【技術(shù)實現(xiàn)步驟摘要】
本申請涉及生物檢測，具體而言，涉及一種檢測沙門氏菌的slamp引物組和試劑盒。
技術(shù)介紹
1、沙門氏菌，屬腸桿菌科，革蘭氏陰性腸道桿菌，是人獸共患的腸道病原菌，在自然界中普遍存在，能導(dǎo)致諸如傷寒、副傷寒和食物中毒等多種疾病，對工農(nóng)業(yè)以及畜牧業(yè)的發(fā)展產(chǎn)生直接沖擊。沙門菌死亡后所釋放的內(nèi)毒素，能夠誘發(fā)宿主出現(xiàn)體溫升高、白細胞數(shù)量減少的現(xiàn)象，一旦毒素劑量過大，還會引發(fā)中毒反應(yīng)甚至休克。因此，針對食物中的沙門氏菌進行定性或定量檢測非常重要。
2、現(xiàn)有的檢測方法主要包括pcr、dna探針技術(shù)等。盡管這些技術(shù)能快速檢測樣品中總的或致病性沙門氏菌的數(shù)量，但這些方法依賴于特殊而昂貴的設(shè)備，且其操作過程復(fù)雜費時(包括dna的分離、雜交、比色以及探針和引物的合成等)，只有熟練掌握了其操作技巧的技術(shù)人員才能完成測試。因此，以上方法并不適用于現(xiàn)場快速檢測，建立一種快速、靈敏、特異的沙門氏菌檢測方法迫在眉睫。
技術(shù)實現(xiàn)思路
1、本申請的目的在于提供一種檢測沙門氏菌的slamp引物組，此slamp引物組具有敏感性高、特異性強的優(yōu)點。
2、本申請的另一目的在于提供一種檢測沙門氏菌的試劑盒，該試劑盒檢測速度快、準(zhǔn)確性高、使用方便。
3、本申請的再一目的在于提供一種沙門氏菌的檢測方法，該檢測方法操作簡單。
4、為解決上述技術(shù)問題，本申請采用的技術(shù)方案：
5、一方面，本申請?zhí)峁┮环N檢測沙門氏菌的slamp引物組，所述slamp引物組為引物對sal-sf/sa
6、其中，sal-sf的核苷酸序列如seq?id?no.1所示，sal-sr的核苷酸序列如seq?idno.2所示。
7、第二方面，本申請?zhí)峁┮环N試劑盒，所述試劑盒的反應(yīng)體系包括上述slamp引物組。
8、第三方面，本申請?zhí)峁┮环N采用上述的試劑盒檢測沙門氏菌的方法，包括以下步驟：
9、步驟1：將待檢測核酸樣本和試劑盒的反應(yīng)體系混合，制備擴增反應(yīng)液；
10、步驟2：將上述制得的擴增反應(yīng)液于60～65℃反應(yīng)20～80min，根據(jù)顯色結(jié)果判斷樣品中是否含有沙門氏菌。
11、基于短鏈頸環(huán)介導(dǎo)的核酸恒溫擴增技術(shù)(short?loop?mediated?isothermalamplification?ofnucleic?acids，slamp)是專利技術(shù)人團隊在前期開發(fā)的cda技術(shù)(中國專利授權(quán)號：zl202110473121.8)和日本lamp核酸擴增的方法的基礎(chǔ)上，新近改進研發(fā)的一種核酸在恒溫條件下的擴增技術(shù)(中國專利申請?zhí)枺?02411655233.5)。所研發(fā)的slamp方法主要利用2個不同的特異性引物識別靶基因的特定區(qū)域，在恒溫條件進行擴增反應(yīng)。與常規(guī)基因檢測手段(如pcr等)相比，slamp反應(yīng)在恒溫水浴箱中便可完成，儀器設(shè)備要求低，較傳統(tǒng)pcr和培養(yǎng)法操作簡單許多，不需要專業(yè)人士也可準(zhǔn)確完成，且擴增結(jié)果可結(jié)合金屬離子指示劑羥基萘酚蘭(hnb)，通過肉眼觀察顏色變化以實現(xiàn)對結(jié)果的判斷，使其適用于基層醫(yī)療機構(gòu)及地方檢驗檢疫部門。并且，slamp還可以大大縮短操作時間，減少樣品污染機會，適合應(yīng)用于沙門氏菌的快速診斷。此外，slamp所用關(guān)鍵成環(huán)引物約為30bp，較lamp中成環(huán)引物40bp短，相關(guān)引物設(shè)計極為簡單，僅需做簡單重排，這將極大程度的節(jié)約設(shè)計時間和開發(fā)成本。
12、相對于現(xiàn)有技術(shù)，本申請的實施例至少具有如下優(yōu)點或有益效果：
13、1、本申請通過對沙門氏菌的特異保守區(qū)域(genbank:cp163542.1)設(shè)計多個引物組，并從中篩選出擴增效率最高的引物組。該引物組由2條引物組成，包括序列內(nèi)引物對(sal-sf/sal-sr)分別為上下游外部引物。本申請?zhí)峁┑囊锝M敏感性高、特異性強，由其制成的試劑盒能夠快速、準(zhǔn)確的檢測到待測樣品中含有的沙門氏菌。
