【技術實現步驟摘要】
本專利技術涉及生物醫藥領域，具體地說，是一組具有穿膜活性的海洋來源抗氧化肽改造體及其應用。
技術介紹
1、長期過量紫外輻射暴露可誘導皮膚細胞活性氧自由基(ros)增多，特別是中波紫外線(uvb)，可引起多種生物學損傷，導致色素沉著、光老化，甚至引發皮膚癌。使用外源性抗氧化劑可以增強皮膚的抗氧化能力，有效減輕紫外線輻射導致的皮膚損傷。目前抗紫外輻射護膚品中常用的抗氧化劑主要來源于人工合成或天然植物提取物，其中一些抗氧化劑因其結構、劑量以及存在環境不同可能會對人體發生不利的促氧化作用。因此，有必要尋找更有效、安全的天然抗氧化物質，提高抗紫外護膚產品的有效性和安全性。
2、抗氧化肽是一類具有抗氧化活性的生物活性肽，通常由2-20個氨基酸殘基組成，因其毒副作用小、對環境友好，且能有效清除活性氧自由基、靶向細胞內抗氧化信號通路中的關鍵蛋白、顯著提高細胞抗氧化能力等而受到關注。海洋生物資源豐富，其體內含有大量結構特異且活性強烈的物質。目前已從海洋生物中分離出多種具有顯著抗氧化活性的多肽，體內外研究中均顯示出較好的抗氧化和防治紫外損傷的作用。因此，海洋生物已成為新型抗氧化、抗紫外輻射活性物質的重要來源。由于抗氧化肽的氨基酸構成和排列順序不同，其抗氧化活性與作用機理存在較大差異。為篩選出高活性候選抗氧化肽，多肽構效關系的研究至關重要。針對抗氧化肽活性評價，常用的化學模型法、細胞生物法相對耗費人力物力，而生物信息學工具可對抗氧化肽進行批量篩選和初步分析預測，極大地促進了高活性抗氧化肽的發現與應用。
技術實現
1、本專利技術的目的在于提供一組具有穿膜活性的海洋來源抗氧化肽改造體及其應用。
2、為了實現上述目的，本專利技術采用以下技術方案：
3、本專利技術以海洋來源抗氧化肽作為篩選對象，通過檢索biopep、pubmed、web?ofscience等多肽和文獻數據庫，共篩選出366條抗氧化肽。采用線上預測評分工具anoxpepred(https://services.healthtech.dtu.dk/services/anoxpepred-1.0/,2023.3.22)獲得其中得分位列前20的高活性抗氧化肽序列。為進一步提高其抗氧化性，通過丙氨酸掃描預測可變氨基酸，并使用抗氧化氨基酸(組氨酸、甲硫氨酸、半胱氨酸、色氨酸、酪氨酸)進行替換，從中篩選出活性預測評分較高的候選改造肽。進一步使用線上工具toxinpred(https://webs.iiitd.edu.in/raghava/toxinpred/index.html,2023.4.22)和bchemrf-cppred(http://comptools.linc.ufpa.br/bchemrf-cppred/,2023.4.22)預測毒性及跨膜能力，并使用分子對接預測其與keap1蛋白的結合能力，進一步結合體外活性檢測，最終篩選獲得一組具有跨膜能力的高活性抗氧化肽改造體。研究表明，與常用的谷胱甘肽相比，所述改造體具有更強的自由基清除活性，且可高效穿透細胞膜進入細胞。與維生素c相比，所述改造肽能顯著降低細胞內ros水平，更有效地提高細胞內抗氧化酶gpx活性，對紫外線誘導的細胞氧化損傷具有顯著保護作用，在抗氧化藥物、抗紫外輻射防護產品開發中具有良好的應用潛力。
4、基于上述技術方案，本專利技術的第一方面，提供一組具有穿膜活性的海洋來源抗氧化肽改造體，所述的抗氧化肽改造體的氨基酸序列如seq?id?no:1-seq?id?no:3中任一所示。
5、抗氧化肽改造體wp5(seq?id?no:1)：
6、色氨酸-脯氨酸-色氨酸-組氨酸-色氨酸(英文縮寫：trp-pro-trp-his-trp，wpwhw)
7、抗氧化肽改造體lw5(seq?id?no:2)：
8、亮氨酸-色氨酸-組氨酸-色氨酸-組氨酸(英文縮寫：leu-trp-his-trp-his，lwhwh)
9、抗氧化肽改造體yy6(seq?id?no:3)
10、酪氨酸-酪氨酸-脯氨酸-酪氨酸-色氨酸-亮氨酸(英文縮寫：tyr-tyr-pro-tyr-trp-leu，yypywl)
11、seq?id?no:4：
12、色氨酸-脯氨酸-天冬氨酸-組氨酸-色氨酸(英文縮寫：trp-pro-asp-his-trp，wpdhw)
13、seq?id?no:5：
14、亮氨酸-色氨酸-組氨酸-蘇氨酸-組氨酸(英文縮寫：leu-trp-his-thr-his，lwhth)
15、seq?id?no:6：
16、酪氨酸-酪氨酸-脯氨酸-酪氨酸-谷氨酰胺-亮氨酸(英文縮寫：tyr-tyr-pro-tyr-gln-leu，yypyql)
17、進一步地，氨基酸序列如seq?id?no:1所示的抗氧化肽改造體wp5，為直鏈小肽，分子量為810.92da，由l型氨基酸殘基組成，由氨基酸序列如seq?id?no:4的母本肽中的天冬氨酸替換為色氨酸改造而成；
