【技術實現步驟摘要】
本專利技術屬于藥物領域，具體地涉及一種酶催化合成2-氨基-3-羥基-4-氧代丁酸衍生物的方法。
技術介紹
1、在大多數哺乳動物組織細胞內，飲食攝取的色氨酸幾乎全部由犬尿氨酸途徑(kp)代謝，該途徑可將色氨酸分解為多種神經活性物質，如犬尿氨酸(kyn)、犬尿喹啉酸(kyna)和3-羥基犬尿氨酸(3-hk)等，并最終被代謝為煙酰胺腺嘌呤二核苷酸(nad+)(nat?med,2016,22(2):202-209.)。該代謝途徑失調或紊亂與炎癥性神經系統疾病如阿爾茲海默癥、自身免疫疾病、腦缺血及腫瘤增殖等息息相關，而代謝中間產物的穩態又與該通路上的酶表達水平及活性密切相關。
2、犬尿氨酸-3-單加氧酶(kmo)是一類黃素蛋白單加氧酶，以nadph為共底物，催化l-犬尿氨酸羥化為3-羥基犬尿氨酸，是犬尿氨酸代謝途徑的關鍵分支。kmo在人體的肝、腎組織和單核細胞內高度表達，在腦內小膠質細胞和巨噬細胞內也有少量表達。犬尿氨酸代謝產生的3-hk和黃尿酸已證明具有顯著的神經毒性；而與之相反，犬尿氨酸經犬尿氨酸轉氨酶(kat)代謝得到的kyna具有神經保護作用。因此，抑制kmo羥化活性從而降低體內3-hk和喹啉酸水平而升高kyna水平，能夠對包括阿爾茲海默癥、亨廷頓病和帕金森病在內的神經性疾病起到治療作用(nat?commun,2017,8(1):15812-15827.)。
3、文獻(j?med?chem,2017,60(8):3383-3404)中總結了幾種基于天然底物kyn結構的kmo抑制劑，其具體結構如下式所示。已報
4、
5、目前報道的芳酰基丙氨酸類抑制劑，主要以化學法經五步以上的反應來進行合成，現有方法普遍存在立體選擇性差、步驟繁瑣、收率低等問題，不利于工業化放大生產，尚沒有合適的方法來高效高選擇性地制備此類抑制劑。
技術實現思路
1、本專利技術的目的是，提供一種操作方便、立體選擇性高的方法來制備雙手性中心的kmo抑制劑。
2、在本專利技術的第一方面，提供了一種一種式(i)化合物或其藥學上可接受的鹽的合成方法，
3、
4、其中，環a選自下組：c3-c8飽和或部分不飽和碳環基、3-12元飽和或部分不飽和雜環基、c6-c10芳基、5-12元雜芳基；
5、各個ra各自獨立地選自下組：氘原子、鹵素、硝基、羥基、氨基、巰基、羧基、氰基、c1-c6烷基、c1-c6鹵代烷基、c1-c6烷氧基、c1-c6鹵代烷氧基、-c1-c6烷基-nh2、-nh-c1-c6烷基、-c1-c6烷基-nh-c1-c6烷基、巰基取代的c1-c6烷基、c2-c6酰基、c3-c8飽和或部分不飽和碳環基、3-12元飽和或部分不飽和雜環基、c6-c10芳基、5-12元雜芳基；
6、*碳原子可以為r構型或者s構型；
7、其中，所述的雜環基和雜芳基各自獨立任選地包括1-4個選自下組的環原子：n、o、s；
8、所述的方法包括步驟：
9、(1)提供反應體系，所述的反應體系包含輔因子；
10、(2)在所述的反應體系中，化合物a與甘氨酸或蘇氨酸在催化劑作用下進行反應，得到式(i)化合物；
11、
12、其中，
13、所述的催化劑選自下組：蘇氨酸醛縮酶lta、蘇氨酸轉醛酶ltta、表達蘇氨酸醛縮酶的菌株、表達蘇氨酸轉醛酶的菌株、或其組合。
14、在部分實施方式中，所述的輔因子選自下組：磷酸吡哆醛(plp)。
15、在部分實施方式中，所述的輔因子濃度為0.01mm～1mm，優選地為0.02～0.5mm，更優選地為0.05～0.2mm。
