【技術實現步驟摘要】
本專利技術屬于生物，具體涉及一種傷寒、副傷寒、霍亂、志賀、痢疾核酸檢測試劑盒及應用。
技術介紹
1、現有技術一般基于細菌的內部轉錄間隔區（internal?transcribed?spacer，its)區域設計，特異性有時不夠，且一般為單重檢測，一般采用普通taq酶，有較多的非特性擴增，容易造成假陽性。
2、腹瀉細菌的檢測目前主要通過培養，多重?pcr及單重熒光pcr進行監測，耗時耗力成本較高，且特異性不夠。
技術實現思路
1、本專利技術的目的是在現有技術的基礎上，提供一種傷寒、副傷寒、霍亂、志賀、痢疾核酸檢測試劑盒。本專利技術通過比較基因組與基因進化樹對于不同病原體選擇種屬特異性基因片段，且采用去大腸桿菌核酸的taq酶進行擴增，保證了擴增和檢測的特異性，并使用2管進行多重聯檢，提高了檢測效率。
2、本專利技術的另一目的是提供一種可同時檢測傷寒、副傷寒、霍亂、志賀、痢疾的多重熒光pcr檢測體系。
3、本專利技術的第三目的是提供一種上述核酸檢測試劑盒的具體用途。
4、本專利技術的目的可以通過以下措施達到：
5、一種傷寒、副傷寒、霍亂、志賀、痢疾核酸檢測試劑盒，它包括多重熒光pcr檢測體系，所述多重熒光pcr檢測體系包括傷寒沙門菌引物探針、副傷寒沙門菌引物探針、霍亂弧菌引物探針、痢疾阿米巴引物探針和志賀氏菌引物探針；其中
6、傷寒沙門菌引物探針的序列包括seq?id?no.1、seq?id?no.2、seq?id?
7、副傷寒沙門菌引物探針的序列包括seq?id?no.4、seq?id?no.5、seq?id?no.6、seqid?no.7、seq?id?no.8、seqid?no.9、seq?id?no.10、seq?id?no.11、seq?id?no.12；
8、霍亂弧菌引物探針的序列包括seq?id?no.13、seq?id?no.14、seq?id?no.15；
9、痢疾阿米巴引物探針的序列包括seq?id?no.16、seq?id?no.17、seq?id?no.18；
10、志賀氏菌引物探針的序列包括seq?id?no.19、seq?id?no.20、seq?id?no.21。
11、本專利技術還包括對探針的序列進行基團修飾，其中，?seq?id?no.3和seq?id?no.18的?5‘端和3‘端分別標記fam/bhq1，?seq?id?no.6,seq?id?no.9和seq?id?no.12的5‘端和3‘端分別標記vic/bhq1，?seq?id?no.15和seq?id?no.21的?5‘端和3‘端分別標記cy5和bhq3。
12、本專利技術的試劑盒中包括各探針混合液，酶和緩沖液混合液及陽性質控。進一步的，該試劑盒中包括a組引物探針混合液和b組引物探針混合液，其中a組引物探針混合液中含有傷寒沙門菌引物探針、副傷寒沙門菌引物探針和霍亂弧菌引物探針，b組引物探針混合液中含有痢疾阿米巴引物探針和志賀氏菌引物探針。
13、本專利技術公開了一種可同時檢測傷寒、副傷寒、霍亂、志賀、痢疾的多重熒光pcr檢測體系，它包括傷寒沙門菌引物探針、副傷寒沙門菌引物探針、霍亂弧菌引物探針、痢疾阿米巴引物探針和志賀氏菌引物探針；其中傷寒沙門菌引物探針的序列包括seq?id?no.1、seqid?no.2、seq?id?no.3；副傷寒沙門菌引物探針的序列包括seqid?no.4、seq?id?no.5、seqid?no.6、seq?id?no.7、seq?id?no.8、seq?id?no.9、seqid?no.10、seq?id?no.11、seq?idno.12；霍亂弧菌引物探針的序列包括seq?id?no.13、seq?id?no.14、seq?id?no.15；痢疾阿米巴引物探針的序列包括seqid?no.16、seq?id?no.17、seq?id?no.18；志賀氏菌引物探針的序列包括seq?id?no.19、seq?id?no.20、seq?id?no.21。
14、對探針的序列進行基團修飾，其中，所述seq?id?no.3和seq?id?no.18的?5‘端和3‘端分別標記fam/bhq1，所述seq?id?no.6,seq?id?no.9和seq?id?no.12的5‘端和3‘端分別標記vic/bhq1，所述seq?id?no.15和seq?id?no.21的?5‘端和3‘端分別標記cy5和bhq3。
