【技術實現步驟摘要】
本專利技術涉及材料合成及生物成像分析，具體涉及一種定位溶酶體的熒光探針及其制備方法和生物應用。
技術介紹
1、細胞器使分子能夠進行空間聚集，從而有利于它們非常適合在特定復雜功能的微環境中的相互作用。溶酶體的一個眾所周知的功能是降解和回收細胞廢物。細胞外物質主要通過內吞作用和吞噬作用到達溶酶體，到達溶酶體的物質被溶酶體水解酶降解，由此產生的分解產物用于產生新的細胞成分和能量，以響應細胞的營養需求。溶酶體還參與一種稱為溶酶體胞吐作用的“非常規”分泌途徑，它在質膜修復、免疫反應和骨吸收等各種生理過程中起著重要作用。溶酶體腔的酸性ph值接近4.5，含有大約60種不同的可溶性水解酶，這些酶直接參與代謝物的降解。溶酶體膜含有介導溶酶體功能不同方面的轉運蛋白、離子通道和snare等蛋白質，以及介導溶酶體酸化的vatp酶復合物。值得注意的是，溶酶體還被發現與各種常見疾病有關，如神經退行性疾病、感染、肥胖和癌癥。因此，溶酶體被認為是疾病診斷與治療的重要靶點，對其精細結構變化的實時影像分析對溶酶體應激相關疾病的診斷及治療具有重要意義。
2、目前，有機小分子成像由于其生物相容性高，抗光漂白能力強，可以實時監測細胞內反應已成為一個熱門的研究課題，并已應用于細胞顯影、化學傳感、光動力治療等許多領域。盡管已經報道了各種用于觀察溶酶體形態及檢測其成分的各種熒光探針，但現已開發的溶酶體熒光探針的ph穩定性、光漂白性以及生物相容性仍需提高。因此，開發用于活細胞溶酶體實時成像的熒光探針是非常重要的。
技術實現思路p>
1、(一)解決的技術問題
2、針對現有技術的不足，本專利技術提供了一種熒光探針、制備方法及其生物學應用，解決了現有熒光探針抗光漂白性差，生物相容性低，極性不穩定技術問題，本專利技術提供一種用于活細胞溶酶體實時成像的熒光探針、所述熒光探針的制備方法、所述熒光探針在生物學中的應用。
3、(二)技術方案
4、為實現以上目的，本專利技術通過以下技術方案予以實現：一種熒光探針，其化學結構式如下：
5、
6、一方面，本專利技術還提供了一種熒光探針的制備方法，具體包括以下步驟：
7、s1、將1-苯基丁烷-1，3-二酮和三氟化硼加入圓底燒瓶中，以甲苯作為溶劑，在水浴加熱的條件下反應得到白色沉淀即中間產物1；
8、s2、中間體1再與6-羥基-2-萘甲醛混合加入100ml的三口圓底燒瓶中，使用雙排管抽真空、鼓氮氣三次，并插入氮氣球，氮氣環境下使用注射器加入哌啶，緊接著用注射器加入40ml溶劑甲苯，鼓氮氣30分鐘，將反應裝置放入水浴鍋內加熱回流反應得到紅色沉淀即所述熒光探針；
9、s3、將步驟s2所得紅色沉淀抽濾，并用乙醇多次洗滌得紅色固體；
10、s4、將步驟s3所得紅色固體用二氯甲烷溶解，用柱層析純化得紅色溶液，將紅色溶液旋轉蒸發濃縮后，真空干燥，得到紅色固體粉末，即所述熒光探針。
11、優選的，所述步驟s1中1-苯基丁烷-1，3-二酮與三氟化硼的摩爾比為1：1，反應溫度為80℃，反應時間為10小時。
12、優選的，所述步驟s2中中間體1與6-羥基-2-萘甲醛得摩爾比為1.5：1，反應溫度為75℃，反應時間為17小時。
13、優選的，所述步驟s4中柱層析純化過程中洗出液為石油醚與乙酸乙酯混合液，且體積比為：v石油醚：v乙酸乙酯＝2:1。
14、優選的，所述步驟s3中所得紅色沉淀冷卻到室溫，抽濾時用乙醇洗滌2-3次得到紅色固體。
15、優選的，所述步驟s2中氮氣環境下使用注射器加入哌啶的量為0.16g，1.86mmol。
16、另一方面，本專利技術還提供了一種通過熒光探針的制備方法制備的熒光探針在與在活細胞溶酶體實時成像中的應用。
17、(三)有益效果
18、本專利技術提供了一種熒光探針、制備方法及其生物學應用。與現有技術相比具備以下有益效果：
19、(1)、該熒光探針、制備方法及其生物學應用，本專利技術的熒光探針，合成方法簡單，原料廉價，易于重復；能夠實現對活細胞溶酶體實時成像。
20、(2)、該熒光探針、制備方法及其生物學應用，具有高特異性，定位于細胞溶酶體，對ph以及極性的響應不敏感，抗光漂白能力強，生物相容性高，細胞毒性小。
21、(3)、該熒光探針、制備方法及其生物學應用，具有溶酶體靶向特異性，對ph以及極性的響應不敏感，抗光漂白性能較強，生物相容性高，對細胞基本沒有毒性。因此本專利技術的熒光探針特別適用于活細胞溶酶體實時成像。
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1.一種熒光探針，其特征在于：其化學結構式如下：
2.根據權利要求1所述的一種熒光探針的制備方法，其特征在于：具體包括以下步驟：
3.根據權利要求2所述的一種熒光探針的制備方法，其特征在于：所述步驟S1中1-苯基丁烷-1，3-二酮與三氟化硼的摩爾比為1：1，反應溫度為80℃，反應時間為10小時。
4.根據權利要求2所述的一種熒光探針的制備方法，其特征在于：所述步驟S2中中間體1與6-羥基-2-萘甲醛得摩爾比為1.5：1，反應溫度為75℃，反應時間為17小時。
5.根據權利要求2所述的一種熒光探針的制備方法，其特征在于：所述步驟S4中柱層析純化過程中洗出液為石油醚與乙酸乙酯混合液，且體積比為：V石油醚：V乙酸乙酯＝2:1。
6.根據權利要求2所述的一種熒光探針的制備方法，其特征在于：所述步驟S3中所得紅色沉淀冷卻到室溫，抽濾時用乙醇洗滌2-3次得到紅色固體。
7.根據權利要求2所述的一種熒光探針的制備方法，其特征在于：所述步驟S2中氮氣環境下使用注射器加入哌啶的量為0.16g，1.86mmol。
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...【技術特征摘要】
1.一種熒光探針，其特征在于：其化學結構式如下：
2.根據權利要求1所述的一種熒光探針的制備方法，其特征在于：具體包括以下步驟：
3.根據權利要求2所述的一種熒光探針的制備方法，其特征在于：所述步驟s1中1-苯基丁烷-1，3-二酮與三氟化硼的摩爾比為1：1，反應溫度為80℃，反應時間為10小時。
4.根據權利要求2所述的一種熒光探針的制備方法，其特征在于：所述步驟s2中中間體1與6-羥基-2-萘甲醛得摩爾比為1.5：1，反應溫度為75℃，反應時間為17小時。
5.根據權利要求2所述的一種熒光探針的...
【專利技術屬性】
技術研發人員：鄭夢月，于曉明，劉正杰，張瑞龍，韓光梅，耿軍龍，張忠平，
申請(專利權)人：安徽大學，
類型：發明
國別省市：
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