【技術實現步驟摘要】
本專利技術涉及生物醫藥，尤其是一種具有抗炎和組織修復作用的透明質酸納米涂層細菌及其制備方法和應用。
技術介紹
1、局部炎癥和組織損傷在各種腸外疾病的病理生理學中起著至關重要的作用。各種內源性和外源性危險信號可造成組織損傷，從而導致器官功能的突然喪失。反過來，受損組織在局部釋放的不同因子又會觸發炎癥級聯反應和免疫細胞的招募，從而導致組織的進一步損傷。盡管炎癥和組織損傷之間的因果關系尚無定論，但這種相互影響是導致腸道外疾病的一個主要因素。腸道外器官發生的局部炎癥可立即擴散到腸道，引發腸道炎癥。相反，腸道炎癥和腸道外炎癥之間的相互影響會加速全身炎癥，毒素和病原體從腸道持續轉運到全身循環，最終到達腸道外器官，造成組織損傷，從而形成惡性循環，加劇腸道外疾病。因此，能夠在受損的腸道和腸道外器官產生炎癥抑制和組織恢復雙重效果的策略對逆轉腸道外疾病具有重要意義。
2、傳統藥物，如非甾體抗炎藥、糖皮質激素和單克隆抗體，被廣泛用于減輕炎癥。這些療法包括直接清除致病刺激物、消減促炎細胞因子和非噬菌體清除免疫細胞。然而，使用這些療法與細菌感染的風險增加高度相關，如艱難梭菌、沙門氏菌和志賀氏桿菌。例如，一項針對克羅恩病的臨床隊列研究表明，接受英夫利昔單抗(一種抗腫瘤壞死因子-α(tnf-α)的單克隆抗體)治療后發生嚴重感染的比例明顯高于未接受治療的患者。另一方面，許多靶向轉化生長因子-β(tgf-β)、受體酪氨酸激酶和磷脂酰肌醇3-激酶的小分子和化合物目前已應用于臨床試驗，以修復器官損傷。例如，大多數tgf-β抑制劑可能會誘發心臟毒性，表現為
3、所以，需要設計一種具有抗炎和組織修復作用的透明質酸納米涂層細菌及其制備方法和應用。
技術實現思路
1、為了克服現有技術中的缺陷，提供一種具有抗炎和組織修復作用的透明質酸納米涂層細菌及其制備方法和應用。
2、本專利技術通過下述方案實現：
3、一種具有抗炎和組織修復作用的透明質酸納米涂層細菌，該透明質酸納米涂層細菌包括孢子，在所述孢子的表面沉積有陽離子殼聚糖，在所述陽離子殼聚糖表面對應設有透明質酸。
4、所述孢子為在孢子培養基中培養丁酸桿菌產生的休眠孢子。
5、陽離子殼聚糖通過靜電作用沉積在收集到的孢子表面。
6、一種具有抗炎和組織修復作用的透明質酸納米涂層細菌的制備方法，該方法包括以下步驟：將細菌在產孢培養基中培養后得到細菌和孢子混合物，將細菌和孢子混合物進行純化后得到孢子，通過靜電作用，陽離子殼聚糖沉積在孢子表面得到cs沉積孢子，這些表面電荷反轉的cs沉積孢子與透明質酸混合即可進一步包被，得到透明質酸納米涂層細菌。
7、所述細菌在產孢培養基中培養的具體步驟為：將細菌在產孢培養基中并保持溫度為37℃的厭氧環境中培養；
8、從american?type?culture?collection中獲得caco-2和hk-2細胞系，分別在添加10％?fbs和1％青霉素-鏈霉素的dmem/f-12和dmem培養基中，在5％?co2培養箱中37℃培養。
9、所述細菌為丁酸梭菌。
10、所述產孢培養基包含0.3％乳糖、0.035％?mgso4、1％酵母膏、0.2％nahco3、0.3％k2hpo4、0.1％?kh2po4。
11、細菌和孢子混合物進行純化的具體步驟為：將細菌在產孢培養基中培養10-14天后，獲得的細菌和孢子混合物，將獲得的細菌和孢子混合物在5500×g下離心10min，80℃煮沸20min后，用65％蔗糖和35％蔗糖的溶液密度梯度離心進一步純化孢子；然后用磷酸鹽緩沖鹽水洗滌純化的孢子，并在室溫下真空干燥即得純化后的孢子。
12、一種具有抗炎和組織修復作用的透明質酸納米涂層細菌的應用，所述透明質酸納米涂層細菌作為制備同時具有抗炎和組織修復作用藥物的應用。
13、所述透明質酸納米涂層細菌作為制備減輕腸道粘膜炎癥、恢復腸道屏障完整性藥物的應用；
14、所述透明質酸納米涂層細菌還能作為制備重塑微生物代謝產物和減少微生物轉運藥物的應用，該藥物可以減輕腸道外器官的間質炎癥和病理損傷。
15、本專利技術的有益效果為：
16、本申請一種具有抗炎和組織修復作用的透明質酸納米涂層細菌利用透明質酸納米包被丁酸梭菌在受損的腸道和腸道外器官中產生抗炎和組織修復效應。在陽離子殼聚糖表面電荷反轉的幫助下，帶負電荷的丁酸桿菌可在細胞兼容的條件下通過靜電作用與陰離子ha納米包被在一起，形成的ha納米涂層能夠保護丁酸桿菌免受胃腸道(gi)損傷，并改善其在腸道炎癥和損傷部位的積聚。由于ha的先天免疫抑制特性與丁酸桿菌的丁酸生產行為相結合，納米包被細菌能有效緩解腸道粘膜炎癥，恢復腸道屏障的完整性。通過重塑微生物代謝產物和減少微生物轉運，納米包被細菌還能減輕腸道外器官的間質炎癥和病理損傷。