16、在部分實施方式中，所述的催化劑濃度為0.05-5mg/ml，優選地為0.1-4mg/ml，更優選地為0.2-3mg/ml。
17、在部分實施方式中，所述的蘇氨酸醛縮酶lta具有如seq?id?no:1所示氨基酸序列。
18、在另一優選例中，所述的蘇氨酸醛縮酶lta具有在保持酶活性范圍內，對如seq?idno:1所示氨基酸序列進行一個或者多個氨基酸的替換、缺失、改變、插入或增加所得到的氨基酸序列。
19、在部分實施方式中，蘇氨酸轉醛酶ltta具有如seq?id?no:3所示氨基酸序列。
20、在另一優選例中，所述的蘇氨酸轉醛酶ltta具有在保持酶活性范圍內，對如seqid?no:3所示氨基酸序列進行一個或者多個氨基酸的替換、缺失、改變、插入或增加所得到的氨基酸序列。
21、在部分實施方式中，所述的表達蘇氨酸醛縮酶的菌株為表達如seq?id?no:1所示氨基酸序列的蛋白的菌株；
22、所述的表達蘇氨酸轉醛酶的菌株為表達具有如seq?id?no:3所示氨基酸序列的蛋白的菌株。
23、在另一優選例中，所述的表達蘇氨酸醛縮酶的菌株為具有如seq?id?no:2所示核苷酸序列的dna的菌株；
24、所述的表達蘇氨酸轉醛酶的菌株為具有如seq?id?no:3所示核苷酸序列的dna的菌株。
25、在另一優選例中，所述的菌株可以為攜帶上述基因的基因工程菌株。在另一優選例中，所述的極影工程
26、在部分實施方式中，所述的反應體系中還包括金屬離子，所述的金屬離子選自下組：mg2+、ca2+、或其組合。
27、在另一優選例中，所述的金屬離子濃度為0.01～5m，優選地為0.05～1m，更優選地為0.1～0.5m
28、在部分實施方式中，所述的反應在10～50℃下進行，優選地在15～40℃下進行，更優選地在20～30℃下進行。
29、在部分實施方式中，所述的方法還包括步驟：
30、(3)從反應體系中分離式(i)化合物或其藥學上可接受的鹽。
31、應理解，在本專利技術范圍內中，本專利技術的上述各技術特征和在下文(如實施例)中具體描述的各技術特征之間都可以互相組合，從而構成新的或優選的技術方案。限于篇幅，在此不再一一累述。
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1.一種式(I)化合物或其藥學上可接受的鹽的合成方法，
2.如權利要求1所述的方法，其特征在于，所述的輔因子選自下組：磷酸吡哆醛(PLP)。
3.如權利要求1所述的方法，其特征在于，所述的輔因子濃度為0.01mM～1mM，優選地為0.02～0.5mM，更優選地為0.05～0.2mM。
4.如權利要求1所述的方法，其特征在于，所述的催化劑濃度為0.05-5mg/mL，優選地為0.1-4mg/mL，更優選地為0.2-3mg/mL。
5.如權利要求1所述的方法，其特征在于，所述的蘇氨酸醛縮酶LTA具有如SEQ?ID?NO:1所示氨基酸序列。
6.如權利要求1所述的方法，其特征在于，蘇氨酸轉醛酶LTTA具有如SEQ?ID?NO:3所示氨基酸序列。
7.如權利要求所述的方法，其特征在于，所述的表達蘇氨酸醛縮酶的菌株為表達如SEQID?NO:1所示氨基酸序列的蛋白的菌株；
8.如權利要求1所述的方法，其特征在于，所述的反應體系中還包括金屬離子，所述的金屬離子選自下組：Mg2+、Ca2+、或其組合。
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