【技術實現步驟摘要】
本專利技術涉及花菁染料的制備方法領域。
技術介紹
1、隨著治療精度的提高和癌癥死亡率的降低，近紅外(nir-i和nir-ii)光療診斷系統的發展愈發重要。這些系統在nir-ii波長(1000–1700nm)范圍內工作，能夠顯著提升組織穿透力和成像分辨率，同時有效避免自發熒光的產生，從而超越了nir-i波長(700–900nm)的性能。
2、相比于無機熒光基團，有機小分子nir-ii有機花菁染料因其卓越的可調光物理特性、生物相容性和最低生物毒性而受到越來越多的關注。研究表明，具有nir-ii區域吸收和發射波長的有機花菁染料在nir-ii熒光生物成像方面表現出良好的應用潛力。但有機花菁染料的疏水性限制了其在生物體內運用，以及其聚集淬滅效應導致熒光強度低。
技術實現思路
1、本專利技術為了解決有機花菁染料的疏水性限制了其在生物體內運用，以及其聚集淬滅效應導致熒光強度低的技術問題，而提供一種近紅外二區熒光標記的磷脂分子的制備方法。
2、一種近紅外二區熒光標記的磷脂分子的制備方法，具體按以下步驟進行：
3、一、在氮氣氛圍下，將1,8-萘內酰亞胺和碘己烷溶解在甲苯中，在溫度為100℃、攪拌條件下加熱回流20h；反應結束后，冷卻到室溫，然后過濾，再用乙酸乙酯洗滌，得到化合物2；
4、二、向醋酸酐中加入2-氯-3-(羥基亞甲基)-1-環己烯-1-甲醛、醋酸鈉和步驟一得到的化合物2，在60℃條件下反應30min，然后冷卻，倒入飽和的碳酸氫鈉溶液，經鹽水
5、三、將巰基苯甲酸和步驟二得到的c6溶于無水二氯甲烷和無水甲醇的混合溶液中，在室溫條件下攪拌3h，反應完成后，通過薄層析色譜法得到c6-cooh；
6、四、將n,n-二異丙基乙胺、hbtu和步驟三獲得的c6-cooh溶解在無水二氯甲烷中，室溫下攪拌1h，獲得反應溶液3；將4-(1,2,2-三苯基乙烯基)苯胺溶解在無水二氯甲烷中，加入到反應溶液3中，室溫下攪拌24h；反應完成后，真空濃縮，通過薄層色譜層析進行純化，得到c6-lipid。
7、所述c6-lipid的化學式為：
8、
9、一種近紅外二區熒光標記的磷脂分子的制備方法，具體按以下步驟進行：
10、ⅰ、在氬氣氛圍下，將氫化鈉和1,8-萘內酰亞胺溶解在無水n,n-二甲基甲酰胺中；然后冷卻到0℃，加入到碘己烷中；在室溫下攪拌3h，反應結束后，用乙酸乙酯萃取，鹽水洗滌并濃縮，通過硅膠柱層析法進行純化，分離得到化合物4；
11、ⅱ、在氬氣氛圍條件下，將步驟七得到的化合物4溶解在無水thf中，加入甲基氯化鎂，在55℃條件下攪拌1h；反應完成后，將反應體系冷卻，倒入冰水混合物中，冰水混合物中含有hcl溶液，在減壓條件下除去thf過濾混合物的水溶液，然后加入碘化鉀溶液得到紅色沉淀，真空旋干溶劑后,加入碘化鉀溶液得到紅色沉淀，進行粗產物過濾，獲得的沉淀用乙酸乙酯和水洗滌三次，干燥后得到固體產物5；
12、ⅲ、將2-氯-3-(羥基亞甲基)-環己-1-烯甲醛和步驟ⅱ獲得的固體產物5加入到2ml乙酸中，再加入到三乙胺和乙酸酐的混合溶液中，在60℃下反應30min；反應完成后，冷卻，加入乙酸乙酯，過濾，烘干得到nir-c6；
13、ⅳ、將步驟ⅲ獲得的nir-c6和巰基苯甲酸溶解在無水二氯甲烷和無水甲醇的混合溶液中，在室溫下攪拌2h；反應完成后，加入到冰乙醚中，過濾，得到nir-c6-cooh；
14、ⅴ、將步驟ⅳ獲得的nir-c6-cooh、n,n-二異丙基乙胺和苯并三氮唑-n,n,n’,n’-四甲基脲六氟磷酸鹽溶解在無水二氯甲烷中，室溫下攪拌1h，獲得反應溶液；將二硬脂酰磷脂酰乙醇胺溶解在無水二氯甲烷中，加入到反應溶液中，室溫下攪拌2h；反應完成后，真空濃縮，通過薄層色譜層析進行純化，得到nir-c6-cooh-lipid。
15、所述nir-c6-cooh-lipid的化學式為：
16、
17、一種近紅外二區熒光標記的磷脂分子的脂質納米載體的制備方法，具體按以下步驟進行：
18、將dmpc、dope、dspe-peg2000和c6-lipid溶解于體積比為1：1的氯仿與甲醇的混合溶液中；混合溶液在30℃真空環境下被蒸發形成均勻的脂質膜；然后，將脂質膜分散在1.0ml磷酸鹽溶液，冰浴超聲2.5min制得脂質體制劑；將脂質體制劑在50℃到6℃之間進行三次加熱-冷卻循環，再使用小型擠出機依次通過孔徑為400nm的聚碳酸酯膜、孔徑為200nm的聚碳酸酯膜來回擠出10次，再通過透析袋對脂質體進行透析，得到c6-lipid-l。
