【技術(shù)實現(xiàn)步驟摘要】
本專利技術(shù)涉及生物醫(yī)藥，尤其涉及一種硫酸酯化單唾液酸神經(jīng)節(jié)苷脂及其制備方法與應(yīng)用。
技術(shù)介紹
1、神經(jīng)節(jié)苷脂(ganglioside，gls)是一類具有重要生物學(xué)功能的鞘糖脂，它們在細胞信號傳導(dǎo)、細胞識別和神經(jīng)發(fā)育等過程中起著關(guān)鍵作用；gls可被血小板識別，分泌促炎因子和神經(jīng)遞質(zhì)，從而調(diào)節(jié)神經(jīng)元和免疫細胞的功能。
2、gls結(jié)構(gòu)復(fù)雜，由三個主要組分構(gòu)成：鞘氨醇、長鏈脂肪酸以及寡糖鏈，鞘氨醇的堿基通過糖苷鍵與神經(jīng)酰胺相連。研究人員發(fā)現(xiàn)gls在神經(jīng)節(jié)中含量較高，目前已在脊椎動物中鑒定出180余種不同結(jié)構(gòu)的gls。此外，在海參綱、海星綱和海膽綱等棘皮動物中也發(fā)現(xiàn)了神經(jīng)節(jié)苷脂，其結(jié)構(gòu)與脊椎動物中的gls有明顯差異：(1)脊椎動物中g(shù)ls與神經(jīng)酰胺相連的糖基為半乳糖，棘皮動物中大多數(shù)gls與神經(jīng)酰胺相連的糖基則為葡萄糖；(2)棘皮動物的神經(jīng)節(jié)苷脂含有包括n-乙酰神經(jīng)氨酸、n-羥乙酰神經(jīng)氨酸和8-硫酸酯基-n-羥乙酰神經(jīng)氨酸在內(nèi)的多種唾液酸，而脊椎動物中的gsl通常僅含有neu5ac一種唾液酸；(3)脊椎動物中，gls的唾液酸通過α2-3鍵與半乳糖相連，而棘皮動物則通過α2-6鍵將gls的唾液酸與葡萄糖連接在一起。
3、由于gls在神經(jīng)系統(tǒng)中含量較高，脊椎動物的腦組織成為了獲取gls的首選生物材料，但隨著對gls的研究深入，研究人員發(fā)現(xiàn)海膽、海參和海星等棘皮動物也含有g(shù)ls，并通過體外實驗證明：棘皮動物中的gls同樣具有較好的促神經(jīng)突起生長活性，且棘皮動物體內(nèi)的gls對神經(jīng)系統(tǒng)的發(fā)育和神經(jīng)退行性疾病的干預(yù)效果優(yōu)于脊椎
4、電噴霧-四極桿-飛行時間質(zhì)譜(esi-q-tof-ms)是一種先進的質(zhì)譜技術(shù)，該設(shè)備集成了esi的高效離子化、四極桿的質(zhì)量篩選和飛行時間質(zhì)譜的高分辨率功能，已成為分析復(fù)雜混合物和鑒定未知化合物的強大工具。盡管目前已有通過色譜質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)對神經(jīng)節(jié)苷脂進行結(jié)構(gòu)鑒定的報道，但針對特定類別的gls，仍缺乏詳細的質(zhì)譜碎裂規(guī)律。
5、因此，有必要提供一種新的從棘皮動物中分離出的gls，并利用波譜學(xué)技術(shù)對分離出的gls進行詳細的結(jié)構(gòu)鑒定，這不僅為棘皮動物gls的結(jié)構(gòu)分析提供了科學(xué)的理論基礎(chǔ)，而且為未來探索棘皮動物gls的生物活性研究奠定了重要的參考價值。此外，通過研究gls的質(zhì)譜碎裂規(guī)律，可以為開發(fā)新的分析方法和策略提供指導(dǎo)，從而推動gls在生物醫(yī)藥領(lǐng)域的應(yīng)用，這對于理解神經(jīng)系統(tǒng)疾病的發(fā)病機制、開發(fā)新的治療藥物以及探索gls的其他生物學(xué)功能都具有重要意義。
技術(shù)實現(xiàn)思路
1、本專利技術(shù)的目的在于提供一種硫酸酯化單唾液酸神經(jīng)節(jié)苷脂及其制備方法與應(yīng)用，以期為開發(fā)新型的gls資源奠定基礎(chǔ)，并實現(xiàn)刺參性腺的高值化綜合利用。
2、為了實現(xiàn)上述專利技術(shù)目的，本專利技術(shù)提供以下技術(shù)方案：
3、本專利技術(shù)提供了一種硫酸酯化單唾液酸神經(jīng)節(jié)苷脂，所述神經(jīng)節(jié)苷脂的結(jié)構(gòu)式為3galnac-4(neuacs2α2-3)galβ1-cer。
4、本專利技術(shù)提供了一種所述硫酸酯化單唾液酸神經(jīng)節(jié)苷脂的制備方法，利用氯仿-甲醇抽濾法提取刺參性腺中的總脂，再利用硅膠柱層析法對提取得到的總脂進行分離，得到粗神經(jīng)節(jié)苷脂，將粗神經(jīng)節(jié)苷脂純化后，得到硫酸酯化單唾液酸神經(jīng)節(jié)苷脂。
5、優(yōu)選的，所述氯仿和甲醇的混合質(zhì)量比為1.6～2.4：0.8～1.2。
6、優(yōu)選的，所述刺參性腺為刺參性腺凍干粉，所述氯仿-甲醇的用量為刺參性腺凍干粉體積的8～12倍。
7、優(yōu)選的，硅膠柱層析時首先利用丙酮溶液洗脫糖脂及色素，再用甲醇溶液洗脫磷脂。
8、優(yōu)選的，所述純化的方法為弱陰離子交換層析和凝膠排阻層析法。
9、本專利技術(shù)還提供了一種包含所述硫酸酯化單唾液酸神經(jīng)節(jié)苷脂或按照所述方法制備得到的硫酸酯化單唾液酸神經(jīng)節(jié)苷脂的制劑。
