【技術實現步驟摘要】
本專利技術涉及生物醫學，特別是涉及一種用于檢測糖尿病視網膜病變血清生物標志物mir-21和mir-152的sers傳感器及其制備方法與應用。
技術介紹
1、糖尿病視網膜病變(dr)是糖尿病非常常見的微血管并發癥，對視覺健康構成嚴重威脅，并且是工作年齡人群失明的主要原因。研究表明，dr的存在對患者的視覺相關生活質量構成了顯著的威脅，并且這種生活質量隨著dr的惡化而進一步下降。目前，眼底熒光血管造影是早期篩查和診斷糖尿病視網膜病變的金標。然而，由于其侵入性、高成本、技術復雜性和過敏風險，以及眼底檢查和照片判讀需要具有糖尿病相關眼病專業知識的醫生參與的事實，熒光素血管造影不適合作為臨床實踐中用于dr的常規篩查工具。因此，找到相關的血清生物標志物檢測方法來幫助準確診斷早期dr是極其重要的。
2、微小核糖核酸(mirnas)是一類小的、高度保守的非編碼核糖核酸，在多種生物過程中發揮重要的調節作用。一些研究表明，體液中mirnas水平的變化與dr的發展過程密切相關，并且在dr的診斷中具有重要意義。mir-21是一種在dr患者血清中顯著上調的mirna，通過調節ppara的表達水平在dr中發揮重要的致病作用。此外，a.a.saleh等人的研究還揭示了mir-152在dr患者和健康對照中的表達顯著不同，對dr的診斷具有良好的敏感性和特異性。血清mir-21和mir-152可用作dr的潛在診斷標志物。迄今為止，研究人員已經設計了多種策略來識別和分析與疾病密切相關的mirnas，包括northern印跡、定量實時pcr(qrt-pcr)
3、表面增強拉曼散射光譜(sers)是近年來迅速發展起來的一種分子光譜技術，具有高靈敏度、高精度、指紋化、無損檢測等優點，在環境監測、食品安全和生物醫學等許多領域發揮著重要作用。sers的核心機制是利用金屬納米結構來激發局域表面等離子體共振(lspr)，這是一種在金屬表面附近產生“熱點”的過程，這又實現了分子拉曼散射信號的極大增強。與傳統拉曼散射相比，sers具有顯著優勢，影響因子(ef)≥108。sers基底的微觀結構極大地影響著“熱點”的分布，決定了檢測的靈敏度、重復性和穩定性，制備高密度且“熱點”分布均勻的sers基底已成為當前研究的熱點。金三八面體(aunts)具有獨特的幾何形狀(具有八個三角錐的多面體)，其多個銳邊的外觀和顆粒之間的納米間隙為sers提供了高密度的“熱點”，從而產生高強度、高重復性的拉曼信號。近年來，金納米多邊形的等離子體表征和應用研究發展迅速，引起了人們極大的興趣。其中，金納米六角板(aunhs)的特征在于其規則的形狀、許多尖角和大的比表面積，可以為信號分子提供更多的附著位點，從而產生顯著的sers增強。aunhs陣列在結構上是穩定和均勻的，并且aunhs和aunhs邊緣之間的間隙有助于“熱點”的形成，其可以實現局部電磁場的顯著增強，并且可以用作優良的sers基底。
4、在樣本檢測階段，需要簡單、準確和定量的策略來確保臨床實用性。目前，基于sers技術的“三明治”結構、hcr(雜交鏈式反應)和cha(催化發夾組裝)擴增策略被廣泛使用，但是它們仍然面臨諸如復雜的設計和嚴格的反應條件的挑戰。而競爭識別策略只需一步加標反應即可實現對兩種mirnas的同時高效檢測，具有簡單實用的優點。微陣列芯片作為一種集成化的芯片平臺，以其高通量、低樣品消耗、高安全性、結構小巧便攜等優點，為簡單快速的樣品檢測提供了可能。然而，目前未見采用sers技術對血清mir-21和mir-152進行檢測的相關報道。
技術實現思路
1、本專利技術的目的是提供一種用于檢測糖尿病視網膜病變血清生物標志物mir-21和mir-152的sers傳感器及其制備方法與應用，以解決上述現有技術存在的問題。本專利技術將sers、微陣列芯片和競爭性識別策略相結合，構建新型sers傳感器，用于dr大鼠血清中mir-21和mir-122的檢測。本專利技術提供了一種同時、快速、高靈敏檢測dr血清生物標志物mir-21和mir-152的sers傳感器的制備方法及臨床應用。
2、為實現上述目的，本專利技術提供了如下方案：
3、本專利技術技術方案之一，一種用于檢測糖尿病視網膜病變血清生物標志物mir-21和mir-152的sers傳感器的制備方法，包括以下步驟：
4、(1)將金納米六角板aunhs通過油水界面自組裝得到aunhs陣列，在aunhs陣列表面修飾核酸適配體鏈cdna得到sers基底；
5、(2)將拉曼信號分子4-mba溶液和核酸適配體互補鏈h1通過au-s鍵耦合修飾至金三八面體aunts表面，得到sers探針1aunts@4-mba@h1；將拉曼信號分子dtnb和核酸適配體互補鏈h2通過au-s鍵耦合修飾至aunts表面，得到sers探針2aunts@dtnb@h2；
6、(3)將所述aunts@4-mba@h1和aunts@dtnb@h2與所述sers基底相結合，得到所述sers傳感器。
7、本專利技術技術方案之二，所述制備方法制備得到的用于檢測糖尿病視網膜病變血清生物標志物mir-21和mir-152的sers傳感器。
8、本專利技術技術方案之三，所述用于檢測糖尿病視網膜病變血清生物標志物mir-21和mir-152的sers傳感器在制備對mir-21和mir-152進行檢測的產品中的應用。
9、本專利技術技術方案之四，一種sers微陣列芯片，將所述用于檢測糖尿病視網膜病變血清生物標志物mir-21和mir-152的sers傳感器嵌入pdms芯片中得到。
10、基于上述技術方案，本專利技術具有以下技術效果：
11、本專利技術提供了一種用于檢測dr相關血清生物標志物mir-21和mir-152的sers傳感器的制備方法及基于該方法所制備形成的傳感器。本專利技術首先將aunhs通過油水界面自組裝得到均勻、致密排列的aunhs陣列，在陣列表面修飾核酸適配體鏈cdna得到sers基底；接著將拉曼信號分子4-mba和核酸適配體互補鏈h1通過au-s鍵耦合修飾至aunts表面，得到sers探針1(aunts@4-mba@h1)；將拉曼信號分子dtnb和核酸適配體互補鏈h2通過au-s鍵耦合修飾至aunts表面，得到sers探針2(aunts@dtnb@h2)；將制備的sers探針(aunts@4-mba@h1和aunts@dtnb@h2)與sers基底上核酸適配體鏈cdna中的互補堿基相結合，固定于所述aunhs陣列上，通過優化制備條件，構建sers傳感器。該傳感器具有靈敏度高、特異性強、檢測速度快等優點。將sers傳感器嵌入到pdms芯片中得到微陣列芯片，構建了一種先進的sers本文檔來自技高網...