15、本專利技術的核酸檢測試劑盒可應用在檢測腹瀉病原體方面，特別是應用在檢測傷寒、副傷寒、霍亂、志賀、痢疾病原體方面的應用。
16、本專利技術的有益效果：
17、腹瀉細菌的檢測目前主要通過培養，多重?pcr及單重熒光pcr進行監測，耗時耗力成本較高，且特異性不夠。通過比較基因組學和進化樹分析，本試劑盒選擇了幾種不同細菌種屬特異性和保守性特征基因進行引物探針設計，保證了檢測的特異性，準確性和靈敏度。其中傷寒沙門菌采用種屬特異的脫氨酶含域蛋白基因，甲乙丙三種型別的副傷寒沙門菌的分別推測特有基因，aaa?家族atpase基因和thif家族腺苷轉移酶基因，霍亂弧菌選擇轉錄調節因子基因，痢疾阿米巴采用半胱氨酸蛋白酶基因，志賀氏菌選擇特異基因ipah基因。
18、說明書附圖
19、圖1是a管待測樣本檢測結果；
20、圖2是b管待測樣本檢測結果。
本文檔來自技高網...【技術保護點】
1.一種傷寒、副傷寒、霍亂、志賀、痢疾核酸檢測試劑盒，其特征在于它包括多重熒光PCR檢測體系，所述多重熒光PCR檢測體系包括傷寒沙門菌引物探針、副傷寒沙門菌引物探針、霍亂弧菌引物探針、痢疾阿米巴引物探針和志賀氏菌引物探針；
2.根據權利要求1所述的試劑盒，其特征在于對探針的序列進行基團修飾，其中，所述SEQ?ID?NO.3和SEQ?ID?NO.18的5‘端和3‘端分別標記FAM/BHQ1，所述SEQ?ID?NO.6,SEQ?IDNO.9和SEQ?ID?NO.12的5‘端和3‘端分別標記VIC/BHQ1，所述SEQ?ID?NO.15和SEQ?ID?NO.21的5‘端和3‘端分別標記CY5和BHQ3。
3.根據權利要求1所述的試劑盒，其特征在于該試劑盒中包括各探針混合液，酶和緩沖液混合液及陽性質控。
4.根據權利要求3所述的試劑盒，其特征在于該試劑盒中包括A組引物探針混合液和B組引物探針混合液，其中所述A組引物探針混合液中含有所述傷寒沙門菌引物探針、副傷寒沙門菌引物探針和霍亂弧菌引物探針，所述B組引物探針混合液中含有所述痢疾阿米巴引物探針和志賀氏菌
5.一種可同時檢測傷寒、副傷寒、霍亂、志賀、痢疾的多重熒光PCR檢測體系，其特征在于它包括傷寒沙門菌引物探針、副傷寒沙門菌引物探針、霍亂弧菌引物探針、痢疾阿米巴引物探針和志賀氏菌引物探針；
6.根據權利要求1所述的多重熒光PCR檢測體系，其特征在于對探針的序列進行基團修飾，其中，所述SEQ?ID?NO.3和SEQ?ID?NO.18的5‘端和3‘端分別標記FAM/BHQ1，所述SEQ?IDNO.6,SEQ?ID?NO.9和SEQ?ID?NO.12的5‘端和3‘端分別標記VIC/BHQ1，所述SEQ?ID?NO.15和SEQ?ID?NO.21的5‘端和3‘端分別標記CY5和BHQ3。
7.權利要求1所述的核酸檢測試劑盒在檢測腹瀉病原體方面的應用。
8.權利要求1所述的核酸檢測試劑盒在檢測傷寒、副傷寒、霍亂、志賀、痢疾病原體方面的應用。
...【技術特征摘要】
1.一種傷寒、副傷寒、霍亂、志賀、痢疾核酸檢測試劑盒，其特征在于它包括多重熒光pcr檢測體系，所述多重熒光pcr檢測體系包括傷寒沙門菌引物探針、副傷寒沙門菌引物探針、霍亂弧菌引物探針、痢疾阿米巴引物探針和志賀氏菌引物探針；
2.根據權利要求1所述的試劑盒，其特征在于對探針的序列進行基團修飾，其中，所述seq?id?no.3和seq?id?no.18的5‘端和3‘端分別標記fam/bhq1，所述seq?id?no.6,seq?idno.9和seq?id?no.12的5‘端和3‘端分別標記vic/bhq1，所述seq?id?no.15和seq?id?no.21的5‘端和3‘端分別標記cy5和bhq3。
3.根據權利要求1所述的試劑盒，其特征在于該試劑盒中包括各探針混合液，酶和緩沖液混合液及陽性質控。
4.根據權利要求3所述的試劑盒，其特征在于該試劑盒中包括a組引物探針混合液和b組引物探針混合液，其中所述a組引物探針混合液中含有所述傷寒沙門菌引物探針、副傷...
【專利技術屬性】
技術研發人員：霍翔，喬昕，鄭東宇，
申請(專利權)人：江蘇省疾病預防控制中心江蘇省預防醫學科學院，
類型：發明
國別省市：
還沒有人留言評論。發表了對其他瀏覽者有用的留言會獲得科技券。