【技術實現步驟摘要】
本專利技術涉及一種哺乳類細胞株，特別涉及一種穩定大量表達豬瘟病毒可溶性e2重組抗原的哺乳類細胞株及其用于制造豬瘟病毒可溶性e2重組抗原的方法及其應用。
技術介紹
1、經典豬瘟(classical?swine?fever；csf)又稱古典豬瘟，是一種感染豬只的高傳染性疾病。一般而言，豬只高燒、厭食、腹瀉、神經癥狀、全身紅斑、大量死亡、母豬流產或產下死豬崽，是一種感染豬只的高傳染性及高致病性疾病。
2、經典豬瘟于1903年首次被發現后，流行于世界各地，包括亞洲、非洲、歐洲、中南美洲等地區，一旦爆發疫情，常造成養豬產業重大的經濟損失，甚至影響全球經濟。此經典豬瘟流行的地區必須使用常規疫苗接種來預防和控制豬瘟的傳播，如果使用得當，疫苗接種可有效限制豬瘟傳播、預防疾病爆發并在未感染豬群中建立保護性免疫。
3、經典豬瘟的病原為經典豬瘟病毒(classical?swine?fever?virus；csfv)，屬于黃病毒科(flavivirdae)瘟疫病毒屬(pestivirus)。csfv基因組為單股正向的rna，全長約12.3kb，會轉譯成3898個氨基酸形成多聚蛋白(polyprotein)，再由蛋白酶加工成四種結構蛋白(c、erns、e1和e2)和八種非結構病毒蛋白(npro、p7、ns2、ns3、ns4a、ns4b、ns5a及ns5b)，其中e2、erns和ns3可誘發宿主產生抗體反應。
4、目前普遍使用的商品化豬瘟疫苗主要有兩種：豬瘟活毒減毒疫苗(modified?livevaccine，mlv)
5、市售昆蟲細胞雖可生產e2重組抗原，但其成本高居不下，因此開發低成本的e2次單位疫苗是迫切的課題。有鑒于此，亟需開發一種低成本的e2重組抗原的制造方法，以解決習知技術的種種問題。
技術實現思路
1、因此，本專利技術的一態樣是提供一種穩定表達豬瘟病毒可溶性e2重組抗原的哺乳類細胞株。
2、本專利技術的另一態樣是提供一種豬瘟病毒可溶性e2重組抗原的制造方法，其培養上述的哺乳類細胞株，以提升可溶性e2重組抗原的產量。
3、本專利技術的再一態樣是提供一種豬瘟病毒可溶性e2重組抗原，其由上述的哺乳類細胞株所制造。
4、本專利技術的又一態樣是提供一種豬用次單位疫苗組成物，其以上述的豬瘟病毒可溶性e2重組抗原做為有效成分。
5、根據本專利技術的上述態樣，提出一種穩定表達豬瘟病毒可溶性e2重組抗原的哺乳類細胞株。此細胞株為于2023年05月17日寄存于德國菌種保藏中心(deutsche?sammlung?vonmikroorganismen?und?zellkulturen?gmbh，dsmz；地址為inhoffen?straβe?7b，38124braunschweig，德國)、寄存編號為dsm?acc3376、分類命名為中國倉鼠卵巢細胞的中國倉鼠上皮細胞株(chinese?hamster?ovary?cell)ccc_e2_5e12。
6、在上述實施例中，前述可溶性e2重組蛋白的氨基酸序列可例如為如序列識別號(seq?id?no):1所示。
7、在上述實施例中，前述可溶性e2重組蛋白的蛋白濃度可例如為至少800mg/l細胞培養液。在一些例示中，前述可溶性e2重組蛋白的蛋白濃度可例如為至少850mg/l細胞培養液。在另一些例示中，前述可溶性e2重組蛋白的蛋白濃度可例如為850mg/l細胞培養液至950mg/l細胞培養液。
8、在上述實施例中，前述e2重組蛋白可例如由seq?id?no:2所示的核酸序列所編碼。
9、根據本專利技術的另一態樣，提出一種豬瘟病毒可溶性e2重組蛋白的制造方法，其培養如上述的哺乳類細胞株，以制得可溶性e2重組抗原。
10、根據本專利技術的再一態樣，提出一種豬瘟病毒可溶性e2重組抗原，其由如上述的哺乳類細胞株所制造，其中可溶性e2重組蛋白的氨基酸序列可例如為如序列識別號(seq?idno):1所示。
11、根據本專利技術的又一態樣，提出一種豬用次單位疫苗組成物，其以如上述的豬瘟病毒可溶性e2重組抗原做為有效成分，且此豬用次單位疫苗組成物對受試對象的有效施用次數可例如為一次。
12、在上述實施例中，前述e2重組蛋白的有效劑量可例如為25μg/ml至50μg/ml。
