【技術實現步驟摘要】
本專利技術涉及生物，具體涉及一種結合tth?dna聚合酶的核酸適配體及其應用。
技術介紹
1、tth?dna聚合酶最初是從嗜熱菌中分離出來的一種恒溫dna聚合酶。研究發現，該酶具有5'-3'聚合酶活性、3'-5'外切酶活性，且在mn2+存在的情況下，還具有額外的逆轉錄酶活性。tth聚合酶在74℃時具有活性，最高可耐受95℃，具有良好的耐高溫性，從而在聚合酶鏈式反應(pcr)及與其相關的體外核酸擴增技術(例如rt-pcr、反轉錄、cdna合成等)中具有廣闊的應用前景。
2、然而在實際應用中，pcr反應過程中，在熱循環之前可能出現非特異性引物和延伸，從而使得擴增產物的純度降低。而且酶活性的高溫激活處理還增加了反應過程的耗時，難以實現快速檢測。
技術實現思路
1、本專利技術的目的是為了克服現有技術存在的上述問題，提供一種結合tth?dna聚合酶的核酸適配體及其應用。本專利技術提供的核酸適配體對于tth?dna聚合酶具有較高親和力，能夠特異性識別并結合tth?dna聚合酶，并且可以作為tth?dna聚合酶的熱啟動分子。
2、為了實現上述目的，本專利技術一方面提供一種結合tth?dna聚合酶的核酸適配體，
3、所述核酸適配體的核苷酸序列與以下(1)和/或(2)的序列具有至少30％同源性：
4、(1)如seq?id?no:1所示的dna序列；
5、(2)如seq?id?no:2所示的dna序列。
6、本專利技術第二方面提供
7、(a)在檢測tth?dna聚合酶中的應用；
8、(b)在純化tth?dna聚合酶中的應用；
9、(c)在延長tth?dna聚合酶的保存時間中的應用；
10、(d)在作為tth?dna聚合酶的熱啟動分子中的應用；
11、(e)在制備靶向tth?dna聚合酶的藥物中的應用。
12、本專利技術第三方面提供一種tth?dna聚合酶制劑，所述制劑包括核酸適配體和tthdna聚合酶，其中，所述核酸適配體為第一方面所述的核酸適配體。
13、本專利技術第四方面提供第一方面所述的核酸適配體，或者，第三方面所述的制劑在聚合酶鏈式反應及其相關反應中的應用。
14、本專利技術第五方面提供一種核酸體外合成和/或擴增的方法，所述方法包括采用第三方面所述的制劑作為rna逆轉錄酶和/或dna聚合酶進行核酸體外合成和/或擴增。
15、通過上述技術方案，本專利技術至少能夠取得如下有益效果：
16、(1)本專利技術提供的核酸適配體能夠高特異性地識別并結合tth酶，并具有較高的tth酶親和力。
17、(2)本專利技術提供的核酸適配體分子量小、化學性質穩定且易于保存和標記，可用于tth酶的檢測、純化、成像等，還可用于制備靶向tth酶的藥物或試劑，具有良好且廣闊的應用前景。
18、(3)本專利技術提供的核酸適配體在與tth酶特異性結合后，能夠提高tth酶的穩定性，延長其保存時間，尤其可以延長tth酶在常溫和非冷凍低溫下的保存時間。
19、(4)本專利技術提供的核酸適配體能夠可逆的與tth酶結合，在常溫狀態下，二者相結合，從而tth酶失去活性，在高溫(即達到核酸適配體解鏈溫度)狀態下，核酸適配體二級結構打開，酶活性恢復。從而，采用本專利技術提供的核酸適配體能夠通過溫度控制tth酶的活性釋放，避免pcr等體外核酸擴增技術中，在熱循環之前的非特異擴增情況的發生。
20、(5)本專利技術提供的核酸適配體能夠通過人工合成方式短期內大量生產，且成分單一，質檢及使用成本較低。
本文檔來自技高網...【技術保護點】
1.一種結合Tth?DNA聚合酶的核酸適配體，其特征在于，所述核酸適配體的核苷酸序列與以下(1)和/或(2)的序列具有至少30％同源性：
2.根據權利要求1所述的核酸適配體，其中，所述核酸適配體的核苷酸序列與(1)和/或(2)的序列具有至少50％同源性，優選具有至少80％同源性；
3.根據權利要求1或2所述的核酸適配體，其中，所述核酸適配體還經過修飾或改造；
4.權利要求1-3中任一項所述的核酸適配體的應用，其特征在于，所述應用包括以下中的至少一種：
5.一種Tth?DNA聚合酶制劑，其特征在于，所述制劑包括核酸適配體和Tth?DNA聚合酶，其中，所述核酸適配體為權利要求1-3中任一項所述的核酸適配體。
6.根據權利要求5所述的制劑，其中，所述制劑中，相對于1U的Tth?DNA聚合酶，核酸適配體的含量為1-20nM；
7.根據權利要求5或6所述的制劑，其中，所述制劑中，核酸適配體和Tth?DNA聚合酶各自獨立包裝，或者，核酸適配體和Tth?DNA聚合酶混合包裝；
8.權利要求1-3中任一項所述的核
9.一種核酸體外合成和/或擴增的方法，其特征在于，所述方法包括采用權利要求5-7中任一項所述的制劑作為RNA逆轉錄酶和/或DNA聚合酶進行核酸體外合成和/或擴增。
10.根據權利要求9所述的方法，其中，進行核酸體外合成和/或擴增時，所述制劑中Tth酶的啟動溫度為55-60℃；
...【技術特征摘要】
1.一種結合tth?dna聚合酶的核酸適配體，其特征在于，所述核酸適配體的核苷酸序列與以下(1)和/或(2)的序列具有至少30％同源性：
2.根據權利要求1所述的核酸適配體，其中，所述核酸適配體的核苷酸序列與(1)和/或(2)的序列具有至少50％同源性，優選具有至少80％同源性；
3.根據權利要求1或2所述的核酸適配體，其中，所述核酸適配體還經過修飾或改造；
4.權利要求1-3中任一項所述的核酸適配體的應用，其特征在于，所述應用包括以下中的至少一種：
5.一種tth?dna聚合酶制劑，其特征在于，所述制劑包括核酸適配體和tth?dna聚合酶，其中，所述核酸適配體為權利要求1-3中任一項所述的核酸適配體。
6.根據權利要求5所述的制劑，其中，所述制劑中...
【專利技術屬性】
技術研發人員：彭雪鈺，紀博知，羅紹鋒，歐陽燕，吳康，戴立忠，
申請(專利權)人：圣湘生物科技股份有限公司，
類型：發明
國別省市：
還沒有人留言評論。發表了對其他瀏覽者有用的留言會獲得科技券。