【技術實現步驟摘要】
本申請涉及生物，尤其是涉及一種逆分化為真皮乳頭樣細胞的方法及應用。
技術介紹
1、毛發作為皮膚的附屬器官，在控制體溫和保護皮膚等方面起著重要作用。疾病和藥物治療都會導致脫發，雖然脫發不會直接威脅人類的生命，但會使患者的心理和生活質量造成一定的困擾。
2、目前對于脫發的治療目前主要采用藥物治療和自體毛囊移植兩種方法。市場上獲得治療脫發的藥物雖然具有一定的效果，但是并不能促進新的毛囊的形成，故治標不治本。隨著再生醫學的發展，基于細胞的毛囊再生提供了一種替代療法。人真皮乳頭細胞是一群特殊的真皮成纖維細胞，起源于毛囊底部。它們可以重新啟動與功能性角質形成細胞的上皮-間質相互作用，對于毛囊形態發生、毛發周期的調節和毛囊穩態的維持是必不可少的。因此，人類毛囊再生很大程度上依賴于培養擴增的真皮乳頭細胞。
3、然而，傳統的真皮乳頭細胞體外培養技術面臨著巨大的挑戰，包括真皮乳頭細胞增殖受限以及真皮乳頭細胞的毛發誘導潛力在較長時間內逐漸降低。
4、因此，獲得大量具有毛發誘導能力的真皮乳頭樣細胞對于有效的毛囊再生至關重要。
技術實現思路
1、本申請的目的在于克服上述現有技術的不足之處而提供一種逆分化為真皮乳頭樣細胞的方法及應用。
2、為實現上述目的，本申請采取的技術方案為：
3、本申請提供了一種逆分化為真皮乳頭樣細胞的方法，包括以下步驟：
4、提取、擴增及培養人原代包皮成纖維細胞，加入含有作用濃度為1～10μm的selumetini
5、在本申請的技術方案中，本申請通過加入作用濃度為1～10μm的selumetinib誘導，使人原代包皮成纖維細胞逆分化為真皮乳頭樣細胞，獲得的真皮乳頭樣細胞與原代人頭皮毛囊真皮乳頭細胞具有高度的生物分子表達相似性，有利于毛囊再生。
6、作為本申請所述逆分化為真皮乳頭樣細胞的方法的優選實施方式，所述selumetinib的作用濃度為5～10μm。
7、作為本申請所述逆分化為真皮乳頭樣細胞的方法的優選實施方式，所述selumetinib的作用濃度為10μm。
8、采用上述優選作用濃度的selumetinib，可以更好地使人原代包皮成纖維細胞逆分化為真皮乳頭樣細胞，有利于毛囊再生，適用于具有脫發癥狀的人群。
9、作為本申請所述逆分化為真皮乳頭樣細胞的方法的優選實施方式，所述selumetinib采用二甲基亞砜溶液溶解。
10、作為本申請所述逆分化為真皮乳頭樣細胞的方法的優選實施方式，所述培養基為含有質量濃度為5～15％?fbs的rpmi?1640培養基。
11、優選地，所述培養基為含有質量濃度為10％?fbs的rpmi?1640培養基。
12、作為本申請所述逆分化為真皮乳頭樣細胞的方法的優選實施方式，所述誘導的時間為6～8天(優選為8天)，每誘導2天更換一次培養基。
13、作為本申請所述逆分化為真皮乳頭樣細胞的方法的優選實施方式，所述提取、擴增及培養人原代包皮成纖維細胞的步驟，包括：
14、1)使用無菌磷酸鹽緩沖液沖洗包皮組織，然后將包皮組織剪碎置于中性蛋白酶ii溶液中消化，分離出真皮組織；
15、2)使用i型膠原酶對真皮組織進行消化處理，進行過濾，再將獲得的細胞懸浮在含有胎牛血清和青霉素/鏈霉素的dmem培養基中，然后置于37℃，5％co2環境下培養。
16、作為本申請所述逆分化為真皮乳頭樣細胞的方法的優選實施方式，所述人原代包皮成纖維細胞為廢棄人的包皮組織中提取的人包皮成纖維細胞。
17、作為本申請所述逆分化為真皮乳頭樣細胞的方法的優選實施方式，所述真皮乳頭樣細胞具有標志物堿性磷酸酶表達以及標志性基因表達。
18、作為本申請所述逆分化為真皮乳頭樣細胞的方法的優選實施方式，所述標志性基因包括alpl、bmp4、lef1、sox2、thy1、vcan和wif1中的至少一種。
