【技術實現步驟摘要】
本專利技術涉及阿扎胞苷耐藥株制備領域。
技術介紹
1、骨髓增生異常綜合征(myelodysplastic?syndrome，mds)是一組起源于造血干細胞/髓系祖細胞的異質性惡性克隆性疾病，其特征是無效克隆性造血所致的骨髓細胞發育異常、外周血細胞減少和進行性骨髓衰竭，約30％患者在疾病過程中轉化為急性髓系白血病(acute?myeloid?leukemia，aml)。繼發性aml約占aml病例總數的20-30％，主要由mds轉化而來。mds一旦轉為aml后，患者治療效果差，生存時間明顯縮短。白血病在我國發病率約為3.4/10萬，每年新發患者7.5萬，死亡5.3萬，其中aml占70％，是我國十大高發惡性腫瘤之一，對我國國民健康和生命造成嚴重威脅，加重了醫療負擔。目前aml臨床治療的金標準是標準化療及聯合造血干細胞移植，但在臨床治療中細胞毒性化療藥物的治療效果仍不理想。
2、阿扎胞苷(azacitidine，簡稱aza)是目前最主要的去甲基化藥物之一，2004年美國食品和藥物管理局批準阿扎胞苷用于mds和aml等血液系統惡性疾病。目前臨床上阿扎胞苷主要用于mds患者、以及原始細胞為20-30％的aml患者或原始細胞＞30％但無法耐受常規化療的老年患者。阿扎胞苷作為嘧啶類似物，被轉運到細胞后可被尿苷胞苷激酶磷酸化為aza三磷酸，80-90％結合rna干擾核酸和蛋白質的合成，10-20％在dna復制過程中摻入dna與dnmt共價結合，抑制dnmt活性，降低抑癌基因甲基化，恢復腫瘤抑制基因的轉錄，從而誘導抗白血病作用。然而，越
3、體外建立藥物耐藥細胞株是研究腫瘤耐藥機制的重要方法，目前主流的構建方法有：大劑量藥物沖擊法、藥物濃度遞增法和轉基因結合藥物篩選法。藥物處理過程中，無法耐受的細胞會死亡，貼壁生長的腫瘤細胞可以通過換液去除死細胞，但血液腫瘤細胞多為懸浮生長細胞，無法通過換液去除死細胞，因此懸浮腫瘤細胞耐藥株的構建難度大，缺乏詳細資料參考。
技術實現思路
1、本專利技術的目的在于，針對現有技術存在的問題，公開了一種mds轉aml阿扎胞苷耐藥株，所述耐藥株保藏于中國典型培養物保藏中心，保藏名稱為：skm/aza，保藏編號為c2024248。
2、本專利技術還公開了一種所述mds轉aml阿扎胞苷耐藥株的構建方法，步驟如下：
3、s1:將初始skm1細胞傳代于細胞培養裝置當中；
4、s2:將藥物濃度為0.1μm阿扎胞苷加入到上述細胞培養裝置當中，處理24小時，低速離心換液撤藥，以去除死細胞，細胞狀態恢復后，再用0.1μm濃度藥物處理，觀察死細胞多即撤藥恢復，重復上述“加藥-撤藥”操作，直至細胞在此濃度下穩定生長，進入下一階段藥物濃度處理；
5、s3:根據藥物處理濃度，選擇特定的藥物濃度進行遞增處理；具體如下：
6、藥物處理濃度≤1μm時，按照0.1、0.2、0.4、0.8、1.2μm遞增濃度；
7、藥物處理濃度＞1μm時，按照2.4、3.6、4.8、6.4、7.2、12μm遞增濃度；
8、藥物處理濃度≥12μm時，每次遞增1μm，且藥物持續處理不撤藥；
9、藥物處理濃度≥18μm時，每次遞增2μm，且藥物持續處理不撤藥；
10、藥物處理濃度≥25μm時，每次遞增5μm，且藥物持續處理不撤藥；
11、s4:經過12個月的誘導，細胞能在70μm的藥物中穩定存活，獲得所述的mds轉aml阿扎胞苷耐藥株。
12、在一個優選的方案當中，細胞培養裝置為細胞培養瓶。
13、在一個優選的方案當中，步驟s2低速離心的離心條件是500rpm?4℃離心5min。
14、本專利技術擬通過濃度遞增間歇誘導法構建阿扎胞苷skm1耐藥細胞株，填補aml阿扎胞苷耐藥株的空白，為阿扎胞苷耐藥研究提供細胞模型。
15、本專利技術構建的阿扎胞苷耐藥細胞株為阿扎胞苷耐藥的機制研究提供了重要的細胞模型，高通量數據提供了耐藥細胞相對于親本細胞的表達譜變化，可用于mds和aml阿扎胞苷耐藥機制的體內外實驗、評價藥物抗腫瘤活性、開發逆轉藥物耐藥的靶點藥物，具有較高的科研和生產應用價值。
本文檔來自技高網...【技術保護點】
1.一種MDS轉AML阿扎胞苷耐藥株，其特征在于，所述耐藥株保藏于中國典型培養物保藏中心，保藏名稱為：SKM/Aza，保藏編號為C2024248。
2.一種如權利要求1所述的MDS轉AML阿扎胞苷耐藥株的構建方法，其特征在于，步驟如下：
3.根據權利要求2所述的MDS轉AML阿扎胞苷耐藥株的構建方法，其特征在于，細胞培養裝置為細胞培養瓶。
4.根據權利要求3所述的MDS轉AML阿扎胞苷耐藥株的構建方法，其特征在于，步驟S2低速離心的離心條件是500rpm?4℃離心5min。
【技術特征摘要】
1.一種mds轉aml阿扎胞苷耐藥株，其特征在于，所述耐藥株保藏于中國典型培養物保藏中心，保藏名稱為：skm/aza，保藏編號為c2024248。
2.一種如權利要求1所述的mds轉aml阿扎胞苷耐藥株的構建方法，其特征在于，步驟如下：
<...【專利技術屬性】
技術研發人員：趙楊靜，游越，徐嘉欣，潘艷，楚明強，周靜東，邵啟祥，張慧，
申請(專利權)人：江蘇大學，
類型：發明
國別省市：
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