【技術實現步驟摘要】
本專利技術屬于小麥抗病育種，涉及用于檢測小麥白粉病抗性qtl的分子標記及其應用。
技術介紹
1、小麥白粉病是由生物型真菌blumeria?graminis?f.sp.tritici(bgt)侵染植株后，而引起的宿主免疫系統防御過度產生過敏性反應，使被侵染部位的細胞發生細胞壞死，導致葉片卷曲枯萎，發病極其嚴重時，小麥呈現趨于死亡的一種病害。小麥葉片被白粉病菌侵染后，呼吸作用增加，氣孔蒸騰強度增高，光合作用效率降低，小麥正常成長發育嚴重受阻，造成小麥葉片過早凋落，小麥穗數和穗率下降，千粒重減少，對畝產量有顯著影響，一般使產量降低10％～30％，重發地帶的產量降低50％以上。
2、上世紀30年代，澳大利亞科學家waterhouse首次報道了一對顯性抗白粉病基因存在于tew小麥品種中；上世紀50年代，sears，e.r.利用缺失的材料定位了7al中的pm1，然后許多國家的研究人員開始研究白粉病抗性基因的遺傳特征。尤其是到了21世紀初，由于分子生物學的不斷進步，國內外許多科學家致力于研究抗病基因的分子標記，以尋找小麥抗性的新來源。正式命名的抗白粉病基因有69種(pm1-pm69)。在普通小麥中命名的抗白粉基因有：pm1a、pm1c(pm18)、pm1d、pm1e(pm22)、pm2a、pm2b、pm3a、pm3b、pm3c、pm3d、pm3e、pm3f、pm3g、pm3h、pm3s、pm3j、pm4a、pm4b、pm5a、pm5b、pm5c、pm5d、pm5e、pm9、pm10、pm11、pm14、pm15、pm16、pm23
3、qtl定位是通過研究基因標記，或者通過找出基因標記和目標個體的性狀間的關聯關系，把一個或多個qtl和同處于一個染色體上的基因標記加以定位，也就是說，標記都與qtl之間是關聯的。由于生物檢測技術的迅速發展，分子標記的研究和大量小麥遺傳連鎖圖譜的風起泉涌，使通過連鎖分析的qtl作圖定位目標特征得以廣泛應用。惠建等用切合于ril群體的成株期白粉病抗性的主效基因控制的加性-上位性遺傳模型，定位了分別來自寧春27號和寧春4號的2個穩定的抗病qtl?qpm.naafs-4d和qpm.naafs-7d，其中在不同環境下qpm.naafs-4d的lod為5.9～15.4、加性效應為-1.1～-1.2、表型貢獻解釋率為18.6％～34.5％，該位點與側翼標記的遺傳距離為4cm。shi等采用bsr-seq分析，鑒定到位于2bl染色體的控制全生育期白粉病抗性基因pm52和一個位于7al染色體的成株期抗白粉病新qtl位點qaprpm.caas.7a；位于2bl的全生育期抗性位點定位于分子標記xicscl726和xicsk128之間1.3cm遺傳區間，lod值高達28.1-34.7，可解釋表型變異的45-52％；qaprpm.caas_7a定位于分子標記xicsk7a8和xicsk7a26之間4.6cm遺傳區間。
4、綜上，開發緊密連鎖的分子標記，這對用于育種群體潛藏的抗病基因的精準快速篩選和解析，以及選育出抗白粉病新種質(新品系)具有重要意義。
技術實現思路
1、本專利技術的目的在于提供用于檢測小麥白粉病抗性qtl的分子標記及其應用。本專利技術基于三年群體白粉病成株期抗性鑒定結果，通過icimapping?v4.2的完備區間作圖法(icim)檢測抗白粉病qtl，共檢測主效qtl有2個：qpm.histwrc-1as和qpm.histwrc-2bs-1，抗性貢獻率為19.4％-34.5％和19.7％-21.3％。然后通過百農矮抗58測序數據開發出相關的分子標記，可應用于小麥抗病分子育種，也為發掘edinburgh-b抗病基因及抗性遺傳機制奠定基礎。
2、一方面，本專利技術提供了用于鑒定或輔助鑒定小麥抗白粉病性狀的引物對，所述引物對的擴增產物dna片段與小麥抗白粉病性狀相關qtl位點qpm.histwrc-1as和/或qpm.histwrc-2bs-1緊密連鎖。
3、進一步地，所述位點qpm.histwrc-1as在標記60k_6293890-60k_9361171之間，遺傳距離為1.3cm，物理距離3.07mb，所述位點qpm.histwrc-2bs-1在標記60k_23762001-60k_26341302之間，遺傳距離為5.9cm，物理距離2.58mb。
4、進一步地，所述引物對為，
5、1)由seq?id?no.1和seq?id?no.2所示的序列組成的引物對1；和/或
6、2)由seq?id?no.3和seq?id?no.4所示的序列組成的引物對2；和/或
7、3)由seq?id?no.5和seq?id?no.6所示的序列組成的引物對3；和/或
8、4)由seq?id?no.7和seq?id?no.8所示的序列組成的引物對4。
9、進一步地，所述引物對1和/或引物對2的擴增產物dna片段與小麥抗白粉病性狀相關qtl位點qpm.histwrc-1as緊密連鎖。
10、進一步地，所述引物對3和/或引物對4的擴增產物dna片段與小麥抗白粉病性狀相關qtl位點qpm.histwrc-2bs-1緊密連鎖。
11、另一方面，本專利技術還提供了用于鑒定或輔助鑒定小麥抗白粉病性狀的試劑盒，含有所述的引物對1-4和如下中的至少一種：dntp、dna聚合酶和pcr擴增緩沖液。
12、另一方面，本專利技術還提供了一種鑒定或輔助鑒定小麥雜交后代的抗白粉病性狀的方法，包括如下步驟：
13、(a1)分別以小麥a、小麥b以及由所述小麥a和所述小麥b雜交而來的小麥雜交后代群體中的每個個體的基因組dna為模板，采用權利要求1-5任一所述的引物對分別進行pcr擴增，得到所述小麥a的pcr產物、所述小麥b的pcr產物以及所述小麥雜交后代群體中的每個個體本文檔來自技高網...