19、采用本申請的方法獲得的真皮乳頭樣細胞具有標志物堿性磷酸酶表達以及標志性基因(alpl、bmp4、lef1、sox2、thy1、vcan和wif1)表達，與原代人頭皮毛囊真皮乳頭細胞具有高度的生物分子表達相似性，具有毛囊再生的效果。
20、作為本申請所述逆分化為真皮乳頭樣細胞的方法的優選實施方式，所述真皮乳頭樣細胞為人毛囊真皮乳頭樣細胞。
21、采用本申請的方法，人原代包皮成纖維細胞逆分化為人毛囊真皮乳頭樣細胞，可以實現毛囊再生，適用于具有脫發癥狀的人群。
22、本申請提供了上述逆分化為真皮乳頭樣細胞的方法在制備毛囊再生產品中的應用。
23、毛囊再生是指基于細胞移植的體內毛囊再生的微創方法，細胞移植主要涉及干細胞或表皮和真皮成分的混合物移植，將含有表皮干細胞和真皮乳頭樣細胞的混合物注射到裸鼠體內可以誘導具有正確組織結構的新生毛囊。
24、與現有技術相比，本申請具有以下有益效果：
25、本申請提供了一種逆分化為真皮乳頭樣細胞的方法及應用，本申請通過加入作用濃度為1～10μm的selumetinib誘導，使人原代包皮成纖維細胞逆分化為真皮乳頭樣細胞，獲得的真皮乳頭樣細胞具有標志物堿性磷酸酶表達以及標志性基因(alpl、bmp4、lef1、sox2、thy1、vcan和wif1)表達，與原代人頭皮毛囊真皮乳頭細胞具有高度的生物分子表達相似性，有利于毛囊再生。
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1.一種逆分化為真皮乳頭樣細胞的方法，其特征在于，包括以下步驟：
2.如權利要求1所述的逆分化為真皮乳頭樣細胞的方法，其特征在于，所述Selumetinib的作用濃度為5～10μM。
3.如權利要求2所述的逆分化為真皮乳頭樣細胞的方法，其特征在于，所述Selumetinib的作用濃度為10μM。
4.如權利要求1所述的逆分化為真皮乳頭樣細胞的方法，其特征在于，所述Selumetinib采用二甲基亞砜溶液溶解。
5.如權利要求1所述的逆分化為真皮乳頭樣細胞的方法，其特征在于，所述培養基為含有質量濃度為5～15％FBS的RPMI?1640培養基。
6.如權利要求1所述的逆分化為真皮乳頭樣細胞的方法，其特征在于，所述誘導的時間為6～8天，每誘導2天更換一次培養基。
7.如權利要求1所述的逆分化為真皮乳頭樣細胞的方法，其特征在于，所述真皮乳頭樣細胞具有標志物堿性磷酸酶表達以及標志性基因表達。
8.如權利要求7所述的逆分化為真皮乳頭樣細胞的方法，其特征在于，所述標志性基因包括ALPL、BMP4、LEF1、S
9.如權利要求1所述的逆分化為真皮乳頭樣細胞的方法，其特征在于，所述真皮乳頭樣細胞為人毛囊真皮乳頭樣細胞。
10.如權利要求1～9任一項所述的逆分化為真皮乳頭樣細胞的方法在制備毛囊再生產品中的應用。
...【技術特征摘要】
1.一種逆分化為真皮乳頭樣細胞的方法，其特征在于，包括以下步驟：
2.如權利要求1所述的逆分化為真皮乳頭樣細胞的方法，其特征在于，所述selumetinib的作用濃度為5～10μm。
3.如權利要求2所述的逆分化為真皮乳頭樣細胞的方法，其特征在于，所述selumetinib的作用濃度為10μm。
4.如權利要求1所述的逆分化為真皮乳頭樣細胞的方法，其特征在于，所述selumetinib采用二甲基亞砜溶液溶解。
5.如權利要求1所述的逆分化為真皮乳頭樣細胞的方法，其特征在于，所述培養基為含有質量濃度為5～15％fbs的rpmi?1640培養基。
6.如權利要求1所述的逆...
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