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1.一種具有抗炎和組織修復作用的透明質酸納米涂層細菌，其特征在于：該透明質酸納米涂層細菌包括孢子，在所述孢子的表面沉積有陽離子殼聚糖，在所述陽離子殼聚糖表面對應設有透明質酸。
2.根據權利要求1所述的一種具有抗炎和組織修復作用的透明質酸納米涂層細菌，其特征在于：所述孢子為在孢子培養基中培養丁酸桿菌產生的休眠孢子。
3.根據權利要求1所述的一種具有抗炎和組織修復作用的透明質酸納米涂層細菌，其特征在于：陽離子殼聚糖通過靜電作用沉積在收集到的孢子表面。
4.一種如權利要求1-3中任一權利項所述的具有抗炎和組織修復作用的透明質酸納米涂層細菌的制備方法，其特征在于，該方法包括以下步驟：將細菌在產孢培養基中培養后得到細菌和孢子混合物，將細菌和孢子混合物進行純化后得到孢子，通過靜電作用，陽離子殼聚糖沉積在孢子表面得到CS沉積孢子，這些表面電荷反轉的CS沉積孢子與透明質酸混合即可進一步包被，得到透明質酸納米涂層細菌。
5.根據權利要求4所述的一種具有抗炎和組織修復作用的透明質酸納米涂層細菌的制備方法，其特征在于，所述細菌在產孢培養基中培養的具體步驟
6.根據權利要求5所述的一種具有抗炎和組織修復作用的透明質酸納米涂層細菌的制備方法，其特征在于：所述細菌為丁酸梭菌。
7.根據權利要求5所述的一種具有抗炎和組織修復作用的透明質酸納米涂層細菌的制備方法，其特征在于：所述產孢培養基包含0.3％乳糖、0.035％MgSO4、1％酵母膏、0.2％NaHCO3、0.3％K2HPO4、0.1％KH2PO4。
8.根據權利要求4所述的一種具有抗炎和組織修復作用的透明質酸納米涂層細菌的制備方法，其特征在于：細菌和孢子混合物進行純化的具體步驟為：將細菌在產孢培養基中培養10-14天后，獲得的細菌和孢子混合物，將獲得的細菌和孢子混合物在5500×g下離心10min，80℃煮沸20min后，用65％蔗糖和35％蔗糖的溶液密度梯度離心進一步純化孢子；然后用磷酸鹽緩沖鹽水洗滌純化的孢子，并在室溫下真空干燥即得純化后的孢子。
9.一種如權利要求1-3中任一權利項所述的具有抗炎和組織修復作用的透明質酸納米涂層細菌的應用，其特征在于：所述透明質酸納米涂層細菌作為制備同時具有抗炎和組織修復作用藥物的應用。
10.根據權利要求9所述的一種具有抗炎和組織修復作用的透明質酸納米涂層細菌的應用，其特征在于：所述透明質酸納米涂層細菌作為制備減輕腸道粘膜炎癥、恢復腸道屏障完整性藥物的應用；
...【技術特征摘要】
1.一種具有抗炎和組織修復作用的透明質酸納米涂層細菌，其特征在于：該透明質酸納米涂層細菌包括孢子，在所述孢子的表面沉積有陽離子殼聚糖，在所述陽離子殼聚糖表面對應設有透明質酸。
2.根據權利要求1所述的一種具有抗炎和組織修復作用的透明質酸納米涂層細菌，其特征在于：所述孢子為在孢子培養基中培養丁酸桿菌產生的休眠孢子。
3.根據權利要求1所述的一種具有抗炎和組織修復作用的透明質酸納米涂層細菌，其特征在于：陽離子殼聚糖通過靜電作用沉積在收集到的孢子表面。
4.一種如權利要求1-3中任一權利項所述的具有抗炎和組織修復作用的透明質酸納米涂層細菌的制備方法，其特征在于，該方法包括以下步驟：將細菌在產孢培養基中培養后得到細菌和孢子混合物，將細菌和孢子混合物進行純化后得到孢子，通過靜電作用，陽離子殼聚糖沉積在孢子表面得到cs沉積孢子，這些表面電荷反轉的cs沉積孢子與透明質酸混合即可進一步包被，得到透明質酸納米涂層細菌。
5.根據權利要求4所述的一種具有抗炎和組織修復作用的透明質酸納米涂層細菌的制備方法，其特征在于，所述細菌在產孢培養基中培養的具體步驟為：將細菌在產孢培養基中并保持溫度為37℃的厭氧環境中培養；
6.根據權利要求5所述的一種具有抗炎和組織修復...
【專利技術屬性】
技術研發人員：劉盡堯，王露，林思思，
申請(專利權)人：上海交通大學醫學院附屬仁濟醫院，
類型：發明
國別省市：
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