【技術實現步驟摘要】
本專利技術涉及植物次生代謝物提取，尤其涉及一種超聲輔助提取黑枸杞花青素的方法。
技術介紹
1、花青素是一種水溶性的類黃酮天然色素，在植物體內廣泛分布。花青素是天然的抗氧化劑，具有很強的抗氧化作用，能夠清除自由基，減緩衰老過程，同時還具有抗炎功能。而黑枸杞是花青素物質的良好來源，黑枸杞中的花青素物質種類多、含量高，是一種物美價廉的花青素天然來源。因此，可嘗試提取黑枸杞中的花青素，作為花青素來源。
2、然而，關于花青素的提取方法，目前主要是有機溶劑提取法，該方法存在提取時間長、提取產率低、提取穩定性差等缺點。對此，本領域開始采用超聲輔助提取法，該提取方法不對提取物的結構、活性產生影響，且操作簡單易行、提取料液雜質少、提取時間短、提取效率高。但如何合理優化超聲輔助提取參數，是目前的重點。
3、響應面法是通過構造一個具有明確表達式的多項式來表達函數，將體系的響應量作為一個或多個因素的函數，運用圖形技術將這種函數關系顯示出來，通過回歸分析得到響應量和影響因素的回歸關系，從而求得最佳提取工藝參數的一種數學方法。與正交法相比，用少量的試驗組就可以得出結果，并且所得到的最佳條件不是設定的值，而是在設定條件的范圍之內。
4、據此，為了合理高效地提取黑枸杞中的花青素，亟需開發一種基于響應面法優化超聲輔助提取黑枸杞花青素的方法。
技術實現思路
1、本專利技術所要解決的技術問題在于提供一種超聲輔助提取黑枸杞花青素的方法，其通過采用box-behnken?designs(
2、本專利技術采用以下技術方案解決上述技術問題：
3、一種超聲輔助提取黑枸杞花青素的方法，包括如下步驟：
4、(1)取新鮮黑枸杞去蒂，置于預冷研缽中磨成勻漿；
5、(2)將步驟(1)所得黑枸杞勻漿按照1：(30～70)的料液比加入含0.1％鹽酸的75％乙提取液，在超聲溫度20～60℃、超聲提取功率160w～320w的條件下，在恒溫超聲提取器中提取10～60min，得花青素提取液。
6、作為本專利技術的優選方式之一，所述步驟(2)中的料液比、超聲溫度、超聲提取功率、超聲提取時間均通過響應面法優化確定。
7、作為本專利技術的優選方式之一，所述料液比具體為1：61.2，超聲溫度為38.3℃，超聲提取功率為240w、超聲提取時間為16.65min。
8、作為本專利技術的優選方式之一，還包括ph示差法測定黑枸杞提取液中的花青素含量的步驟，和/或，高效液相色譜法測定黑枸杞花青素組分的步驟。
9、作為本專利技術的優選方式之一，所述ph示差法測定黑枸杞提取液中的花青素含量的具體步驟為：取所得的花青素提取液在4000r/min離心10min；取離心后的上清液，分別在ph1.0和ph4.5緩沖液下進行稀釋，利用可見分光光度計測定吸光度值。
10、作為本專利技術的優選方式之一，所述高效液相色譜法測定黑枸杞花青素組分的具體步驟為：取所得的花青素提取液在4000r/min離心10min；取離心后的上清液，沸水浴中水解30min，取出放冰上冷卻，用提取液再次定容；在6000r/min離心10min，取上清液，用0.22μm水相濾膜過濾，經過高效液相色譜儀測定其組分。
11、作為本專利技術的優選方式之一，采用賽默飛u3000高效液相色譜儀，色譜條件為：(a)色譜柱：cs柱，250mm×4.6mm×5m；(b)流動相a為含1％甲酸水溶液，流動相b為含1％甲酸乙腈溶液；(c)檢測波長：530nm；(d)柱溫：35℃；(e)進樣量：20μl；
12、洗脫程序為：0min時，0.8ml/min流速，92％流動相a，8％流動相b；2min時，0.8ml/min流速，88％流動相a，12％流動相b；5min時，0.8ml/min流速，80％流動相a，20％流動相b；10min時，0.8ml/min流速，75％流動相a，25％流動相b；15min時，0.8ml/min流速，70％流動相a，30％流動相b；18min時，0.8ml/min流速，55％流動相a，45％流動相b；20min時，0.8ml/min流速，20％流動相a，880％流動相b；22min時，0.8ml/min流速，92％流動相a，8％流動相b；30min時，0.8ml/min流速，92％流動相a，8％流動相b。
13、作為本專利技術的優選方式之一，經高效液相色譜儀測出黑枸杞花青素主要組分為飛燕草色素、矢車菊色素、天竺葵色素。