14、2、由于本申請?zhí)峁┑囊锝M具有極高的特異性，slamp擴增所需時間短，進一步縮短檢測的時間，簡化操作。
15、3、本申請?zhí)峁┑姆椒ɑ蛟噭┖袩o需昂貴的儀器、也無需復(fù)雜的操作就可完成對沙門氏菌的快速準(zhǔn)確檢測，因此，適用于專業(yè)程度不高的機場、海關(guān)、口岸、社區(qū)等地的現(xiàn)場快速檢測。本申請所提供的可視化試劑盒將為現(xiàn)場檢測提供極大便利，可實現(xiàn)對沙門氏菌快速準(zhǔn)確的檢測。
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1.一種檢測沙門氏菌的SLAMP引物組，其特征在于，所述SLAMP引物組為引物對SAL-SF/SAL-SR；
2.一種檢測沙門氏菌的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒的反應(yīng)體系包括權(quán)利要求1所述的SLAMP引物組。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種檢測沙門氏菌的試劑盒，其特征在于，所述SLAMP引物組中，引物CA-SF與引物CA-SR的濃度均為1～2μM。
4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種檢測沙門氏菌的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒的反應(yīng)體系還包括Bst聚合酶、SLAMP反應(yīng)緩沖液、反應(yīng)溶劑以及顯色劑。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的一種檢測沙門氏菌的試劑盒，其特征在于，所述顯色劑選自SYBR?green?I、Eva?green、羥基萘酚藍和鉻黑T中的一種。
6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的一種檢測沙門氏菌的試劑盒，其特征在于，所述SLAMP反應(yīng)緩沖液包括：Tris-HCl、KCl、(NH4)2SO4、MgSO4和Triton?X-100。
7.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種檢測沙門氏菌的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒反應(yīng)體系的組成為：2～
...【技術(shù)特征摘要】
1.一種檢測沙門氏菌的slamp引物組，其特征在于，所述slamp引物組為引物對sal-sf/sal-sr；
2.一種檢測沙門氏菌的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒的反應(yīng)體系包括權(quán)利要求1所述的slamp引物組。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種檢測沙門氏菌的試劑盒，其特征在于，所述slamp引物組中，引物ca-sf與引物ca-sr的濃度均為1～2μm。
4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種檢測沙門氏菌的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒的反應(yīng)體系還包括bst聚合酶、slamp反應(yīng)緩沖液、反應(yīng)溶劑以及顯色劑。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的一種檢測沙門氏菌的試劑盒，其特征在于，所述顯色劑選自sybr?green?i、eva?green、羥基...
【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：鄭丁鋮，毛瑞，張艷麗，
申請(專利權(quán))人：寧波市第二醫(yī)院，
類型：發(fā)明
國別省市：
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