【技術實現步驟摘要】
本專利技術涉及生物醫藥和分子生物學，尤其涉及一種改善腦缺血后神經功能障礙的藥物。
技術介紹
1、缺血性腦卒中是由于局部腦缺血及永久性腦梗死(如dwi檢查呈陽性)引發的突發神經功能缺損。缺血性腦卒中主要發病原因為動脈粥樣硬化、動脈炎、外傷等引起腦血管病變形成的斑塊堵塞血管，也與房顫等多種心血管疾病所產生的栓子進入血液，阻塞腦部血管引發有關。
2、腦缺血期間的中心事件是活性氧(ros)的產生，這會引起對脂質、蛋白質和dna的損害。在缺血后再灌注期間，氧氣供應增加導致ros過量產生，在腦卒中患者中能觀察到氧化應激導致的神經元細胞的死亡。此外，炎癥反應也在腦缺血中起作用。炎癥可能發生在具有復制能力的神經膠質細胞中，進而加劇神經退行性病變或破壞神經元-神經膠質細胞的結構和功能連接，導致外周炎癥因子的流入，加重神經細胞的損傷。這些證據表明氧化應激和炎癥是影響缺血性腦卒中介導的腦損傷的重要因素，并為腦損傷細胞提供了治療方法的潛在靶點。
3、中藥在治療此類復雜疾病時表現出獨特優勢，多數中藥在不同時間段對腦缺血都表現出了良好的治療作用。但黃芩素或阿魏酸單獨使用效果局限、單一，而對二者配伍使用的研究較少，因此，我們提供一種改善腦缺血后神經功能障礙的藥物。
技術實現思路
1、本專利技術的目的是解決現有技術中存在的缺點。
2、為了實現上述目的，本專利技術采用了如下技術方案：包括以下步驟：
3、s1、準備材料；
4、s2、細胞損傷模型與干預試驗；<...
【技術保護點】
1.一種改善腦缺血后神經功能障礙的藥物，其特征在于，包括以下步驟：
2.根據權利要求1所述的一種改善腦缺血后神經功能障礙的藥物，其特征在于：所述步驟S1準備材料中，將SH-SY5Y神經細胞，用于棕櫚酸誘導的神經細胞損傷模型、棕櫚酸、黃芩素、阿魏酸、CCK-8試劑、MDA、SOD、GSH檢測試劑盒準備集齊。
3.根據權利要求1所述的一種改善腦缺血后神經功能障礙的藥物，其特征在于：所述步驟S2細胞損傷模型與干預試驗中，根據要求，將SH-SY5Y神經細胞接種于96孔板或6孔板中，培養至70％～80％融合度，除對照組外，其他組加入100μL50μM棕櫚酸處理2小時。
4.根據權利要求3所述的一種改善腦缺血后神經功能障礙的藥物，其特征在于：所述步驟S2細胞損傷模型與干預試驗中，在棕櫚酸處理后，給予不同濃度的黃芩素、阿魏酸以及黃芩素與阿魏酸的組合，持續作用12小時。
5.根據權利要求1所述的一種改善腦缺血后神經功能障礙的藥物，其特征在于：所述步驟S3細胞活性及氧化應激指標檢測中，采用CCK-8方法，在細胞培養基中加入10μLCCK-8試劑，于3
6.根據權利要求5所述的一種改善腦缺血后神經功能障礙的藥物，其特征在于：所述步驟S3細胞活性及氧化應激指標檢測中，使用MDA、SOD、GSH試劑盒，根據說明書操作，測量每孔的光密度，計算各組MDA、SOD和GSH的活性，MDA水平表示脂質過氧化，SOD和GSH為抗氧化指標，評估細胞氧化應激狀態。
7.根據權利要求1所述的一種改善腦缺血后神經功能障礙的藥物，其特征在于：所述步驟S4炎癥蛋白與信號通路分析中，細胞培養結束后，吸去培養基，用PBS清洗3次后，加入裂解液提取蛋白，4℃、12000r/min離心15分鐘后取上清，使用WesternBlot檢測細胞中HIF-1α、GPX4、p38的磷酸化水平。
8.根據權利要求7所述的一種改善腦缺血后神經功能障礙的藥物，其特征在于：所述步驟S4炎癥蛋白與信號通路分析中，WesternBlot結果顯示，棕櫚酸誘導p38的磷酸化，HIF-1α和GPX4表達水平降低。
9.根據權利要求1所述的一種改善腦缺血后神經功能障礙的藥物，其特征在于：所述步驟S5動物模型實驗與腦梗死評估中，雄性SD大鼠術前禁食一夜，使用2％戊巴比妥鈉進行腹腔麻醉，采用線栓法阻塞大鼠的頸內動脈1小時后拔除，再灌注血液以恢復供血，術后評估大鼠神經功能評分，篩選造模成功的實驗動物。
10.根據權利要求9所述的一種改善腦缺血后神經功能障礙的藥物，其特征在于：所述步驟S5動物模型實驗與腦梗死評估中，將大鼠隨機分為正常組、模型組和藥物干預組，每日灌胃給藥，連續7天，采用TTC染色法檢測腦梗死區域，新鮮腦組織切片置于TTC染液中，37℃避光孵育30分鐘后，觀察正常組織和梗死區域的分布，使用圖像分析軟件計算梗死面積。
...【技術特征摘要】
1.一種改善腦缺血后神經功能障礙的藥物，其特征在于，包括以下步驟：
2.根據權利要求1所述的一種改善腦缺血后神經功能障礙的藥物，其特征在于：所述步驟s1準備材料中，將sh-sy5y神經細胞，用于棕櫚酸誘導的神經細胞損傷模型、棕櫚酸、黃芩素、阿魏酸、cck-8試劑、mda、sod、gsh檢測試劑盒準備集齊。
3.根據權利要求1所述的一種改善腦缺血后神經功能障礙的藥物，其特征在于：所述步驟s2細胞損傷模型與干預試驗中，根據要求，將sh-sy5y神經細胞接種于96孔板或6孔板中，培養至70％～80％融合度，除對照組外，其他組加入100μl50μm棕櫚酸處理2小時。
4.根據權利要求3所述的一種改善腦缺血后神經功能障礙的藥物，其特征在于：所述步驟s2細胞損傷模型與干預試驗中，在棕櫚酸處理后，給予不同濃度的黃芩素、阿魏酸以及黃芩素與阿魏酸的組合，持續作用12小時。
5.根據權利要求1所述的一種改善腦缺血后神經功能障礙的藥物，其特征在于：所述步驟s3細胞活性及氧化應激指標檢測中，采用cck-8方法，在細胞培養基中加入10μlcck-8試劑，于37℃孵育1小時后，通過450nm的吸光度測量細胞活性，評估黃芩素和阿魏酸對棕櫚酸誘導損傷的保護效果。
6.根據權利要求5所述的一種改善腦缺血后神經功能障礙的藥物，其特征在于：所述步驟s3細胞活性及氧化應激指標檢測中，使用mda、sod、gsh試劑盒，根據說明書操作，測量每孔的光密度，計...
【專利技術屬性】
技術研發人員：羅開濤，毛晴晴，朱高峰，楊喜兵，沈志方，吳蘭，丁濱，
申請(專利權)人：嘉興市中醫醫院，
類型：發明
國別省市：
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