10、本專利技術(shù)進一步提供了一種所述的硫酸酯化單唾液酸神經(jīng)節(jié)苷脂或按照所述方法制備得到的硫酸酯化單唾液酸神經(jīng)節(jié)苷脂或所述的制劑在制備促進神經(jīng)再生或營養(yǎng)腦細胞的藥物中的應(yīng)用。
11、本專利技術(shù)利用氯仿-甲醇抽濾和硅膠柱層析法對粗神經(jīng)節(jié)苷脂進行了提取分離，得率為6.52％，再利用弱陰離子交換層析和凝膠排阻層析分離技術(shù)純化粗神經(jīng)節(jié)苷脂，得率為24mg/50g。相比于以豬腦為原料分離神經(jīng)節(jié)苷脂的得率0.502mg/50g，本專利技術(shù)得率較高，約為豬腦原料的47倍，證明了刺參性腺中神經(jīng)節(jié)苷脂含量相對較高，有望代替豬腦成為神經(jīng)節(jié)苷脂的主要來源物質(zhì)。
12、本專利技術(shù)通過m/z＝205和m/z＝367等離子碎片峰可推斷出硫酸酯化單唾液酸神經(jīng)節(jié)苷脂sj-1的糖鏈部分含有g(shù)alnac和galnac+gal；再通過hplc分析可知sj-1僅含有半乳糖；sj-1以c16:1和c18:1為主，sj-1中c16:1和c18:0的含量分別為50.9％和32.9％；sj-1中的長鏈堿以d18:1和d19:0為主，其含量分別為38.47％和45.32％；結(jié)合甲基化分析結(jié)果和上述實驗結(jié)果可推斷出sj-1為硫酸酯化單唾液酸神經(jīng)節(jié)苷脂，其結(jié)構(gòu)式為3galnac-4(neuacs2α2-3)galβ1-cer。
13、本專利技術(shù)制備的硫酸酯化單唾液酸神經(jīng)節(jié)苷脂sj-1具有良好的活性，可用于制備促進神經(jīng)再生或營養(yǎng)腦細胞的藥物，具有良好的應(yīng)用前景。
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1.一種硫酸酯化單唾液酸神經(jīng)節(jié)苷脂，其特征在于，所述神經(jīng)節(jié)苷脂的結(jié)構(gòu)式為3GalNAc-4(NeuAcS2α2-3)Galβ1-Cer。
2.一種權(quán)利要求1所述硫酸酯化單唾液酸神經(jīng)節(jié)苷脂的制備方法，其特征在于，利用氯仿-甲醇抽濾法提取刺參性腺中的總脂，再利用硅膠柱層析法對提取得到的總脂進行分離，得到粗神經(jīng)節(jié)苷脂，將粗神經(jīng)節(jié)苷脂純化后，得到硫酸酯化單唾液酸神經(jīng)節(jié)苷脂。
3.如權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于，所述氯仿和甲醇的混合質(zhì)量比為1.6～2.4：0.8～1.2。
4.如權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于，所述刺參性腺為刺參性腺凍干粉，所述氯仿-甲醇的用量為刺參性腺凍干粉體積的8～12倍。
5.如權(quán)利要求4所述的方法，其特征在于，硅膠柱層析時首先利用丙酮溶液洗脫糖脂及色素，再用甲醇溶液洗脫磷脂。
6.如權(quán)利要求2～5任一項所述的方法，其特征在于，所述純化的方法為弱陰離子交換層析和凝膠排阻層析法。
7.一種包含權(quán)利要求1所述硫酸酯化單唾液酸神經(jīng)節(jié)苷脂或按照權(quán)利要求2～6任一項所述方法制備得到的硫酸酯化單唾液酸神
8.一種權(quán)利要求1所述的硫酸酯化單唾液酸神經(jīng)節(jié)苷脂或按照權(quán)利要求2～6任一項所述方法制備得到的硫酸酯化單唾液酸神經(jīng)節(jié)苷脂或權(quán)利要求7所述的制劑在制備促進神經(jīng)再生或營養(yǎng)腦細胞的藥物中的應(yīng)用。
...【技術(shù)特征摘要】
1.一種硫酸酯化單唾液酸神經(jīng)節(jié)苷脂，其特征在于，所述神經(jīng)節(jié)苷脂的結(jié)構(gòu)式為3galnac-4(neuacs2α2-3)galβ1-cer。
2.一種權(quán)利要求1所述硫酸酯化單唾液酸神經(jīng)節(jié)苷脂的制備方法，其特征在于，利用氯仿-甲醇抽濾法提取刺參性腺中的總脂，再利用硅膠柱層析法對提取得到的總脂進行分離，得到粗神經(jīng)節(jié)苷脂，將粗神經(jīng)節(jié)苷脂純化后，得到硫酸酯化單唾液酸神經(jīng)節(jié)苷脂。
3.如權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于，所述氯仿和甲醇的混合質(zhì)量比為1.6～2.4：0.8～1.2。
4.如權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于，所述刺參性腺為刺參性腺凍干粉，所述氯仿-甲醇的用量為刺參性...
【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：盧航，趙慧，田元勇，魯雪峰，王天雨，
申請(專利權(quán))人：大連海洋大學(xué)，
類型：發(fā)明
國別省市：
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