13、應用本專利技術的哺乳類細胞株及其用于制造豬瘟病毒可溶性e2重組抗原的方法，其可利用不同細胞代數的哺乳類細胞表達系統大幅提升豬瘟病毒可溶性e2重組抗原的產量，可有效降低豬瘟病毒可溶性e2重組抗原的生產成本，進而應用于生產豬瘟e2蛋白次單位疫苗。
14、可以理解的是，前述的概括說明及下述的詳細說明僅為例示，旨在對要求保護的專利技術提供進一步的解釋。
本文檔來自技高網...【技術保護點】
1.一種穩定表達豬瘟病毒可溶性E2重組抗原的哺乳類細胞株，其特征在于，該穩定表達豬瘟病毒可溶性E2重組抗原的哺乳類細胞株為于2023年05月17日寄存于德國菌種保藏中心(Deutsche?Sammlung?von?Mikroorganismen?und?Zellkulturen?GmbH，DSMZ)、寄存編號為DSMACC3376的中國倉鼠上皮細胞株(Chinese?Hamster?Ovary?cell)CCC_E2_5E12。
2.根據權利要求1所述的穩定表達豬瘟病毒可溶性E2重組抗原的哺乳類細胞株，其特征在于，其中該可溶性E2重組蛋白的一氨基酸序列為如序列識別號(SEQ?ID?NO):1所示。
3.根據權利要求1所述的穩定表達豬瘟病毒可溶性E2重組抗原的哺乳類細胞株，其特征在于，其中該可溶性E2重組蛋白的蛋白濃度為至少800mg/L細胞培養液。
4.根據權利要求1所述的穩定表達豬瘟病毒可溶性E2重組抗原的哺乳類細胞株，其特征在于，其中該可溶性E2重組蛋白的蛋白濃度為至少850mg/L細胞培養液。
5.根據權利要求1所述的穩定表達
6.根據權利要求1所述的穩定表達豬瘟病毒可溶性E2重組抗原的哺乳類細胞株，其特征在于，其中該E2重組蛋白是由如SEQ?ID?NO:2所示的一核酸序列所編碼。
7.一種豬瘟病毒可溶性E2重組蛋白的制造方法，其特征在于，該豬瘟病毒可溶性E2重組蛋白的制造方法培養如權利要求1所述的哺乳類細胞株，以制得該可溶性E2重組抗原。
8.根據權利要求7所述的豬瘟病毒可溶性E2重組蛋白的制造方法，其特征在于，其中該可溶性E2重組蛋白的蛋白濃度為至少800mg/L細胞培養液。
9.一種豬瘟病毒可溶性E2重組抗原，其特征在于，該豬瘟病毒可溶性E2重組抗原由根據權利要求1所述的哺乳類細胞株所制造，其中該可溶性E2重組蛋白的一氨基酸序列為如序列識別號(SEQ?ID?NO):1所示。
10.根據權利要求9所述的豬瘟病毒可溶性E2重組抗原，其特征在于，其中該E2重組蛋白是由如SEQ?ID?NO:2所示的一核酸序列所編碼。
11.一種豬用次單位疫苗組成物，其特征在于，該豬用次單位疫苗組成物以如權利要求9所述的豬瘟病毒可溶性E2重組抗原做為一有效成分，且該豬用次單位疫苗組成物對一受試對象的一有效施用次數為一次。
12.根據權利要求11所述的豬用次單位疫苗組成物，其特征在于，其中該豬瘟病毒可溶性E2重組蛋白的一有效劑量為25μg/mL至50μg/mL。
...【技術特征摘要】
1.一種穩定表達豬瘟病毒可溶性e2重組抗原的哺乳類細胞株，其特征在于，該穩定表達豬瘟病毒可溶性e2重組抗原的哺乳類細胞株為于2023年05月17日寄存于德國菌種保藏中心(deutsche?sammlung?von?mikroorganismen?und?zellkulturen?gmbh，dsmz)、寄存編號為dsmacc3376的中國倉鼠上皮細胞株(chinese?hamster?ovary?cell)ccc_e2_5e12。
2.根據權利要求1所述的穩定表達豬瘟病毒可溶性e2重組抗原的哺乳類細胞株，其特征在于，其中該可溶性e2重組蛋白的一氨基酸序列為如序列識別號(seq?id?no):1所示。
3.根據權利要求1所述的穩定表達豬瘟病毒可溶性e2重組抗原的哺乳類細胞株，其特征在于，其中該可溶性e2重組蛋白的蛋白濃度為至少800mg/l細胞培養液。
4.根據權利要求1所述的穩定表達豬瘟病毒可溶性e2重組抗原的哺乳類細胞株，其特征在于，其中該可溶性e2重組蛋白的蛋白濃度為至少850mg/l細胞培養液。
5.根據權利要求1所述的穩定表達豬瘟病毒可溶性e2重組抗原的哺乳類細胞株，其特征在于，其中該可溶性e2重組蛋白的蛋白濃度為850mg/l細胞培養液至950mg/l細胞培養液。
6.根據權利要求1所述的穩定...
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