18、進一步地，氨基酸序列如seq?id?no:2所示的抗氧化肽改造體lw5，為直鏈小肽，分子量為777.89da，由l型氨基酸殘基組成，由氨基酸序列如seq?id?no:5的母本肽中的蘇氨酸替換為色氨酸改造而成；
19、進一步地，氨基酸序列如seq?id?no:3所示的抗氧化肽改造體yy6，為直鏈小肽，分子量為904.04da，由l型氨基酸殘基組成，由氨基酸序列如seq?id?no:6的母本肽中的谷氨酰胺替換為色氨酸改造而成。
20、進一步地，所述的抗氧化肽改造體的制備方法包括以下步驟：采用十二通道半自動多肽合成儀合成多肽的氨基酸全序列；通過高效液相色譜(hplc)反相柱層析脫鹽純化，并確定其純度大于95％；采用質譜(ms)分析測定合成多肽的氨基酸序列和分子量，得到所述的抗氧化肽改造體。
21、本專利技術的第二方面，提供一組如上所述的具有穿膜活性的海洋來源抗氧化肽改造體及其組合物在制備清除自由基的產品中的應用。
22、進一步地，所述抗氧化肽改造體清除2,2-聯氮-二(3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸)二銨鹽自由基(abts)和/或羥基自由基(·oh)。
23、本專利技術的第三方面，提供一組具有穿膜活性的海洋來源抗氧化肽改造體及其組合物在制備抗紫外輻射及其引起的氧化損傷的產品中的應用。
24、進一步地，所述的抗紫外輻射及其引起的氧化損傷的產品是指以各種方式保護人體皮膚免受紫外輻射損傷的產品。
25、進一步地，所述的抗氧化肽改造體能夠有效減輕uvb誘導的人表皮角質形成細胞(hacat細胞)氧化應激損傷，顯著降低細胞內ros和脂質過氧化應激產物丙二醛(mda)水平，提高細胞內超氧化物歧化酶(sod)和谷胱甘肽過氧化物酶(gpx)活性。
26、進一步地，所述抗氧化肽改造體可進入細胞內，通過直接清除活性氧自由基和影響細胞抗氧本文檔來自技高網...
【技術保護點】
1.一組具有穿膜活性的海洋來源抗氧化肽改造體，其特征在于，所述的抗氧化肽改造體的氨基酸序列如SEQ?ID?NO:1-SEQ?ID?NO:3中任一所示。
2.根據權利要求1所述的抗氧化肽改造體，其特征在于，所述抗氧化肽改造體由L型氨基酸殘基組成。
3.根據權利要求1所述的抗氧化肽改造體，其特征在于，所述抗氧化肽改造體為直鏈。
4.根據權利要求1所述的抗氧化肽改造體，其特征在于，當氨基酸序列如SEQ?ID?NO:1時，所述的抗氧化肽改造體的分子量為810.92Da，等電點為7.80；當氨基酸序列如SEQ?IDNO:2時，所述的抗氧化肽改造體的分子量為777.89Da，等電點為7.95。
5.根據權利要求1所述的抗氧化肽改造體，其特征在于，當氨基酸序列如SEQ?ID?NO:3時，所述的抗氧化肽改造體的分子量為904.04Da，等電點為5.84。
6.根據權利要求1所述的抗氧化肽改造體，其特征在于，所述的抗氧化肽改造體的制備方法包括以下步驟：采用十二通道半自動多肽合成儀合成多肽的氨基酸全序列；通過高效液相色譜反相柱層析脫鹽純化，
7.如權利要求1-6任一所述的具有穿膜活性的海洋來源抗氧化肽改造體及其組合物在制備清除自由基的產品中的應用。
8.根據權利要求7所述的應用，其特征在于，所述自由基為2,2-聯氮-二(3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸)二銨鹽自由基和/或羥基自由基。
9.如權利要求1-6任一所述的具有穿膜活性的海洋來源抗氧化肽改造體及其組合物在制備抗紫外輻射及其引起的氧化損傷的產品中的應用。
10.根據權利要求9所述的應用，其特征在于，所述的抗紫外輻射及其引起的氧化損傷的產品是指保護人體皮膚免受紫外輻射損傷的產品。
...【技術特征摘要】
1.一組具有穿膜活性的海洋來源抗氧化肽改造體，其特征在于，所述的抗氧化肽改造體的氨基酸序列如seq?id?no:1-seq?id?no:3中任一所示。
2.根據權利要求1所述的抗氧化肽改造體，其特征在于，所述抗氧化肽改造體由l型氨基酸殘基組成。
3.根據權利要求1所述的抗氧化肽改造體，其特征在于，所述抗氧化肽改造體為直鏈。
4.根據權利要求1所述的抗氧化肽改造體，其特征在于，當氨基酸序列如seq?id?no:1時，所述的抗氧化肽改造體的分子量為810.92da，等電點為7.80；當氨基酸序列如seq?idno:2時，所述的抗氧化肽改造體的分子量為777.89da，等電點為7.95。
5.根據權利要求1所述的抗氧化肽改造體，其特征在于，當氨基酸序列如seq?id?no:3時，所述的抗氧化肽改造體的分子量為904.04da，等電點為5.84。
6.根據...
【專利技術屬性】
技術研發人員：柳國艷，王倩倩，黃藝超，賀茜，張黎明，宋居星私，胡雅楠，呂永菲，周達原，
申請(專利權)人：中國人民解放軍海軍特色醫學中心，
類型：發明
國別省市：
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