【技術實現步驟摘要】
本專利技術屬于農業生物，主要涉及一種防治二斑葉螨的dsrna核酸農藥及其應用。
技術介紹
1、二斑葉螨，屬于葉螨科葉螨屬，廣泛分布于我國各地及亞洲、歐洲等其他國家，是一種世界性害螨，主要危害果樹、設施蔬菜等農作物和經濟作物。二斑葉螨，體型小，繁殖能力強，擴散速度快。長期使用化學農藥防控，導致其產生較強的抗性。
2、rna?干擾（rna?interference，rnai）又稱?rna?沉默（rna?silencing），是真核生物中一種由雙鏈?rna（double-stranded?rna，dsrna）或者?sirna（小干擾?rna）、mirna（微小?rna）誘發，使同源?mrna?高效特異性的降解或表達受到抑制，從而阻止靶基因蛋白翻譯的生物學現象。利用?rnai，可干擾靶標害蟲的正常生長，減輕對寄主植物的為害，最終達到防治有害生物與保護植物的目的。
3、rnai?技術在農業害蟲治理中具有極大潛力。目前，拜耳、先正達等公司已開發出多個基于?rnai?防治害蟲的產品，mon87411?在?2021?年也獲得中國農業農村部頒發的轉基因生物安全證書（進口和食品/飼料用途）。特別是?2022?年?10?月，全球第?1?個rna?殺蟲劑獲得了國際標準化組織農藥通用名技術委員會臨時批準的英文通用名ledprona，是噴灑式?rnai?生物殺蟲劑邁向生產應用的里程碑。rnai技術用于防治葉螨具有巨大潛力，但是目前國內外鮮有對二斑葉螨基因功能的研究及其殺蟲活性靶標基因的報道。
4、利用葉面噴施外源dsrn
技術實現思路
1、本專利技術克服現有二斑葉螨防治技術的缺陷和不足，提供一種防治二斑葉螨的核酸農藥，可顯著降低二斑葉螨卵、幼螨和成螨的數量，并且減少其對寄主植物的危害。
2、為了達到上述目的，本專利技術是通過如下技術方案實現的。
3、本專利技術首先公開了一種防治二斑葉螨的核酸農藥，其特征在于該核酸農藥的靶標基因為pb1，其核苷酸序列如seq?id?no.1所示。
4、本專利技術同時也公開了防治二斑葉螨的核酸農藥，其特征在于該核酸農藥的靶標基因pb1，以此為模板合成dsrna，所述dsrna的核苷酸序列如seq?id?no：2所示。
5、本專利技術還公開了防治二斑葉螨的核酸農藥在預防二斑葉螨蟲害和/或制備防治二斑葉螨的產品中的應用。實驗結果顯示：通過rna干擾技術降低二斑葉螨pb1基因的表達量后，導致其生長發育異常，死亡率顯著提高，對二斑葉螨的半致死濃度為4.86?ng/μl，將pb1的雙鏈rna噴施于植株表面，對卵、幼螨和成螨的防治效果分別為92.76%、84.24%和96.14%，說明靶標該基因在二斑葉螨防治方面具有巨大潛力，同時利用雙鏈rna為其防控提供了新的途徑。
6、本專利技術以二斑葉螨的pb1基因為靶標設計特異性dsrna分子，該dsrna分子可顯著降低其體內靶標基因的表達量，對二斑葉螨具有顯著的致死作用，其致死半劑量lc50是4.86ng/μl。將本專利技術所提供的dsrna分子制備成核酸農藥噴霧?，噴灑在植株的葉片上?，對二斑葉螨的防治效果達到93.29%，因此本專利技術所提供的核酸農藥現實中用來防治二斑葉螨具有巨大的潛力。
7、本專利技術更加詳細的描述如下：
8、一種防治二斑葉螨的核酸農藥，可顯著降低其存活率，減少其對寄主植物的危害。該核酸農藥的的靶標基因 pb1，其核苷酸序列如seq?id?no.1所示。
9、一種防治二斑葉螨的核酸農藥，可顯著降低其存活率，減少其對寄主植物的危害。該核酸農藥的的靶標基因 pb1，以此為模板合成dsrna，所述dsrna的核苷酸序列如seq?idno：2所示。
