【技術實現步驟摘要】
本專利技術屬于生物醫用材料，具體涉及一種基于pvp的含氟碳乳液的新型器官冷凍保存液。
技術介紹
1、傳統冷保存因操作方便，保存標準供體器官效果較好，一直是器官保存的金標準。由美國威斯康星大學專利技術的uw液被公認為是肝腎等離體器官保存的標準保存液，在國際器官移植界廣泛使用。但隨著我國公民逝世后器官捐獻工作的全面展開，供體器官的保存與維護工作被賦予更高要求，擴大標準供者與心臟死亡器官捐獻供者器官對冷、熱缺血損傷的耐受性較差，單純傳統冷保存對該類器官的保存作用有限。此外，根據全球器官捐贈與移植統計協會(godt)2016年發布的調查報告顯示，全球范圍內總共約有120萬人因為終末期器官衰竭需要進行器官移植治療，由于供體器官來源短缺，實際移植人數還不到10％，一個重要原因是從獲取到最終移植的時間超過了器官的保存期限。
2、目前通用的4℃低溫保存法，根據器官類型不同，最長保存時間也只有36小時。該方法主要通過抑制器官的新陳代謝和酶類的分解來減輕器官損傷。研究證明，溫度每下降10℃，器官新陳代謝率就會減半；在4℃條件下，新陳代謝率只有原來的10％～12％。超低溫環境，如-80℃及以下溫度，可以顯著降低細胞的酶活性和化學活動，減緩細胞功能，同時保持著其細胞結構，理論上可將離體器官保存無限長的時間。但實際上，在超低溫環境下細胞仍然會維持較低的代謝水平，uw液無法提供充足氧氣以維持細胞代謝，缺氧環境會導致能量不足，造成細胞功能和結構的損傷，限制了離體器官體外保存的時長。此外，缺氧是缺血再灌注損傷的一部分，會引發細胞內鈣離子紊亂、炎癥反
3、因此，開發一種包含無毒控冰材料，以及載氧成分與能量物質的新型器官保存液，以延長供體器官體外保存時間，同時減輕保存造成的損傷，具有顯著的臨床價值。
技術實現思路
1、一方面，本專利技術提供了一種器官保存液，包括：氟碳化合物、表面活性劑，和聚乙烯吡咯烷酮。
2、在一些實施方案中，所述器官保存液還含有海藻糖，atp和肝素中的一種或多種。
3、在一些實施方案中，所述器官保存液不含dmso。
4、在一些實施方案中，所述器官保存液的還含有緩沖液；在一些實施方案中，所述緩沖液為kps-1、uw液、htk液中的一種或多種；在一些實施方案中，所述氟碳化合物為全氟溴辛烷、全氟溴癸烷、全氟萘烷、全氟三丙胺、全氟甲基環己哌啶、全氟三丁基胺、全氟二氯辛烷、全氟丁基乙烯中的一種或多種；在一些實施方案中，所述表面活性劑為大豆磷脂酰膽堿、蛋黃磷脂酰膽堿、氫化磷脂酰膽堿中的一種或多種。
5、一方面，本專利技術提供了一種器官保存液，每100ml器官保存液中，包括：
6、全氟萘烷：0.5-1.0ml
7、大豆磷脂酰膽堿：0.5-1.0g
8、pvp：2-10g
9、海藻糖：1.71-2.50g
10、atp：0.05-0.10g
11、肝素：1000-1500u
12、kps-1：補足100ml。
13、聚乙烯吡咯烷酮(pvp)是少數具有良好生物相容性的合成高分子之一，由單體n-乙烯基吡咯烷酮(nvp)聚合得到。pvp作為一種無毒的聚合物，在第二次世界大戰時曾作為膠狀血漿替代品使用。此外，在組織和細胞的凍存中，pvp也發揮了重要的保護作用，具有如下特征：
14、抑制細胞外冰晶形成：pvp作為一種大分子量的非滲透性低溫保護劑，可以在低溫環境中與胞外糖類鍵合形成氫鍵，從而抑制細胞外冰晶的形成，有效保護離體器官在低溫條件下的生理結構和功能。
15、抑制細胞內冰晶形成：pvp能夠對細胞進行脫水，降低冰點并抑制細胞外鹽濃度，可以有效抑制結晶初期的冰晶形成，從而減少胞內冰的數量，穩定細胞膜并保護細胞免受冷凍損傷。
16、抗氧化作用：超低溫環境下產生的活性氧(ros)會攻擊線粒體膜的不飽和脂肪酸，改變膜通透性，導致線粒體內ca2+外流，線粒體dna損傷，從而引起線粒體膜電位下降、氧化磷酸化解偶聯、atp合成失敗、產生過量ros。過量的ros繼續破壞膜系統，成為惡性循環。pvp可以有效減弱該循環，顯著提高細胞抗氧化性，細胞膜完整性以及線粒體活性。