【技術保護點】
1.一種用于檢測糖尿病視網膜病變血清生物標志物miR-21和miR-152的SERS傳感器的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：
2.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述金納米六角板AuNHs的制備方法為：將聚乙烯吡咯烷酮溶液與HAuCl4溶液混合，向混合液中加入AA溶液，攪拌20min后在室溫下靜置12h，離心純化后得到AuNHs；
3.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述通過油水界面自組裝得到AuNHs陣列的方法為：將AuNHs、正己烷和無水乙醇混合后靜置，AuNHs在油-水界面緊密排列并自組裝形成AuNHs陣列；
4.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述在AuNHs陣列表面修飾核酸適配體鏈cDNA的方法為：將活化后的核酸適配體鏈cDNA溶液滴加到所述AuNHs陣列表面，之后進行孵育，得到核酸適配體鏈偶聯的AuNHs陣列，即為所述SERS基底；
5.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，將拉曼信號分子4-MBA溶液和核酸適配體互補鏈H1通過Au-S鍵耦合修飾至金三八面體AuNTs表面的方法為：將
6.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，將拉曼信號分子DTNB和核酸適配體互補鏈H2通過Au-S鍵耦合修飾至AuNTs表面的方法為：將AuNTs溶液與拉曼信號分子DTNB溶液混合，之后將所得AuNTs@DTNB加入到活化后的核酸適配體互補鏈H2溶液中進行孵育；孵育結束后，向孵育所得反應液中加入BSA溶液進行反應，得到所述SERS納米探針2AuNTs@DTNB@H2；
7.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，將所述AuNTs@4-MBA@H1和AuNTs@DTNB@H2與所述SERS基底相結合的方法為：將AuNTs@4-MBA@H1和AuNTs@DTNB@H2滴加到所述SERS基底表面，之后進行孵育，得到所述SERS傳感器；
8.如權利要求1-7任一項所述制備方法制備得到的用于檢測糖尿病視網膜病變血清生物標志物miR-21和miR-152的SERS傳感器。
9.如權利要求8所述用于檢測糖尿病視網膜病變血清生物標志物miR-21和miR-152的SERS傳感器在制備對miR-21和miR-152進行檢測的產品中的應用。
10.一種SERS微陣列芯片，其特征在于，將權利要求8所述用于檢測糖尿病視網膜病變血清生物標志物miR-21和miR-152的SERS傳感器嵌入PDMS芯片中得到。
...【技術特征摘要】
1.一種用于檢測糖尿病視網膜病變血清生物標志物mir-21和mir-152的sers傳感器的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：
2.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述金納米六角板aunhs的制備方法為：將聚乙烯吡咯烷酮溶液與haucl4溶液混合，向混合液中加入aa溶液，攪拌20min后在室溫下靜置12h，離心純化后得到aunhs；
3.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述通過油水界面自組裝得到aunhs陣列的方法為：將aunhs、正己烷和無水乙醇混合后靜置，aunhs在油-水界面緊密排列并自組裝形成aunhs陣列；
4.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述在aunhs陣列表面修飾核酸適配體鏈cdna的方法為：將活化后的核酸適配體鏈cdna溶液滴加到所述aunhs陣列表面，之后進行孵育，得到核酸適配體鏈偶聯的aunhs陣列，即為所述sers基底；
5.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，將拉曼信號分子4-mba溶液和核酸適配體互補鏈h1通過au-s鍵耦合修飾至金三八面體aunts表面的方法為：將aunts溶液與拉曼信號分子4-mba溶液混合，之后將所得aunts@4-mba加入到活化后的核酸適配體互補鏈h1溶液中進行孵育；孵育結束后，向孵育所得反應液中加入bsa溶液進行反應，得到所述sers納米探針...
【專利技術屬性】
技術研發人員：陸長華，周春偉，曹小衛，李萍，葉琛琛，宗霞，蔣華春，潘蓮，樊勤姣，
申請(專利權)人：宜興市中醫醫院，
類型：發明
國別省市：
還沒有人留言評論。發表了對其他瀏覽者有用的留言會獲得科技券。