【技術實現步驟摘要】
本專利技術涉及物質純化，尤其涉及一種唾液酸化寡糖的純化方法。
技術介紹
1、唾液酸化人乳寡糖（sialylated?human?milk?oligosaccharides,?shmos）是母乳中重要的低聚糖，其分子中含有唾液酸（sialic?acid,?sa），通常以n-乙酰神經氨酸（neu5ac）形式存在，對嬰兒大腦發育、神經傳遞和突觸形成具有重要作用，還具有免疫調節功能。唾液酸乳糖（sialyllactose,?sl）是具有重要生理功能的唾液酸化人乳寡糖，其中，3’-唾液酸乳糖（3’-sl）和6’-唾液酸乳糖（6’-sl）是母乳中尤為重要的兩種唾液酸化人乳寡糖。
2、目前，唾液酸化人乳寡糖的合成方法主要包括化學合成法和生物合成法。化學合成法通常通過酶促反應合成唾液酸化人乳寡糖，生物合成法則利用大腸桿菌等微生物進行唾液酸化人乳寡糖的合成。上述方法中，從發酵液或酶促反應液中純化目標產物也是唾液酸化人乳寡糖制備的關鍵步驟。目前主要采用的純化工藝為：采用糖苷酶水解乳糖為半乳糖，采用陰離子和陽離子交換柱去除多余的鹽類化合物，再通過兩次納濾或色譜分離去除半乳糖等雜糖物質；例如，中國專利cn111447845b公開的方法先采用糖苷酶水解乳糖形成半乳糖，再用200l體積的h+-型強陽離子交換劑除去陽離子污染物；然后使用naoh將所得溶液的ph調節為7.0；再使用氯化物形式的強陰離子交換劑從溶液中除去陰離子和著色劑雜質，經過納濾、脫色后，再利用色譜分離除去其他污染性糖。其中，氯化物形式的強陰離子交換劑純化的目的為除去多余的雜陰離子
3、綜上，目前唾液酸化人乳寡糖的純化工藝仍較為復雜，后期需要依賴色譜分離去除雜糖，增加了工藝復雜性和純化成本。
技術實現思路
1、本專利技術提供一種唾液酸化寡糖的純化方法。
2、為簡化唾液酸化寡糖的純化工藝，提高純化效率，本專利技術嘗試利用簡化的離子交換工藝去除多余酸、乳糖和小分子鹽，在此過程中專利技術人意外地發現，在利用離子交換技術去除多余酸、乳糖和小分子鹽的同時，唾液酸乳糖會損失大概10-15%，究其原因主要為唾液酸乳糖在陰離子交換樹脂中經歷的洗脫時間較長，導致唾液酸乳糖的解離、褐變，使得純化產物中唾液酸乳糖的含量降低或者需要繼續引入脫色步驟解決褐變問題進而導致收率降低。專利技術人經不斷嘗試，發現采用氯型弱堿性陰離子交換樹脂可以較好地解決上述問題，減少利用離子交換技術去除多余酸、乳糖和小分子鹽過程中，唾液酸乳糖的損失，提高其收率。雖然離子交換技術為已知的唾液酸化寡糖純化技術手段，其中弱堿性陰離子交換樹脂也已有應用，但是，現有技術多因其具有與強堿性陰離子交換樹脂相比抗衡離子基本不會被釋放到洗脫液中的優點而選擇弱堿性陰離子交換樹脂，其目的主要在于除去陰離子雜質，與本專利技術使用的氯型弱堿性陰離子交換樹脂的目的和作用明顯不同。
3、具體地，本專利技術提供以下所述的技術方案。
4、本專利技術提供一種唾液酸化寡糖的純化方法，所述方法包括：采用離子交換樹脂處理含有唾液酸化寡糖的溶液；所述離子交換樹脂處理包括：采用氯型弱堿性陰離子交換樹脂進行處理，使得唾液酸化寡糖吸附于所述氯型弱堿性陰離子交換樹脂，經洗脫后，收集含有唾液酸化寡糖的洗脫液。
5、本專利技術中，氯型弱堿性陰離子交換樹脂是經氯離子改性的弱堿性陰離子交換樹脂。與現有技術使用的游離堿型弱堿性陰離子交換樹脂、氯化物形式的強陰離子交換樹脂在結構和性質方面明顯不同。弱堿性陰離子交換樹脂通常含有具有吸引質子的孤對電子的堿基，例如某些含氮基團，其包括例如伯胺、仲胺、叔胺（游離胺基）、胍基或含氮雜芳基（如吡啶、嘧啶等），優選包括叔胺基團。在游離堿形式中，堿基不是質子化形式，換而言之，堿基中不存在抗衡陰離子。因此，該基團能夠整體吸附酸，即酸陽離子（h+）和酸陰離子（x-）都能在不進行離子交換（不釋放抗衡離子）的情況下從進料溶液中去除。
6、此外，氯型弱堿性陰離子交換樹脂對于唾液酸化寡糖以及乳糖、唾液酸、色素等雜質具有明顯不同的結合力，利用該特性，可以在氯型弱堿性陰離子交換樹脂處理過程中高效去除乳糖、唾液酸和色素等雜質，同時有效減少唾液酸化寡糖在洗脫過程中的解離、褐變，進而減少唾液酸化寡糖的損失，而且還能夠減少色素雜質被洗脫下來（一般而言，離子交換樹脂處理前的脫色步驟無法完全去除色素雜質，會有部分色素被陰離子交換樹脂吸附，因此需要減少色素同唾液酸化寡糖被一起洗脫的可能性）。在過柱和洗脫過程中，去除唾液酸和乳糖等雜質，首先，乳糖直接通過氯型弱堿性陰離子交換樹脂，然后經洗脫劑洗脫，唾液酸化寡糖被洗脫下來，此時唾液酸和色素雜質仍結合在氯型弱堿性陰離子交換樹脂上，可在樹脂凈化、再生步驟去除（例如采用氫氧化鈉凈化陰離子交換樹脂時將其中的色素和唾液酸全部洗脫，再用氯化鈉進行轉化，即可重新獲得氯型弱堿性陰離子交換樹脂）。