17、高分子表面活性：pvp分子上的內酰胺具有親水性，氧氣向吡咯烷酮環上提供電子后，整個分子呈陽性，可以分散和吸附懸浮液，維持溶液穩定，降低表面張力。
18、高生物兼容性：器官離體保存時要求使用材料具有極高的生物兼容性。pvp的低免疫原性和良好的生物相容性使其可能在器官凍存中得到應用。
19、更進一步地，另一種物質全氟萘烷是一種無毒、不可燃、熱穩定性好、無生物蓄積性的氧氣載體。全氟萘烷作為一種人工血液替代物，也被稱為人工紅細胞，它是一種含氟的有機化合物，具有如下特性：
20、物理特性：全氟萘烷是一種無色、無味、無毒的液體，具有較低的表面張力和較高的穩定性，有助于在體內保持穩定的狀態。有研究表明，對小鼠眼球局部應用含全氟萘烷的過飽和氧乳液(supersaturated?oxygen?emulsion,ssoe)1小時后，在4小時、24小時、7天后均檢測不到眼瞼刺激或發紅、結膜充血或分泌物增多、角膜渾濁或水腫。
21、高溶解氧能力：全氟萘烷可以溶解大量的氧氣，并且能夠將氧氣通過擴散傳遞給周圍組織。在ssoe中，氧分壓可超過600mmhg，而空氣中氧分壓為160mmhg，可見全氟萘烷是一種性能優異的氧氣載體。在眼球堿燒傷的小鼠模型中，ssoe處理組角膜細胞存活率(36.0±3.0％)高于未治療組(17.2±4.5％)，說明全氟萘烷能夠減少缺氧導致的細胞死亡。
22、上述兩種特性決定了全氟萘烷可以作為一種安全穩定的載氧化合物，增加器官保存液中氧氣含量，即使在超低溫環境中，仍可為器官提供充足氧氣，從而解決移植臟器在冷凍保存時缺氧所導致的缺血再灌注損傷以及缺氧所造成的能量供給不足。
23、更進一步地，由于在超低溫環境下，離體器官仍保持著較低水平的能量代謝，因此在所述的器官保存液中添加atp、葡萄糖等能量物質，從而保證離體腎臟的能量供給，維持其代謝，減少細胞損傷情況。
24、更進一步地，由于細胞代謝會產生氫離子，作為一種可行的實施方案，可以在緩沖液中加入氫氧化鈉以調節器官保存液的ph為約7.4，因此所述器官保存液為弱堿性，以維持離體器官內環境穩態。
25、一方面，本專利技術提供了所述的器官保存液在器官樣本在零下90-70度保存或運輸中的應用；在一些實施方案中，所述器官樣本在零下80度保存或運輸。
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【技術保護點】
1.一種器官保存液，其特征在于，包括：
2.如權利要求1所述的器官保存液，其特征在于，還含有海藻糖，ATP和肝素中的一種或多種。
3.如權利要求1所述的器官保存液，其特征在于，所述器官保存液不含DMSO。
4.如權利要求1所述的器官保存液，其特征在于，所述器官保存液的還含有緩沖液；
5.一種器官保存液，其特征在于，每100ml器官保存液中，包括：
6.如權利要求1-5任一所述的器官保存液在器官樣本在零下90-70度保存或運輸中的應用；
7.如權利要求6所述的應用，其特征在于，所述器官樣本在零下90-70度保存或運輸5-10天；
8.如權利要求6所述的應用，其特征在于，所述器官來源于人或動物；
9.如權利要求1-5任一所述的器官保存液的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：
10.一種如權利要求1-5任一所述的器官保存液的使用方法，其特征在于，包括以下步驟：
【技術特征摘要】
1.一種器官保存液，其特征在于，包括：
2.如權利要求1所述的器官保存液，其特征在于，還含有海藻糖，atp和肝素中的一種或多種。
3.如權利要求1所述的器官保存液，其特征在于，所述器官保存液不含dmso。
4.如權利要求1所述的器官保存液，其特征在于，所述器官保存液的還含有緩沖液；
5.一種器官保存液，其特征在于，每100ml器官保存液中，包括：
6.如權利要求1-5任一所...
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