【技術實現步驟摘要】
本專利技術涉及一種檢測方法，具體的說，涉及一種砷衍生物提取及高效液相色譜-電感耦合等離子質譜聯用技術測定方法。
技術介紹
1、砷(as)是一種自然存在的元素，廣泛存在于整個地殼中，并通過含砷礦物和土壤的浸出和侵蝕釋放到自然水體中，可分為無機砷和有機砷。無機砷是一種劇毒物質，對人體和環境有害，砷的毒性主要表現為急性和慢性兩種類型。急性砷中毒可導致惡心、嘔吐、腹瀉、中毒性休克等癥狀，嚴重時可導致死亡。長期暴露于低濃度的砷化合物可能會引起慢性砷中毒，其癥狀包括皮膚病變、呼吸道疾病、神經系統損傷以及癌癥等。
2、甲基化砷衍生物是一種砷的有機化合物，常見的有甲基砷酸(mma)和二甲基砷酸(dma)等。這些有機砷化合物相對于無機砷化合物來說，毒性稍小一些。它們可以通過食物、飲水和空氣等途徑進入人體，可以通過人體內的新陳代謝相互轉化，有機砷可以在動物體內轉化為其他砷種類，對人體健康造成潛在威脅。甲基化砷衍生物的毒性機制尚不完全清楚，但已有研究表明，它們可能通過影響細胞的dna修復、氧化還原平衡、細胞凋亡和細胞周期等途徑來導致細胞和組織的損傷。甲基化砷衍生物還被認為可能與癌癥的發生和發展有關。環境和生物系統中存在100多種砷化合物，砷的毒性因其化學形態和氧化狀態的不同而有很大差異。研究砷化合物不同形態以及不同毒理學特性，可以更好地了解砷在人體中的分布、轉化、毒性以及生物系統中的代謝和健康影響。
3、砷形態分析方法主要是檢測技術聯用，如液相色譜－熒光法、液相色譜－電感耦合等離子體質譜法等。由于同時具有高靈敏度和對不同形態砷
4、流行病學研究表明低濃度砷劑的暴露與皮膚癌等各種腫瘤的發生有關。砷劑雖然被公認為是人類的致癌劑之一，但是其致癌作用機制仍存在爭論。有的學者認為砷劑可單獨引起腫瘤的發生，而有的學者認為砷劑只是協同其它致癌物導致正常細胞的惡性轉化。
技術實現思路
1、本專利技術的目的是提供一種通過高效液相色譜-電感耦合等離子質譜聯用技術測定方法，進行各種價位的砷元素的含量的方法。
2、本專利技術提供一種砷衍生物的測定方法，包括如下步驟：
3、1）對含有砷衍生物的待測樣品進行預處理，配置待測樣品液；
4、2）去待測樣品液進行高效液相色譜-質譜聯用法分析；
5、其中，高效液相色譜洗脫的洗脫液的流動相為：流動相a為5%的甲醇和5?mmol/l碳酸銨的混合液，流動相b為5%的甲醇和100?mmol/l碳酸銨的混合液。
6、進一步的，所述高效液相色譜的洗脫程序為梯度洗脫。
7、進一步的，所述梯度洗脫的具體方法包括：
8、0-6min,100%的流動相a；6-10min,100%的流動相a；10-15min,100%的流動相b；15-20min,100%的流動相b。20min之后為下一個循環。
9、進一步的，所述分析方法為高效液相色譜-電感耦合等離子質譜聯用分析法。
10、進一步的，所述質譜的檢測條件為：等離子體功率為1550?w，載氣為高純氬氣；載氣流速為1.0?l/min；采樣深度為5?mm；冷卻氣流量為14?l/min；輔助氣流量為0.8?l/min；載氣流量為0.9?l/min。
11、進一步的，所述待測樣品為含有砷衍生物的細胞；所述待測樣品的預處理方法為：在待測樣品中加入裂解液裂解細胞，振蕩，離心過濾，取濾液作為待測樣品液。
12、進一步的，所述裂解液的加入量為每1×106cell/100?μl?ripa裂解液；所述震蕩時間為5?min；離心過濾方法為吸細胞液吸取至3?kd截留膜的離心管中，4℃，14000×g條件下離心過濾30?min。
13、進一步的，所述待測樣品為海產樣品；所述待測樣品的預處理方法為：將待測樣品加入到甲醇-水溶液中，8000?r/min均質2?min，再超聲提取10?min；然后轉移至離心管中，10000?r/min冷凍離心15?min；取上清液過0.22?μm濾膜，所得濾液為待測樣品液。
