【技術實現步驟摘要】
本專利技術屬于生物化工，具體涉及一種依托咪酯人工半抗原、人工抗原及其制備方法和應用。
技術介紹
1、依托咪酯(etomidate)，依托咪酯系非巴比妥類靜脈短效催眠藥，是麻醉誘導常用的藥物之一。依托咪酯臨床應用已有30年的歷史，通過靜脈注射對中樞神經有較強的抑制作用。隨劑量增加其作用持續時間可相應延長，對呼吸和循環系統的影響較小，可引起短暫的呼吸抑制、收縮壓略下降、心率稍增快，無組胺釋放作用，適用于全麻誘導，也可用于短時手術麻醉。
2、目前，對依托咪酯的檢測主要依靠高效液相色譜法(hplc)、氣相色譜法(gc)、薄層色譜法(tlc)、質譜法(ms)等，但是存在儀器昂貴、檢測費時、并且需要專業技術人員進行操作等缺點，不能達到現代檢測對快速、準確的要求。
3、免疫分析法可以彌補以上所有缺點，免疫分析法是一種利用抗原抗體特異性結合反應檢測各種物質(藥物、激素、蛋白質、微生物等)的分析方法，建立小分子化合物的免疫分析方法的關鍵是能夠制造出對小分子化合物具有高親和力和高特異性的抗體。要想獲得優良的抗體，必須先制備出高效的人工抗原。
4、現有技術中還沒有針對依托咪酯從頭合成一種幾乎保留依托咪酯全部結構同時又帶有羧基的半抗原。本專利技術制備得到的依托咪酯單克隆抗體，只能夠識別依托咪酯，不識別其它類麻醉藥，其特異性好，可應用于依托咪酯的檢測分析。
技術實現思路
1、本專利技術的目的在于提供一種依托咪酯人工半抗原，通過偶聯不同載體蛋白分別作為人工免疫原和包被原，進
2、為了實現上述目的，本專利技術采用了如下技術方案：本專利技術提供一種依托咪酯人工半抗原，其分子結構式如i所示：
3、。
4、進一步地，所述依托咪酯人工半抗原的制備方法，所述方法包括以下步驟：
5、（1）取4-1-溴乙基苯甲酸用乙腈溶解，得到a液；
6、（2）取咪唑-4-甲酸乙酯用乙腈溶解，然后加入氫氧化鈉，得到b液，控溫條件下，將a液緩慢加入b液中；
7、（3）加料完畢，設置反應溫度，待反應完畢，旋干乙腈；加入純水溶解產物，乙酸乙酯萃取，棄有機層，水層用鹽酸調ph，這時有白色沉淀析出，過濾并烘干沉淀即得目標半抗原；所述方法的反應式如下：
8、。
9、進一步地，所述依托咪酯人工半抗原的制備方法，步驟（1）4-1-溴乙基苯甲酸與步驟（2）咪唑-4-甲酸乙酯物質的量之比為1：0.8~1.5；步驟（3）設置反應溫度為40～45℃，反應時間為6~8h，鹽酸調ph為4~5。
10、本專利技術提供一種依托咪酯人工抗原，其分子結構式如ii所示：
11、。
12、進一步地，所述的依托咪酯人工抗原，結構式ii中蛋白為牛血清白蛋白、血藍蛋白和卵清白蛋白中的至少兩種。
13、進一步地，所述的依托咪酯人工抗原的制備方法，制備步驟如下：
14、（1）取依托咪酯人工半抗原，用n,n-二甲基甲酰胺溶解配制成c液；
15、（2）分別稱取1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽，n-羥基丁二酰亞胺，兩者混合一起用n,n-二甲基甲酰胺溶解配制成d液；
16、（3）冰浴條件下d液逐滴加入c液中，然后室溫攪拌過夜，終止反應后即得半抗原活化酯e。
17、進一步地，所述的依托咪酯人工抗原的制備方法，步驟（2）中1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽與n-羥基丁二酰亞胺物質的量之比為1：0.8~1.5。
18、進一步地，所述的依托咪酯人工抗原的制備方法，所述方法包括以下步驟：
19、（1）取半抗原活化酯e，加入到溶有蛋白1的pbs中，于4℃條件下反應過夜得到反應液f；
20、（2）將反應液f裝入透析袋，經pbs充分透析，得到人工抗原即免疫原；
