ng/kg，因此被美國疾病預(yù)防控制中心列為?b類生物制劑（alves?g?g,?machado?de?ávila?r?a,?chvez-ol?rtegui?c?d,?et?al.?clostridium?perfringens?epsilon?toxin:?the?thirdmost?potent?bacterial?toxin?known?[j].?anaerobe,?2014,?30:102-7.）。etx可引起家禽和家畜特別是反芻動物強烈的腸毒血癥，給畜牧業(yè)造成嚴重的經(jīng)濟損失。因此，實現(xiàn)etx的減毒乃至無毒的同時保留其免疫原性，進而制備適當(dāng)?shù)囊呙绲壬镏苿哂薪?jīng)濟性和生物安全性兩方面的重要意義。
3、目前，對于牛、羊和家兔等動物通常采用傳統(tǒng)的天然毒素滅活疫苗進行免疫預(yù)防，但缺少相關(guān)的毒素檢測和治療方法。由于天然毒素滅活疫苗抗原成分復(fù)雜，有效含量較低，容易引起動物的副反應(yīng)，導(dǎo)致無法用于犬、豬等動物的預(yù)防。已有的研究表明，通過單克隆抗體的制備，能夠為某些本文檔來自技高網(wǎng)...
【技術(shù)保護點】
1.一種分泌抗產(chǎn)氣莢膜梭菌ETX單克隆抗體的雜交瘤細胞株，所述雜交瘤細胞株選自保藏號CGMCC?NO.?46042或CGMCC?NO.?46043中的任意一種，所述細胞株分泌的單克隆抗體具有中和活性。
2.一種如權(quán)利要求1所述雜交瘤細胞株的篩選方法，所述篩選方法包括如下步驟：
3.如權(quán)利要求2所述方法，在步驟S1中，所述天然ETX是指滅活后的產(chǎn)氣莢膜梭菌天然ETX；
4.一種抗產(chǎn)氣莢膜梭菌ETX單克隆抗體；所述單克隆抗體是從權(quán)利要求1所述雜交瘤細胞株的培養(yǎng)液中獲得，或用權(quán)利要求1所述雜交瘤細胞株接種到小鼠腹腔產(chǎn)生腹水而獲得。
5.一種產(chǎn)氣莢膜梭菌ETX毒素的抗原檢測方法，所述方法中包被抗體為無中和活性的產(chǎn)氣莢膜梭菌ETX單克隆抗體，所述檢測抗體為HRP標(biāo)記的具有中和活性的產(chǎn)氣莢膜梭菌ETX單克隆抗體。
6.如權(quán)利要求5所述檢測方法，所述無中和活性的產(chǎn)氣莢膜梭菌ETX單克隆抗體是由權(quán)利要求2篩選的無中和活性的雜交瘤細胞株分泌的；所述HRP標(biāo)記的單克隆抗體是將權(quán)利要求4所述單克隆抗體的腹水純化后進行HRP偶聯(lián)標(biāo)記的單克隆抗體
7.如權(quán)利要求5所述檢測方法，所述無中和活性的單克隆抗體的包被稀釋度為100?ng/孔；所述HRP標(biāo)記的單克隆抗體的檢測稀釋度為1:4000。
8.一種如權(quán)利要求1所述雜交瘤細胞或如權(quán)利要求4所述單克隆抗體在制備檢測產(chǎn)氣莢膜梭菌ETX的試劑中的應(yīng)用。
9.一種檢測產(chǎn)氣莢膜梭菌ETX的試劑盒，所述試劑盒包含如產(chǎn)氣莢膜梭菌ETX單克隆抗體；所述單克隆抗體包括具有中和活性的產(chǎn)氣莢膜梭菌ETX單克隆抗體和無中和活性的產(chǎn)氣莢膜梭菌ETX單克隆抗體；所述具有中和活性的單克隆抗體是由權(quán)利要求1所述的具有中和活性的雜交瘤細胞株分泌的；所述無中和活性的單克隆抗體是由權(quán)利要求2篩選的無中和活性的雜交瘤細胞株分泌的。
10.如權(quán)利要求9所述試劑盒，所述試劑盒可以為ELISA檢測試劑盒、免疫組化試劑盒、免疫熒光試劑盒和/或原位雜交染色試劑盒中的一種或多種。
...【技術(shù)特征摘要】
1.一種分泌抗產(chǎn)氣莢膜梭菌etx單克隆抗體的雜交瘤細胞株，所述雜交瘤細胞株選自保藏號cgmcc?no.?46042或cgmcc?no.?46043中的任意一種，所述細胞株分泌的單克隆抗體具有中和活性。
2.一種如權(quán)利要求1所述雜交瘤細胞株的篩選方法，所述篩選方法包括如下步驟：
3.如權(quán)利要求2所述方法，在步驟s1中，所述天然etx是指滅活后的產(chǎn)氣莢膜梭菌天然etx；
4.一種抗產(chǎn)氣莢膜梭菌etx單克隆抗體；所述單克隆抗體是從權(quán)利要求1所述雜交瘤細胞株的培養(yǎng)液中獲得，或用權(quán)利要求1所述雜交瘤細胞株接種到小鼠腹腔產(chǎn)生腹水而獲得。
5.一種產(chǎn)氣莢膜梭菌etx毒素的抗原檢測方法，所述方法中包被抗體為無中和活性的產(chǎn)氣莢膜梭菌etx單克隆抗體，所述檢測抗體為hrp標(biāo)記的具有中和活性的產(chǎn)氣莢膜梭菌etx單克隆抗體。
6.如權(quán)利要求5所述檢測方法，所述無中和活性的產(chǎn)氣莢膜梭菌etx單克隆抗體是由權(quán)利要求2篩選的無中和活性的雜交瘤細胞株分泌...
【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：劉瑩，杜吉革，印春生，潘晨帆，
申請(專利權(quán))人：中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所，
類型：發(fā)明
國別省市：
還沒有人留言評論。發(fā)表了對其他瀏覽者有用的留言會獲得科技券。