14、進一步的，每克所述海產樣品加入10?ml甲醇-水溶液中，所述甲醇-水溶液為體積比為4:6的溶液。
15、本專利技術對該檢測方法進行了優化，調整流動相濃度以及組成成分，建立了一種新的檢測方法，使用了流動相為5%methanol+5?mmol/l碳酸銨混合溶液(a)，5%methanol+100mmol/l碳酸銨混合溶液(b)，梯度洗脫的方式，完整的檢測出六種形態的砷標準品，且結果良好，并且檢測限、精密度均良好。本專利技術也探索出了24?h內as(ⅲ)在黑色素瘤細胞內轉化成了as(v)，為之后探索砷形態檢測提供方法以及在黑色素瘤細胞內as(ⅲ)的解毒機制提供了一些證據。
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1.一種砷衍生物的測定方法，其特征在于，包括如下步驟：
2.根據權利要求1所述的砷衍生物的測定方法，其特征在于，所述高效液相色譜的洗脫程序為梯度洗脫。
3.根據權利要求2所述的砷衍生物的測定方法，其特征在于，所述梯度洗脫的具體方法包括：
4.根據權利要求1所述的砷衍生物的測定方法，其特征在于，所述分析方法為高效液相色譜-電感耦合等離子質譜聯用分析法。
5.根據權利要求4所述的砷衍生物的測定方法，其特征在于，所述質譜的檢測條件為：等離子體功率為1550?W，載氣為高純氬氣；載氣流速為1.0?L/min；采樣深度為5?mm；冷卻氣流量為14?L/min；輔助氣流量為0.8?L/min；載氣流量為0.9?L/min。
6.根據權利要求1-5任一所述的砷衍生物的測定方法，其特征在于，所述待測樣品為含有砷衍生物的細胞；所述待測樣品的預處理方法為：在待測樣品中加入裂解液裂解細胞，振蕩，離心過濾，取濾液作為待測樣品液。
7.根據權利要求5所述的砷衍生物的測定方法，其特征在于，所述裂解液的加入量為每1×106?cell/10
8.根據權利要求1-5任一所述的砷衍生物的測定方法，其特征在于，所述待測樣品為海產樣品；所述待測樣品的預處理方法為：將待測樣品加入到甲醇-水溶液中，8000?r/min均質2?min，再超聲提取10?min；然后轉移至離心管中，10000?r/min冷凍離心15?min；取上清液過0.22?μm濾膜，所得濾液為待測樣品液。
9.根據權利要求8所述的砷衍生物的測定方法，其特征在于，每克所述海產樣品加入10mL甲醇-水溶液中，所述甲醇-水溶液為體積比為4:6的溶液。
...【技術特征摘要】
1.一種砷衍生物的測定方法，其特征在于，包括如下步驟：
2.根據權利要求1所述的砷衍生物的測定方法，其特征在于，所述高效液相色譜的洗脫程序為梯度洗脫。
3.根據權利要求2所述的砷衍生物的測定方法，其特征在于，所述梯度洗脫的具體方法包括：
4.根據權利要求1所述的砷衍生物的測定方法，其特征在于，所述分析方法為高效液相色譜-電感耦合等離子質譜聯用分析法。
5.根據權利要求4所述的砷衍生物的測定方法，其特征在于，所述質譜的檢測條件為：等離子體功率為1550?w，載氣為高純氬氣；載氣流速為1.0?l/min；采樣深度為5?mm；冷卻氣流量為14?l/min；輔助氣流量為0.8?l/min；載氣流量為0.9?l/min。
6.根據權利要求1-5任一所述的砷衍生物的測定方法，其特征在于，所述待測樣品為含有砷衍生物的細胞；所述待測樣品的預處理方法為：在待測樣品中加...
【專利技術屬性】
技術研發人員：胡緒喬，洪文旭，徐靜，譚洪興，
申請(專利權)人：深圳市慢性病防治中心深圳市皮膚病防治研究所，深圳市肺部疾病防治研究所，
類型：發明
國別省市：
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