【技術實現步驟摘要】
本專利技術涉及生物檢測領域，具體的，本專利技術涉及一種用于黑色素瘤抗pd-1免疫治療療效預測的標志物組合及其應用。
技術介紹
1、黑色素瘤是一種起源于黑色素細胞的高度惡性腫瘤，可發生于皮膚、肢端、黏膜、眼葡萄膜等組織和器官，惡性程度高，預后差。
2、根據黑色素瘤的發病部位及陽光受損程度，將黑色素瘤分為不同的四種亞型：黏膜型，肢端型，慢性陽光損傷型以及非慢性陽光損傷型。各亞型分布具有明顯的人種差異，肢端黑色素瘤是亞裔人群高發亞型，好發于手掌、腳掌和甲下。黏膜型黑色素瘤好發于口腔，鼻腔，陰道，食管，腸道等隱匿部分，是歐美人群中的罕見亞型，僅占所有黑色素瘤的1％–2％，而在亞裔人群中為第二高發黑色素瘤亞型，約占20％–30％，由于其解剖位置，容易延誤就診，通常在疾病晚期被確診，預后較差。5年總生存率僅為25％左右，而皮膚黑色素瘤的5年總生存率為54％～80％。
3、迄今為止，國際黑色素瘤診療指南采用的循證醫學依據主要基于皮膚黑色素瘤的研究，指南提供的治療方案尚不能滿足肢端和黏膜黑色素瘤的需求，多數晚期患者面臨“無藥可醫”的窘境。例如，約50％的皮膚黑色素瘤患者攜帶braf基因突變，針對這部分患者，braf抑制劑聯合mek抑制劑治療，療效顯著。但在肢端黑色素瘤中，braf基因突變頻率僅為15.5％；黏膜黑色素瘤中，braf基因突變頻率僅為12.5％，且存在一定比例的肢端和黏膜型患者由于攜帶特殊的突變，對braf抑制劑缺乏敏感性。
4、近年來，以pd-1為代表的免疫檢查點抑制劑在黑色素瘤治療中取得了巨大
5、鑒于亞裔和歐美人群黑色素瘤亞型的明顯差異，以及他們不同的ici反應率，目前本領域面臨的主要挑戰是識別和開發可預測亞裔黑色素瘤ici療效的生物標志物，以精準發現免疫治療獲益的腫瘤患者。
技術實現思路
1、為了填補現有技術的空白，本專利技術提供如下的技術方案：
2、本專利技術的第一個方面，提供一種檢測試劑在制備用于黑色素瘤抗pd-1免疫治療療效預測的試劑盒中的應用，所述檢測試劑為免疫熒光試劑，所述生物標志物為cd68、cd3、s100、cd20、pdl1和pd1。
3、在一種實施方式中，所述應用包括，使用所述免疫熒光試劑對患者黑色素瘤樣本進行染色，通過識別和定量計算腫瘤組織中cd3、cd20、cd68、pd-l1、pd-1、pd-l1、pd-1+cd68、pd-1+cd3、pd-1+cd20、pd-l1+cd68、pd-l1+cd3、pd-l1+cd20陽性細胞數及其所占百分比，來預測該患者對抗pd-1免疫治療的療效。其中，所述計算包括計算免疫治療預測評分：
4、免疫治療療效評分＝生物標志物陽性細胞數/dapi染色(s100、cd68、cd3、cd20、pd-l1和pd-1)陽性總細胞數；
5、或，
6、免疫治療療效評分＝生物標志物陽性細胞數(s100+細胞為中心的周圍0-25um范圍內細胞)/dapi染色(s100、cd68、cd3、cd20、pd-l1和pd-1)陽性總細胞數(s100+細胞為中心的周圍0-25um范圍內細胞)；
7、或，
8、免疫治療療效評分＝生物標志物陽性細胞數(s100+細胞為中心的周圍25-50um范圍內細胞)/dapi染色(s100、cd68、cd3、cd20、pd-l1和pd-1)陽性總細胞數(s100+細胞為中心的周圍25-50um范圍內細胞)；
9、根據不同生物標志物所對應的免疫治療療效評分cutoff值(預測臨界值)來評價患者免疫治療療效，高于cutoff值的患者判定為免疫治療獲益人群，低于cutoff值的患者判定為免疫治療不獲益(無效)人群。
10、在一種優選的實施方式中，所述免疫治療療效評分＝pd1+cd3+細胞數(s100+細胞為中心的周圍25-50um范圍內細胞)/dapi標注細胞數(s100+細胞為中心的周圍25-50um范圍內細胞)，所述cutoff值為0.05。
11、本專利技術的第二個方面，提供一種黑色素瘤抗pd-1免疫治療療效預測模型，所述模型為：免疫治療療效評分＝生物標志物陽性細胞數/dapi染色(s100、cd68、cd3、cd20、pd-l1和pd-1)陽性總細胞數；
12、或，
13、免疫治療療效評分＝生物標志物陽性細胞數(s100+細胞為中心的周圍0-25um范圍內細胞)/dapi染色(s100、cd68、cd3、cd20、pd-l1和pd-1)陽性總細胞數(s100+細胞為中心的周圍0-25um范圍內細胞)；
14、或，
