【技術實現步驟摘要】
本專利技術涉及醫學，特別是涉及一種新型卵巢型子宮內膜異位癥小鼠模型的構建方法。
技術介紹
1、卵巢型子宮內膜異位癥(ovarian?endometriosis，oems)，是具有活性的子宮內膜組織異位于卵巢所引起的婦科疾病，又稱為卵巢巧克力囊腫，簡稱巧囊。oems患者的臨床表現為痛經、慢性盆腔疼痛、性交困難和盆腔粘連。其發病率不斷提高，50％的oems可以累及雙側卵巢，同時約有40％-50％的患者伴隨不孕癥，占不孕女性的35％，是育齡婦女不孕的主要原因之一。oems對生殖過程表現為“全方位”的干擾，包括子宮內膜容受性下降，卵泡發育存在異常，盆腔內的炎癥微環境不利于精子、卵子、胚胎及輸卵管發揮正常功能，表觀遺傳學的改變，oems治療術后對卵巢功能的影響及盆腔粘連等因素。目前的治療方法為藥物治療和手術。但是由于其發病機制尚不清楚導致子宮內膜異位癥治療存在一定的局限性。因此，為了更深入地理解子宮內膜異位癥，建立和鑒定相關模型是研究和治療這一疾病的關鍵。
2、目前內異癥的模型包括，永生化細胞、原代細胞模型以及動物模型。永生化細胞系的優點在于能多次傳代，方便機制相關研究，缺點是它們的轉化表型不能保持原始組織的三維(3d)結構及生理特性。而原代細胞模型的優點在于能夠較好的保持原始組織的特性，但是內異癥的在位和異位內膜的腺上皮和間質細胞提取數量少，無法穩定傳代，導致結果個體差異大。動物模型目前已有關于模擬人類疾病的小鼠子宮內膜異位癥模型的報道，包括腹膜病變和深部子宮內膜異位癥小鼠模型的報道。在以往的報道中，大多數子宮內膜異位癥小鼠
技術實現思路
1、為了解決上述問題，本專利技術提供了一種卵巢型子宮內膜異位癥小鼠模型的構建方法，通過卵巢功能及生育力能力測試，研究結果表明，卵巢型子宮內膜異位癥小鼠模型構建成功，與臨床患者的相關表型相吻合，為探索卵巢型子宮內膜異位癥的發病機制提供了理想的模型，有望推動該領域的研究。
2、為實現上述目的，本專利技術提供一種卵巢型子宮內膜異位癥小鼠模型的構建方法，其特征在于，包括如下步驟，
3、s1.供體小鼠內膜的獲?。簩?±2周齡的供體balb/c雌性小鼠處死解剖以獲得子宮內膜組織，并將其整塊解剖后在磷酸鹽緩沖鹽水中清除纖維脂肪組織；將子宮組織縱切分成2±0.5mm×2±0.5mm的小塊；然后將子宮小塊放入1±0.2mg/ml膠原酶溶液中并在37±2℃下孵育30±5min；然后將子宮小塊第一次離心，除去上清液后重新懸浮于pbs中，第二次離心洗滌除去上清以除去膠原酶；再將其置于無菌pbs中等待移植；
4、s2.受體小鼠手術移植：拉出過了適應期后的9周齡balb/c雌性小鼠的卵巢，劃破卵巢表面的囊膜，只造成缺口，暴露部分表面，不完全剝離，然后將s1步驟所得的子宮小塊附著于缺口處，使得子宮小塊覆蓋卵巢暴露的表面，每側卵巢放置4-6塊s1步驟所得的子宮小塊，再盡可能快的推回腹腔中，用縫合釘釘住皮膚和肌肉，消毒后放回鼠籠；禁食24小時，可自由飲水；24小時后常規喂養即可。
5、進一步，所述s1步驟中，第一次離心和第二次離心的條件均為8000×g離心3-8分鐘；更優選的，第一次離心和第二次離心的條件均為8000×g離心5分鐘。
6、進一步，所述s1步驟中，子宮小塊與膠原酶溶液的加量體積比例為1：3。
7、進一步，所述s2步驟中，拉出過了適應期后的9周齡balb/c雌性小鼠的卵巢的步驟為，使用異氟烷誘導和維持全身麻醉過了適應期后的9周齡balb/c雌性小鼠在小鼠雙側背部皮膚和肌肉層上形成5-7mm的切口，以尋找卵巢；尋找到卵巢后用鑷子夾住卵巢相連的脂肪墊拉出卵巢整體。
8、進一步，所述s2步驟中，誘導時異氟烷的用量為3％；維持時異氟烷用量為2.5％。
9、本專利技術的有益效果是：這是一種新型的卵巢型子宮內膜異位癥小鼠模型，可以評估卵巢功能情況及不孕的影響?？朔爽F有的子宮內膜異位癥小鼠模型中缺乏專門卵巢型的缺陷。該方法不需要術前/術后雌二醇管理，操作簡單、節約時間、效果良好，造模成功率高(約90％)等優點，值得進一步推廣。
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1.一種卵巢型子宮內膜異位癥小鼠模型的構建方法，其特征在于，包括如下步驟，
2.如權利要求1所述的構建方法，其特征在于，所述S1步驟中，第一次離心和第二次離心的條件均為8000×g離心3-8分鐘；更優選的，第一次離心和第二次離心的條件均為8000×g離心5分鐘。
3.如權利要求1所述的構建方法，其特征在于，所述S1步驟中，子宮小塊與膠原酶溶液的加量體積比例為1：3。
4.如權利要求1所述的構建方法，其特征在于，所述S2步驟中，拉出過了適應期后的9周齡BALB/c雌性小鼠的卵巢的步驟為，使用異氟烷誘導和維持全身麻醉過了適應期后的9周齡BALB/c雌性小鼠在小鼠雙側背部皮膚和肌肉層上形成5-7mm的切口，以尋找卵巢；尋找到卵巢后用鑷子夾住卵巢相連的脂肪墊拉出卵巢整體。
5.如權利要求1所述的構建方法，其特征在于，所述S2步驟中，誘導時異氟烷的用量為3％；維持時異氟烷用量為2.5％。
【技術特征摘要】
1.一種卵巢型子宮內膜異位癥小鼠模型的構建方法，其特征在于，包括如下步驟，
2.如權利要求1所述的構建方法，其特征在于，所述s1步驟中，第一次離心和第二次離心的條件均為8000×g離心3-8分鐘；更優選的，第一次離心和第二次離心的條件均為8000×g離心5分鐘。
3.如權利要求1所述的構建方法，其特征在于，所述s1步驟中，子宮小塊與膠原酶溶液的加量體積比例為1：3。
4.如權利要...
【專利技術屬性】
技術研發人員：吳榮鋒，高朝陽，陳瓊華，陳義好，顏曉紅，
申請(專利權)人：廈門大學附屬第一醫院廈門市第一醫院，廈門市紅十字會醫院，廈門市糖尿病研究所，
類型：發明
國別省市：
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