10、所述dsrna的制備包括以下步驟：
11、s1、以二斑葉螨的cdna序列為模板，合成 pb1基因片段；
12、s2、以 pb1基因片段作為模板，設計含有t7啟動子序列的引物序列對；
13、s3、通過pcr擴增得到dsrna合成模板；
14、s4、體外合成dsrna。
15、一種防治二斑葉螨的核酸農藥，可顯著降低其存活率，減少其對寄主植物的危害。該核酸農藥的的靶標基因 pb1，以此為模板合成dsrna，以此dsrna處理二斑葉螨后，導致其皺縮，體表黑化，最后死亡。
16、一種防治二斑葉螨的核酸農藥，可顯著降低其存活率，減少其對寄主植物的危害。該核酸農藥的的靶標基因 pb1，以此為模板合成dsrna，以此dsrna處理二斑葉螨后，導致其靶標基因的表達量顯著下降。
17、一種防治二斑葉螨的核酸農藥，可顯著降低其存活率，減少其對寄主植物的危害。該核酸農藥的的靶標基因為 pb1，以此為模板合成dsrna，將其噴灑至寄主植物葉面表面，相比對照，二斑葉螨的種群數量顯著降低，寄主植物葉片顏色損傷顯著減少。
18、一種防治二斑葉螨的核酸農藥，所述的 pb1靶基因或所述的dsrna的應用，所述應用包括下列任一項：
19、1）所述的dsrna或所述的 pb1靶基因在防治二斑葉螨中的應用；
20、2）所述的dsrna或所述的 pb1靶基因在預防二斑葉螨蟲害和/或制備防治二斑葉螨的產品中的應用；
21、3）所述的dsrna或所述的 pb1靶基因在促進二斑葉螨死亡和/或制備促進二斑葉螨死亡的產品中的應用。
22、本專利技術主要解決了農業害蟲二斑葉螨的有效防治問題，通過一種創新的核酸農藥手段，實現了對二斑葉螨的高效、特異性控制，減少了對傳統化學農藥的依賴，降低了環境污染和生態風險，重點考察了dsrna（雙鏈rna）在二斑葉螨防治的效果，主要包括對表型和種群數量的影響，主要的難點在于dsrna片段對二斑葉螨體內pb1基因的靶向沉默作用的高效特異性。
23、本專利技術公開的防治二斑葉螨的核酸農藥及其應用相對于現有技術所具有的積極效果在于：
24、本專利技術利用核酸農藥防治二斑葉螨，通過 pb1基因合成用于防治二斑葉螨的dsrna，該dsrna可靶向沉默二斑葉螨體內的 本文檔來自技高網...
【技術保護點】
1.一種防治二斑葉螨的dsRNA核酸農藥，其特征在于該核酸農藥的靶標基因為Pb1，其核苷酸序列如SEQ?ID?NO.1所示。
2.一種防治二斑葉螨的dsRNA核酸農藥，其特征在于該核酸農藥的靶標基因Pb1，以此為模板合成dsRNA，所述dsRNA的核苷酸序列如SEQ?ID?NO：2所示。
3.權利要求1或2所述防治二斑葉螨的dsRNA核酸農藥在預防二斑葉螨蟲害和/或制備防治二斑葉螨的產品中的應用。
4.權利要求1或2所述防治二斑葉螨的dsRNA核酸農藥在用于降低二斑葉螨蟲害存活率，減少其對寄主植物的危害方面的應用。
【技術特征摘要】
1.一種防治二斑葉螨的dsrna核酸農藥，其特征在于該核酸農藥的靶標基因為pb1，其核苷酸序列如seq?id?no.1所示。
2.一種防治二斑葉螨的dsrna核酸農藥，其特征在于該核酸農藥的靶標基因pb1，以此為模板合成dsrna，所述dsrna的核苷酸序列如seq...
【專利技術屬性】
技術研發人員：任美鳳，楊靜，段園鵬，王逸飛，陸俊姣，李大琪，
申請(專利權)人：山西農業大學，
類型：發明
國別省市：
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