7、在本專利技術的一些實施方式中，所述氯型弱堿性陰離子交換樹脂為采用氯化鈉對弱堿性陰離子交換樹脂進行改性得到。
8、對于氯型弱堿性陰離子交換樹脂的結構骨架，本專利技術不做特殊限制，包括但不限于苯乙烯系、丙烯酸系、醋酸系、環氧系、乙烯吡啶系、脲醛系列、氧乙烯系等。
9、以上所述的離子交換樹脂處理還包括采用酸性陽離子交換樹脂進行處理。酸性陽離子交換樹脂處理有利于去除無機陽離子雜質以及有機胺、氨基酸和短肽等雜質。酸性陽離子交換樹脂進行處理所獲得的樹脂洗脫液包含酸性形式的唾液酸化寡糖，該樹脂洗脫液的ph通常為1-2，但該步驟物料停留時間很短，唾液酸化寡糖不易發生水解。
10、優選地，所述酸性陽離子交換樹脂為h+型強酸性陽離子交換樹脂。
11、對于h+型強酸性陽離子交換樹脂的結構骨架，本專利技術不做特殊限制，包括但不限于苯乙烯型、丙烯酸型等。
12、在本專利技術的一些具體實施方式中，以上所述的離子交換樹脂處理包括：將含有唾液酸化寡糖的溶液先進行酸性陽離子交換樹脂處理，再進行氯型弱堿性陰離子交換樹脂處理。
13、在本專利技術的另一些具體實施方式中，以上所述的離子交換樹脂處理包括：將含有唾液酸化寡糖的溶液先進行強堿性陰本文檔來自技高網...
【技術保護點】
1.一種唾液酸化寡糖的純化方法，其特征在于，所述方法包括：采用離子交換樹脂處理含有唾液酸化寡糖的溶液；
2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述離子交換樹脂處理還包括采用酸性陽離子交換樹脂進行處理；
3.根據權利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述離子交換樹脂處理包括：將含有唾液酸化寡糖的溶液先進行酸性陽離子交換樹脂處理，再進行氯型弱堿性陰離子交換樹脂處理；
4.根據權利要求1~3任一項所述的方法，其特征在于，氯型弱堿性陰離子交換樹脂處理過程中，所述洗脫使用的洗脫劑為中性鹽和/或弱酸性鹽。
5.根據權利要求4所述的方法，其特征在于，所述洗脫劑的濃度為0.01-0.05M；
6.根據權利要求4或5所述的方法，其特征在于，在氯型弱堿性陰離子交換樹脂處理后，還包括去除洗脫劑的步驟；
7.根據權利要求1~6任一項所述的方法，其特征在于，所述含有唾液酸化寡糖的溶液為含有唾液酸化寡糖的水溶液；
8.根據權利要求7所述的方法，其特征在于，所述含有唾液酸化寡糖的溶液為將含有唾液酸化寡糖的發酵液或酶促反應液
9.根據權利要求7或8所述的方法，其特征在于，所述含有唾液酸化寡糖的溶液的制備方法包括：將含有唾液酸化寡糖的發酵液去除菌體和蛋白后進行脫色處理，將脫色得到的清液進行濃縮除鹽處理。
10.根據權利要求1~9任一項所述的方法，其特征在于，所述唾液酸化寡糖包含至少一個唾液酸基；
...【技術特征摘要】
1.一種唾液酸化寡糖的純化方法，其特征在于，所述方法包括：采用離子交換樹脂處理含有唾液酸化寡糖的溶液；
2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述離子交換樹脂處理還包括采用酸性陽離子交換樹脂進行處理；
3.根據權利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述離子交換樹脂處理包括：將含有唾液酸化寡糖的溶液先進行酸性陽離子交換樹脂處理，再進行氯型弱堿性陰離子交換樹脂處理；
4.根據權利要求1~3任一項所述的方法，其特征在于，氯型弱堿性陰離子交換樹脂處理過程中，所述洗脫使用的洗脫劑為中性鹽和/或弱酸性鹽。
5.根據權利要求4所述的方法，其特征在于，所述洗脫劑的濃度為0.01-0.05m；
6.根據權利...
【專利技術屬性】
技術研發人員：陸姝歡，楊剛，馬凡提，李翔宇，
申請(專利權)人：嘉必優生物技術武漢股份有限公司，
類型：發明
國別省市：
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