14、本專利技術相比現有技術的優點在于：
15、(1)本專利技術利用box-behnken?designs中心組合設計模型的響應面分析法對料液比、超聲提取溫度、提取時間、提取功率四個影響花青素提取的因素進行優化，獲得最佳超聲提取參數；基于上述最佳超聲提取參數，本專利技術獲得了一種操作簡單、提取時間短、提取效率高、成本低的超聲輔助提取黑枸杞花青素的方法；
16、(2)本專利技術利用含0.1％鹽酸的75％乙醇試劑，配合超聲波輔助提取黑枸杞花青素，其中，75％乙醇對黑枸杞花青素物質的提取率高，能夠提取得到較多的花青素物質；
17、(3)本專利技術利用box-behnken?designs中心組合設計模型的響應面分析法探究最佳超聲提取參數，僅需要用3個變化因子、3個水平及少量的實驗組(僅17組實驗)就可以得出優化結果，獲得最佳產率，在提高提取效率的同時，進一步降低能耗和污染物的排放，具有產業化生產的實際意義；
18、(4)本專利技術利用高效液相色譜法(hplc)對花青素組分分析，測定出其中含有的組分，方便后續分離優化，節約時間和提高效率；
19、(5)本專利技術促進了食品安全，具有較好的經濟效益和社會效益。
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1.一種超聲輔助提取黑枸杞花青素的方法，其特征在于，包括如下步驟：
2.根據權利要求1所述的超聲輔助提取黑枸杞花青素的方法，其特征在于，所述步驟(2)中的料液比、超聲溫度、超聲提取功率、超聲提取時間均通過響應面法優化確定。
3.根據權利要求1所述的超聲輔助提取黑枸杞花青素的方法，其特征在于，所述料液比具體為1：61.2，超聲溫度為38.3℃，超聲提取功率為240W、超聲提取時間為16.65min。
4.根據權利要求1所述的超聲輔助提取黑枸杞花青素的方法，其特征在于，還包括pH示差法測定黑枸杞提取液中的花青素含量的步驟，和/或，高效液相色譜法測定黑枸杞花青素組分的步驟。
5.根據權利要求4所述的超聲輔助提取黑枸杞花青素的方法，其特征在于，所述pH示差法測定黑枸杞提取液中的花青素含量的具體步驟為：取所得的花青素提取液在4000r/min離心10min；取離心后的上清液，分別在pH1.0和pH4.5緩沖液下進行稀釋，利用可見分光光度計測定吸光度值。
6.根據權利要求4所述的超聲輔助提取黑枸杞花青素的方法，其特征在于，所述高效液
7.根據權利要求6所述的超聲輔助提取黑枸杞花青素的方法，其特征在于，采用賽默飛U3000高效液相色譜儀，色譜條件為：(a)色譜柱：Cs柱，250mm×4.6mm×5m；(b)流動相A為含1％甲酸水溶液，流動相B為含1％甲酸乙腈溶液；(c)檢測波長：530nm；(d)柱溫：35℃；(e)進樣量：20μL；
8.根據權利要求6所述的超聲輔助提取黑枸杞花青素的方法，其特征在于，經高效液相色譜儀測出黑枸杞花青素組分為飛燕草色素、矢車菊色素、天竺葵色素。
...【技術特征摘要】
1.一種超聲輔助提取黑枸杞花青素的方法，其特征在于，包括如下步驟：
2.根據權利要求1所述的超聲輔助提取黑枸杞花青素的方法，其特征在于，所述步驟(2)中的料液比、超聲溫度、超聲提取功率、超聲提取時間均通過響應面法優化確定。
3.根據權利要求1所述的超聲輔助提取黑枸杞花青素的方法，其特征在于，所述料液比具體為1：61.2，超聲溫度為38.3℃，超聲提取功率為240w、超聲提取時間為16.65min。
4.根據權利要求1所述的超聲輔助提取黑枸杞花青素的方法，其特征在于，還包括ph示差法測定黑枸杞提取液中的花青素含量的步驟，和/或，高效液相色譜法測定黑枸杞花青素組分的步驟。
5.根據權利要求4所述的超聲輔助提取黑枸杞花青素的方法，其特征在于，所述ph示差法測定黑枸杞提取液中的花青素含量的具體步驟為：取所得的花青素提取液在4000r/min離心10min；取離心后的上清液，分別在ph1.0和ph4.5緩沖液下進行稀釋，利用...
【專利技術屬性】
技術研發人員：孫旭，陳穎，樊星耀，丁瑤瑤，龐淏天，張思林，劉林，王博，
申請(專利權)人：安徽農業大學，
類型：發明
國別省市：
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