【技術(shù)實現(xiàn)步驟摘要】
本申請涉及動物模型構(gòu)建，特別是涉及一種小鼠胃癌自發(fā)瘤模型的構(gòu)建方法與應用。
技術(shù)介紹
1、胃癌發(fā)病率與死亡率均居全球前五，具有分期晚、腫瘤負荷大的特點。目前仍未闡明胃癌的具體發(fā)病機制，缺乏有效的治療手段，進展期胃癌5年生存率僅達30%。
2、胃癌小鼠模型是胃癌病因?qū)W研究的基礎(chǔ)，目前胃癌領(lǐng)域的小鼠模型分為自發(fā)瘤和移植瘤模型。移植瘤模型采用的是人源或鼠源腫瘤細胞或組織塊的皮下或原位移植，鼠源細胞系具有成瘤率高以及載瘤鼠種選擇廣泛的優(yōu)點，然而由于缺乏成熟可用、穩(wěn)定成瘤的鼠源胃癌細胞系，常用的小鼠胃癌細胞系僅有1985年建立的mfc細胞系，傳代超過數(shù)百代，來源于615小鼠的前胃鱗癌，僅能在615小鼠品系上進行荷瘤，可行性和適用度有限。故目前小鼠胃癌移植瘤模型多使用免疫缺陷鼠種植人源胃癌細胞或組織，然而，越來越多的研究表明腫瘤免疫微環(huán)境在腫瘤發(fā)生發(fā)展過程中發(fā)揮的重要作用，與腫瘤治療的開發(fā)和應用密不可分，尤其對于胃癌這樣一種公認是異質(zhì)性最強的腫瘤之一的癌種來說。由于胃是一個組織結(jié)構(gòu)復雜、生理功能多樣的消化器官，存在體內(nèi)外環(huán)境的交互，胃癌的發(fā)生發(fā)展歸因于眾多環(huán)境因素和遺傳因素的共同作用，比如幽門螺旋桿菌感染是目前發(fā)現(xiàn)的胃癌最重要的強風險因素之一，因此，胃癌的腫瘤免疫微環(huán)境也是目前胃癌領(lǐng)域研究的重點之一，而胃癌移植瘤模型并非原發(fā)性腫瘤，不能反映體內(nèi)腫瘤形成的過程，無法模擬腫瘤微環(huán)境，免疫缺陷小鼠也無法模擬機體的免疫系統(tǒng)，難以開展胃癌腫瘤微環(huán)境以及免疫相關(guān)的研究，利用該模型進行胃癌的病因?qū)W研究也極大受限，具有較大爭議。
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技術(shù)實現(xiàn)思路
1、本申請的目的在于提供一種小鼠胃癌自發(fā)瘤模型的構(gòu)建方法與應用，以提高小鼠胃癌自發(fā)瘤模型構(gòu)建過程的成瘤率，縮短成瘤周期，降低構(gòu)建成本。具體技術(shù)方案如下：
2、本申請的第一方面提供了一種小鼠胃癌自發(fā)瘤模型的構(gòu)建方法，包括步驟：降低或抑制小鼠體內(nèi)tp53基因的表達量和/或p53蛋白質(zhì)的活性，之后給予小鼠藥物進行化學誘導，獲得小鼠胃癌自發(fā)瘤模型；其中，所述藥物包含亞硝酸鈉和肌氨酸乙酯，和/或所述藥物包含n-亞硝基化合物。
3、在本申請的一些實施方式中，所述降低或抑制小鼠體內(nèi)tp53基因的表達量和/或p53蛋白質(zhì)的活性為特異性敲除小鼠體內(nèi)tp53基因，獲得tp53基因敲除小鼠；優(yōu)選地，所述tp53基因敲除小鼠為全身性tp53基因雜合性缺失的tp53基因敲除小鼠。
4、在本申請的一些實施方式中，所述特異性敲除小鼠體內(nèi)tp53基因為特異性敲除小鼠基因組中tp53基因中的第2外顯子、第3外顯子、第4外顯子、第5外顯子和第6外顯子中的至少一個。
5、在本申請的一些實施方式中，所述特異性敲除小鼠體內(nèi)tp53基因包括采用crispr-cas9系統(tǒng)特異性敲除受體小鼠體內(nèi)的tp53基因。
6、在本申請的一些實施方式中，所述n-亞硝基化合物包含n-亞硝基肌氨酸乙酯，所述n-亞硝基肌氨酸乙酯的濃度為4g/100ml-7g/100ml；所述亞硝酸鈉的濃度為2g/100ml-3g/100ml，所述肌氨酸乙酯的濃度為5g/100ml-10g/100ml。
7、在本申請的一些實施方式中，所述藥物的給予方式為灌胃；所述藥物的用量為5ml/kg體重-10ml/kg體重。
8、在本申請的一些實施方式中，所述藥物的給予頻率為每周1次-3次；所述藥物的給予周期為4周-8周；初次給予藥物時小鼠的周齡為5周齡-7周齡；初次給予藥物時小鼠的體重為20g-25g；所述小鼠為c57小鼠。
9、在本申請的一些實施方式中，所述給予小鼠藥物具體包括步驟：小鼠禁食2小時-4小時后，給予藥物；給藥間期給予正常飲食飲水；給藥結(jié)束后常規(guī)飼養(yǎng)8周-24周。
10、本申請的第二方面提供了本申請的第一方面所述的方法構(gòu)建得到的小鼠胃癌自發(fā)瘤模型。
11、本申請的第三方面提供了本申請的第一方面所述的方法或本申請第二方面所述的小鼠胃癌自發(fā)瘤模型在篩選預防和/或治療胃癌藥物中的應用。
12、本申請?zhí)峁┑男∈笪赴┳园l(fā)瘤模型的構(gòu)建方法，具有如下優(yōu)點：
13、（1）誘導過程方便，相比于傳統(tǒng)mnu（n-甲基-n-亞硝脲）飲用水避光長期給藥，該方法每周灌胃1-3次，操作過程更加方便；
14、（2）誘導過程穩(wěn)定，組間差異小；相比與飲用水給藥，灌胃給藥時間差異、使用量差異更小；
15、（3）成瘤率高，傳統(tǒng)mnu化合物飲用水誘導成瘤率在30%左右，而該方法成瘤率高達75%及以上；