19、一種近紅外二區熒光標記的磷脂分子的脂質納米載體的制備方法，具體按以下步驟進行：
20、將dmpc、dope、dspe-peg2000和nir-c6-cooh-lipid溶解于體積比為1：1的氯仿與甲醇的混合溶液中；混合溶液在30℃真空環境下被蒸發形成均勻的脂質膜；然后，將脂質膜分散在1.0ml磷酸鹽溶液，冰浴超聲2.5min制得脂質體制劑；將脂質體制劑在50℃到6℃之間進行三次加熱-冷卻循環，再使用小型擠出機依次通過孔徑為400nm的聚碳酸酯膜、孔徑為200nm的聚碳酸酯膜來回擠出10次，再通過透析袋對脂質體進行透析，得到nir-c6-cooh-lipid-l。
21、在本專利技術中，基于現有的基礎染料的合成，進一步開發基于磷脂的nir-i和nir-ii有機熒光團c6-lipid和nir-c6-cooh-lipid。這種將磷脂(脂質體的成分)修飾于nir-i和nir-ii的接枝部分，將有利于其與脂質體的其他成分進行更好的自組裝，達到強的熒光發射能力。
22、本專利技術有益效果：
23、本專利技術提供了一種近紅外二區熒光標記的磷脂分子以及其脂質納米載體，利用類似的磷脂修飾有機熒光染料可實現熒光團的有效成像，并可能會產生j聚集等聚集體，以提高熒光量子產率，達到高效的熒光成像效果。
24、本專利技術制備的花菁染料用于熒光成像。
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1.一種近紅外二區熒光標記的磷脂分子的制備方法，其特征在于該方法具體按以下步驟進行：
2.根據權利要求1所述一種近紅外二區熒光標記的磷脂分子的制備方法，其特征在于步驟一所述1,8-萘內酰亞胺、碘己烷和甲苯的用量比為10mmol：20mmol：20mL。
3.根據權利要求1所述一種近紅外二區熒光標記的磷脂分子的制備方法，其特征在于步驟二所述醋酸酐、2-氯-3-(羥基亞甲基)-1-環己烯-1-甲醛、醋酸鈉和化合物2的用量比為20mL：3.12mmol：3.43mmol：6.24mmol。
4.根據權利要求1所述一種近紅外二區熒光標記的磷脂分子的制備方法，其特征在于步驟三所述巰基苯甲酸、C6、無水二氯甲烷和無水甲醇的用量比為0.17mmol：0.083mmol：5mL：5mL。
5.根據權利要求1所述一種近紅外二區熒光標記的磷脂分子的制備方法，其特征在于步驟四所述N,N-二異丙基乙胺、HBTU、C6-COOH和4-(1,2,2-三苯基乙烯基)苯胺的用量比為0.070mmol：0.11mmol：0.056mmol：0.084mmol?4-(
6.根據權利要求1所述一種近紅外二區熒光標記的磷脂分子的制備方法，其特征在于所述C6-Lipid的化學式為：
7.一種近紅外二區熒光標記的磷脂分子的制備方法，其特征在于該方法具體按以下步驟進行：
8.根據權利要求7所述的一種近紅外二區熒光標記的磷脂分子的制備方法，其特征在于所述NIR-C6-COOH-Lipid的化學式為：
9.如權利要求1所述的一種近紅外二區熒光標記的磷脂分子的脂質納米載體的制備方法，其特征在于該方法具體按以下步驟進行：
10.如權利要求7所述的一種近紅外二區熒光標記的磷脂分子的脂質納米載體的制備方法，其特征在于該方法具體按以下步驟進行：
...【技術特征摘要】
1.一種近紅外二區熒光標記的磷脂分子的制備方法，其特征在于該方法具體按以下步驟進行：
2.根據權利要求1所述一種近紅外二區熒光標記的磷脂分子的制備方法，其特征在于步驟一所述1,8-萘內酰亞胺、碘己烷和甲苯的用量比為10mmol：20mmol：20ml。
3.根據權利要求1所述一種近紅外二區熒光標記的磷脂分子的制備方法，其特征在于步驟二所述醋酸酐、2-氯-3-(羥基亞甲基)-1-環己烯-1-甲醛、醋酸鈉和化合物2的用量比為20ml：3.12mmol：3.43mmol：6.24mmol。
4.根據權利要求1所述一種近紅外二區熒光標記的磷脂分子的制備方法，其特征在于步驟三所述巰基苯甲酸、c6、無水二氯甲烷和無水甲醇的用量比為0.17mmol：0.083mmol：5ml：5ml。
5.根據權利要求1所述一種近紅外二區熒光標記的磷脂分子的制備方法，其特征在于步驟四所述n,n-二...
【專利技術屬性】
技術研發人員：郭兵，黃海燕，
申請(專利權)人：哈爾濱工業大學深圳哈爾濱工業大學深圳科技創新研究院，
類型：發明
國別省市：
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