15、免疫治療療效評分＝生物標志物陽性細胞數(s100+細胞為中心的周圍25-50um范圍內細胞)/dapi染色(s100、cd68、cd3、cd20、pd-l1和pd-1)陽性總細胞數(s100+細胞為中心的周圍25-50um范圍內細胞)；
16、所述模型的使用方式為：根據不同生物標志物所對應的免疫治療療效評分cutoff值(預測臨界值)來評價患者免疫治療療效，高于cutoff值的患者判定為免疫治療獲益人群，低于cutoff值的患者判定為免疫治療不獲益(無效)人群。
17、在一種優選的實施方式中，免疫治療療效評分＝pd1+cd3+細胞數(s100+細胞為中心的周圍25-50um范圍內細胞)/dapi標注細胞數(s100+細胞為中心的周圍25-50um范圍內細胞)，所述cutoff值為0.05。
18、本專利技術的第三個方面，提供一種用于黑色素瘤抗pd-1免疫治療療效預測的試劑盒，所述試劑盒包括檢測試劑，所述檢測試劑為免疫熒光試劑，所述生物標志物為cd68、cd3、s100、cd20、pdl1和pd1。
19、在一種實施方式中，所述試劑盒的使用方式為：使用所述免疫熒光試劑對患者黑色素瘤樣本進行染色，通過識別和定量計算腫瘤組織中cd3、cd20、cd68、pd-l1、pd-1、pd-l1、pd-1+cd68、pd-1+cd3、pd-1+cd20、pd-l1+cd68、pd-l1+cd3、pd-l1+cd20陽性細胞數及其所占百分比，來預測該患者對抗pd-1免疫治療的療效。
20、相對于現有技術，本專利技術具有如下顯著的進步：
21、(1)本專利技術所涉及的生物標志物源于近期大量相本文檔來自技高網...
【技術保護點】
1.一種檢測試劑在制備用于黑色素瘤抗PD-1免疫治療療效預測的試劑盒中的應用，其特征在于，所述檢測試劑為免疫熒光試劑，所述生物標志物為CD68、CD3、S100、CD20、PDL1和PD1。
2.如權利要求1所述的應用，其特征在于，所述應用包括，使用所述免疫熒光試劑對患者黑色素瘤樣本進行染色，通過識別和定量計算腫瘤組織中CD3、CD20、CD68、PD-L1、PD-1、PD-L1、PD-1+CD68、PD-1+CD3、PD-1+CD20、PD-L1+CD68、PD-L1+CD3、PD-L1+CD20陽性細胞數及其所占百分比，來預測該患者對抗PD-1免疫治療的療效。
3.如權利要求2所述的應用，其特征在于，所述計算包括計算免疫治療預測評分，
4.如權利要求3所述的應用，其特征在于，
5.一種黑色素瘤抗PD-1免疫治療療效預測模型，其特征在于，所述模型為：
6.如權利要求5所述的模型，其特征在于，
7.一種用于黑色素瘤抗PD-1免疫治療療效預測的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒包括檢測試劑，所述檢測試劑為免疫熒光試
8.如權利要求7所述的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒的使用方式為：使用所述免疫熒光試劑對患者黑色素瘤樣本進行染色，通過識別和定量計算腫瘤組織中CD3、CD20、CD68、PD-L1、PD-1、PD-L1、PD-1+CD68、PD-1+CD3、PD-1+CD20、PD-L1+CD68、PD-L1+CD3、PD-L1+CD20陽性細胞數及其所占百分比，來預測該患者對抗PD-1免疫治療的療效。
...【技術特征摘要】
1.一種檢測試劑在制備用于黑色素瘤抗pd-1免疫治療療效預測的試劑盒中的應用，其特征在于，所述檢測試劑為免疫熒光試劑，所述生物標志物為cd68、cd3、s100、cd20、pdl1和pd1。
2.如權利要求1所述的應用，其特征在于，所述應用包括，使用所述免疫熒光試劑對患者黑色素瘤樣本進行染色，通過識別和定量計算腫瘤組織中cd3、cd20、cd68、pd-l1、pd-1、pd-l1、pd-1+cd68、pd-1+cd3、pd-1+cd20、pd-l1+cd68、pd-l1+cd3、pd-l1+cd20陽性細胞數及其所占百分比，來預測該患者對抗pd-1免疫治療的療效。
3.如權利要求2所述的應用，其特征在于，所述計算包括計算免疫治療預測評分，
4.如權利要求3所述的應用，其特征在于，
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【專利技術屬性】
技術研發人員：孔燕，焦濤，郭軍，杜海貞，張峰浩，
申請(專利權)人：北京市腫瘤防治研究所，
類型：發明
國別省市：
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