16、（4）成瘤周期短，傳統(tǒng)方法成瘤周期約為7-12個月，該方法成瘤周期約為3-4個月；
17、（5）易于開展，該方法不需要避光處理，不需要避光喂水瓶等設備，操作簡單。
18、當然，實施本申請的任一產(chǎn)品或方法并不一定需要同時達到以上所述的所有優(yōu)點。
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1.一種小鼠胃癌自發(fā)瘤模型的構(gòu)建方法，包括步驟：降低或抑制小鼠體內(nèi)TP53基因的表達量和/或P53蛋白質(zhì)的活性，之后給予小鼠藥物進行化學誘導，獲得小鼠胃癌自發(fā)瘤模型；其中，所述藥物包含亞硝酸鈉和肌氨酸乙酯，和/或所述藥物包含N-亞硝基化合物。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的構(gòu)建方法，其中，所述降低或抑制小鼠體內(nèi)TP53基因的表達量和/或P53蛋白質(zhì)的活性為特異性敲除小鼠體內(nèi)TP53基因，獲得TP53基因敲除小鼠；優(yōu)選地，所述TP53基因敲除小鼠為全身性TP53基因雜合性缺失的TP53基因敲除小鼠。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的構(gòu)建方法，其中，所述特異性敲除小鼠體內(nèi)TP53基因為特異性敲除小鼠基因組中TP53基因中的第2外顯子、第3外顯子、第4外顯子、第5外顯子和第6外顯子中的至少一個。
4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的構(gòu)建方法，其中，所述特異性敲除小鼠體內(nèi)TP53基因包括采用CRISPR-Cas9系統(tǒng)特異性敲除受體小鼠體內(nèi)的TP53基因。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的構(gòu)建方法，其中，所述N-亞硝基化合物包含N-亞硝基肌氨酸乙酯，所述N-亞硝基肌氨酸乙酯的
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的構(gòu)建方法，其中，所述藥物的給予方式為灌胃；所述藥物的用量為5mL/kg體重-10mL/kg體重。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的構(gòu)建方法，其中，所述藥物的給予頻率為每周1次-3次；所述藥物的給予周期為4周-8周；初次給予藥物時小鼠的周齡為5周齡-7周齡；初次給予藥物時小鼠的體重為20g-25g；所述小鼠為C57小鼠。
8.根據(jù)權(quán)利要求1-7中任一項所述的構(gòu)建方法，其中，所述給予小鼠藥物具體包括步驟：小鼠禁食2小時-4小時后，給予藥物；給藥間期給予正常飲食飲水；給藥結(jié)束后常規(guī)飼養(yǎng)8周-24周。
9.權(quán)利要求1-8中任一項所述的方法構(gòu)建得到的小鼠胃癌自發(fā)瘤模型。
10.權(quán)利要求1-8中任一項所述的方法或權(quán)利要求9所述的小鼠胃癌自發(fā)瘤模型在篩選預防和/或治療胃癌藥物中的應用。
...【技術(shù)特征摘要】
1.一種小鼠胃癌自發(fā)瘤模型的構(gòu)建方法，包括步驟：降低或抑制小鼠體內(nèi)tp53基因的表達量和/或p53蛋白質(zhì)的活性，之后給予小鼠藥物進行化學誘導，獲得小鼠胃癌自發(fā)瘤模型；其中，所述藥物包含亞硝酸鈉和肌氨酸乙酯，和/或所述藥物包含n-亞硝基化合物。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的構(gòu)建方法，其中，所述降低或抑制小鼠體內(nèi)tp53基因的表達量和/或p53蛋白質(zhì)的活性為特異性敲除小鼠體內(nèi)tp53基因，獲得tp53基因敲除小鼠；優(yōu)選地，所述tp53基因敲除小鼠為全身性tp53基因雜合性缺失的tp53基因敲除小鼠。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的構(gòu)建方法，其中，所述特異性敲除小鼠體內(nèi)tp53基因為特異性敲除小鼠基因組中tp53基因中的第2外顯子、第3外顯子、第4外顯子、第5外顯子和第6外顯子中的至少一個。
4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的構(gòu)建方法，其中，所述特異性敲除小鼠體內(nèi)tp53基因包括采用crispr-cas9系統(tǒng)特異性敲除受體小鼠體內(nèi)的tp53基因。
5.根據(jù)權(quán)利要求...
【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：李子禹，唐小歡，高翔宇，楊沛瑤，郭曉勇，賈方洲，
申請(專利權(quán))人：北京腫瘤醫(yī)院北京大學腫瘤醫(yī)院，
類型：發(fā)明
國別省市：
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