21、（3）取半抗原活化酯e，加入到溶有蛋白2的pbs中，于4℃條件下反應過夜得到反應液g；
22、（4）將反應液g裝入透析袋，經?pbs充分透析，得到人工抗原即包被原。
23、進一步地，所述的依托咪酯人工抗原的制備方法，步驟（1）和步驟（3）中半抗原活化酯與蛋白1或蛋白2質量之比為1：3~9；pbs濃度為0.01mol/l，ph=7.4。
24、進一步地，依托咪酯半抗原或者依托咪酯人工抗原在制備抗依托咪酯抗體中的應用。
25、綜上所述，由于采用了上述技術方案，本專利技術的有益效果是：
26、1、本專利技術針對依托咪酯，從頭合成了一種幾乎保留依托咪酯全部結構同時又帶有羧基的半抗原，進一步偶聯不同載體蛋白分別作為人工免疫原和包被原，進而制備依托咪酯檢測抗體，其具有靈敏度高，特異性好，可用于依托咪酯的快速分析檢測。
27、2、本專利技術制備得到的依托咪酯單克隆抗體，只能夠識別依托咪酯，不識別其它類麻醉藥；表明本專利技術的依托咪酯單克隆抗體特異性很好，可應用于依托咪酯的檢測分析。
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1.一種依托咪酯人工半抗原，其特征在于，其分子結構式如I所示：
2.根據權利要求1所述依托咪酯人工半抗原的制備方法，其特征在于，所述方法包括以下步驟：
3.根據權利要求2所述依托咪酯人工半抗原的制備方法，其特征在于，步驟（1）4-1-溴乙基苯甲酸與步驟（2）咪唑-4-甲酸乙酯物質的量之比為1：0.8~1.5；步驟（3）設置反應溫度為40～45℃，反應時間為6~8h，鹽酸調pH為4~5。
4.一種依托咪酯人工抗原，其特征在于，其分子結構式如II所示：
5.根據權利要求4所述的依托咪酯人工抗原，其特征在于，結構式II中蛋白為牛血清白蛋白、血藍蛋白和卵清白蛋白中的至少兩種。
6.根據權利要求4所述的依托咪酯人工抗原的制備方法，其特征在于，制備步驟如下：
7.根據權利要求6所述的依托咪酯人工抗原的制備方法，其特征在于，步驟（2）中1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽與N-羥基丁二酰亞胺物質的量之比為1：0.8~1.5。
8.根據權利要求6所述的依托咪酯人工抗原的制備方法，其特征在于，所述方法包括
9.根據權利要求6所述的依托咪酯人工抗原的制備方法，其特征在于，步驟（1）和步驟（3）中半抗原活化酯與蛋白1或蛋白2質量之比為1：3~9；PBS濃度為0.01mol/L，pH=7.4。
10.根據權利要求1所述的一種依托咪酯人工半抗原或者權利要求4所述的一種依托咪酯人工抗原在制備抗依托咪酯抗體中的應用。
...【技術特征摘要】
1.一種依托咪酯人工半抗原，其特征在于，其分子結構式如i所示：
2.根據權利要求1所述依托咪酯人工半抗原的制備方法，其特征在于，所述方法包括以下步驟：
3.根據權利要求2所述依托咪酯人工半抗原的制備方法，其特征在于，步驟（1）4-1-溴乙基苯甲酸與步驟（2）咪唑-4-甲酸乙酯物質的量之比為1：0.8~1.5；步驟（3）設置反應溫度為40～45℃，反應時間為6~8h，鹽酸調ph為4~5。
4.一種依托咪酯人工抗原，其特征在于，其分子結構式如ii所示：
5.根據權利要求4所述的依托咪酯人工抗原，其特征在于，結構式ii中蛋白為牛血清白蛋白、血藍蛋白和卵清白蛋白中的至少兩種。
6.根據權利要求4所述的依托咪酯...
【專利技術屬性】
技術研發人員：朱永利，何秀平，蔡杰，許芳，常文偉，殷濤，
申請(專利權)人：深圳市綠詩源生物技術有限公司，
類型：發明
國別省市：
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