【技術保護點】
1.用于鑒定或輔助鑒定小麥抗白粉病性狀的引物對，其特征在于，所述引物對的擴增產物DNA片段與小麥抗白粉病性狀相關QTL位點Qpm.histwrc-1AS和/或Qpm.histwrc-2BS-1緊密連鎖。
2.根據權利要求1所述的引物對，其特征在于，所述位點Qpm.histwrc-1AS在標記60K_6293890-60K_9361171之間，遺傳距離為1.3cM，物理距離3.07Mb，所述位點Qpm.histwrc-2BS-1在標記60K_23762001-60K_26341302之間，遺傳距離為5.9cM，物理距離2.58Mb。
3.根據權利要求1或2所述的引物對，其特征在于，所述引物對為，
4.根據權利要求3所述的引物對，其特征在于，所述引物對1和/或引物對2的擴增產物DNA片段與小麥抗白粉病性狀相關QTL位點Qpm.histwrc-1AS緊密連鎖。
5.根據權利要求3所述的引物對，其特征在于，所述引物對3和/或引物對4的擴增產物DNA片段與小麥抗白粉病性狀相關QTL位點Qpm.histwrc-2BS-1緊密連鎖。
7.一種鑒定或輔助鑒定小麥雜交后代的抗白粉病性狀的方法，包括如下步驟：(a1)分別以小麥A、小麥B以及由所述小麥A和所述小麥B雜交而來的小麥雜交后代群體中的每個個體的基因組DNA為模板，采用權利要求1-5任一所述的引物對分別進行PCR擴增，得到所述小麥A的PCR產物、所述小麥B的PCR產物以及所述小麥雜交后代群體中的每個個體的PCR產物；所述小麥A為抗白粉病品種，所述小麥B為不抗白粉病品種；
8.一種鑒定或輔助鑒定待測小麥的基因組中是否存在小麥抗白粉病QTL位點Qpm.histwrc-1AS和/或Qpm.histwrc-2BS-1的方法，包括如下步驟：
9.一種培育具有白粉病抗性的小麥品種的方法，是選取符合如下條件的小麥作為親本進行育種：以基因組DNA為模板，采用權利要求1-5任一所述的引物對進行PCR擴增，將所得PCR產物進行電泳，電泳條帶的帶型與參照帶型A相同；
10.與小麥抗白粉病性狀相關的分子標記，其特征在于，為以小麥基因組DNA為模板，采用權利要求1-5任一所述引物對進行PCR擴增所得的DNA片段。
11.權利要求1-5任一所述的引物對或權利要求6所述的試劑盒或權利要求10所述的分子標記在如下任一中的應用：
...【技術特征摘要】
1.用于鑒定或輔助鑒定小麥抗白粉病性狀的引物對，其特征在于，所述引物對的擴增產物dna片段與小麥抗白粉病性狀相關qtl位點qpm.histwrc-1as和/或qpm.histwrc-2bs-1緊密連鎖。
2.根據權利要求1所述的引物對，其特征在于，所述位點qpm.histwrc-1as在標記60k_6293890-60k_9361171之間，遺傳距離為1.3cm，物理距離3.07mb，所述位點qpm.histwrc-2bs-1在標記60k_23762001-60k_26341302之間，遺傳距離為5.9cm，物理距離2.58mb。
3.根據權利要求1或2所述的引物對，其特征在于，所述引物對為，
4.根據權利要求3所述的引物對，其特征在于，所述引物對1和/或引物對2的擴增產物dna片段與小麥抗白粉病性狀相關qtl位點qpm.histwrc-1as緊密連鎖。
5.根據權利要求3所述的引物對，其特征在于，所述引物對3和/或引物對4的擴增產物dna片段與小麥抗白粉病性狀相關qtl位點qpm.histwrc-2bs-1緊密連鎖。
6.用于鑒定或輔助鑒定小麥抗白粉病性狀的試劑盒，其特征在于，含有權利要求1-5任一所述的引物對和如下中的至少一種：dntp、dn...
【專利技術屬性】
技術研發人員：陳向東，方方，茹振鋼，董楠楠，董娜，王浩權，姜豪，
申請(專利權)人：河南科技學院，
類型：發明
國別省市：
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