【技術實現步驟摘要】
本公開涉及核酸藥物，尤其是涉及一種抑制lpa基因表達的雙鏈寡核苷酸及其應用。
技術介紹
1、脂蛋白(a)(lp(a)，lpa)是一種低密度脂蛋白變體，由與纖溶酶原(plg)同源的高分子量糖蛋白apo(a)亞型和ldl樣顆粒形成二硫鍵共價結合構成，是一種具有apo(a)基團的低密度脂蛋白樣蛋白。lpa是編碼載脂蛋白(a)(apo(a))的基因的名稱，主要表達在肝臟，其表達僅限于人類和非靈長類動物。血漿lp(a)濃度大部分是由lpa基因決定，這在揭示lp(a)與心血管疾病的因果關系中起關鍵作用。脂蛋白(a)水平是多種心血管疾病的直接致病因素，與心血管疾病密切相關，如心肌梗死、下肢動脈病變、外周動脈粥樣硬化以及主動脈瓣狹窄等疾病。利用孟德爾隨機化研究證實lp(a)水平升高是心血管疾病的病因之一，lp(a)與心血管疾病風險呈連續相關，在2100個心血管疾病的候選基因中發現lpa基因的變異是最強的心血管遺傳危險因素。因此lp(a)在心血管疾病中的病因性作用成為了研究熱點。
2、小干擾rna(sirna)基于rna干擾機制，可以序列特異性的方式抑制或阻斷目的基因的表達，從而達到治療疾病的目的。因此通過抑制lpa基因的表達，能夠在細胞水平上對脂蛋白(a)水平異常引發的疾病、特別是心血管疾病進行預防和治療。成人血脂異常防治指南將>30mg/d1定義為lp(a)異常，以此為標準，約30％的既往有心血管事件的患者存在lp(a)異常，盡管lp(a)水平升高常見，但缺乏針對性治療藥物。因此，開發抑制lpa基因表達并能夠治療與lpa基因
3、有鑒于此，特提出本公開。
技術實現思路
1、針對心腦血管疾病需求，本公開以lpa基因為靶點開發了能夠降低膽固醇水平、進而預防或控制代謝綜合征的小核酸分子藥物。本公開的第一目的在于提供一種抑制lpa基因表達的雙鏈寡核苷酸及其綴合物、藥物組合物、試劑盒以及它們在抑制或降低lpa基因表達或治療lpa基因介導的疾病或癥狀的方法和用途。
2、為解決上述技術問題，本公開特采用如下技術方案：
3、可選的實施方式中，提供了一種抑制lpa基因表達的雙鏈寡核苷酸，所述雙鏈寡核苷酸包括正義鏈和反義鏈；
4、其中，所述正義鏈包含與seq?id?no.1所示序列中至少15個連續核苷酸相同或基本相同的核苷酸序列，所述基本相同指所述核苷酸序列與所述至少15個連續核苷酸之間具有不超過3個核苷酸差異；
5、其中，所述反義鏈包含至少17個核苷酸且與所述正義鏈互補或基本互補形成雙鏈體區，所述基本互補是指所述正義鏈和所述反義鏈在所述雙鏈體區錯配不超過3個核苷酸；
6、所述雙鏈寡核苷酸的每個核苷酸獨立地選自未修飾或經過修飾的核苷酸。
7、可選的實施方式中，提供了一種抑制lpa基因表達的雙鏈寡核苷酸，所述雙鏈寡核苷酸包含正義鏈和反義鏈；
8、按照5'末端到3'末端的方向，所述反義鏈的第2-19位核苷酸包含與lpa?rna轉錄物的互補區域，其中，所述互補區域包含seq?id?no.147～291中任一序列中的至少15個、至少16個、至少17個、或至少18個連續核苷酸的序列，或者與所述連續核苷酸之間1、2或3個核苷酸差異的核苷酸序列；
9、所述正義鏈包含與所述反義鏈至少部分地互補或基本互補形成雙鏈體區的核苷酸序列；所述基本互補是指所述正義鏈和所述反義鏈在所述雙鏈體區的錯配不超過3個核苷酸。
10、可選的實施方式中，提供了一種綴合物，該綴合物包含上述的雙鏈寡核苷酸以及一個或多個能夠與細胞受體結合的配體。
11、可選的實施方式中，還提供了上述的雙鏈寡核苷酸或上述的綴合物在制備用于緩解、預防和/或治療由lpa基因介導的疾病或病癥的藥物中的應用。
12、可選的實施方式中，還提供了一種藥物組合物，該藥物組合物包含上述的雙鏈寡核苷酸和/或上述的綴合物。
13、可選的實施方式中，還提供了一種試劑盒，該試劑包含上述的雙鏈寡核苷酸，和/或上述的綴合物，和/或上述的藥物組合物。
14、可選的實施方式中，還提供了一種抑制lpa基因表達的方法，該方法包括向受試者施用上述的雙鏈寡核苷酸，和/或上述的綴合物，和/或上述的藥物組合物。
15、可選的實施方式中，還提供了一種緩解、治療和/或預防lpa介導的疾病或病癥的方法，該方法包括向受試者施用上述的雙鏈寡核苷酸，和/或上述的綴合物，和/或上述的藥物組合物。
16、與現有技術相比，本公開具有如下有益效果：
17、本公開提供的雙鏈寡核苷酸和藥物組合物在體外細胞實驗和小鼠模型內實驗中顯示出優異的lpa基因表達調節活性。例如，本公開的雙鏈寡核苷酸在lpa轉基因細胞系中顯示出優異的lpa?mrna抑制活性，在1nm的sirna濃度下，目標基因lpa的剩余活性可低至11.90％(rx001010)。sirna與配體綴合后的綴合物在balb/c小鼠水動力注射模型中，目標基因lpa的剩余活性可低至10.05％(rz001005，給藥劑量3mg/kg)和18.76％(rz001031，給藥劑量1mg/kg)。由此說明，本公開提供的雙鏈寡核苷酸、藥物組合物以及寡核苷酸綴合物能夠有效調節目標基因lpa的表達水平，因此可有效治療和/或預防由lpa基因表達的mrna水平相關的疾病癥狀，具有良好的應用前景。
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1.一種抑制LPA基因表達的雙鏈寡核苷酸，其特征在于，所述雙鏈寡核苷酸包括正義鏈和反義鏈；
2.根據權利要求1所述的雙鏈寡核苷酸，其特征在于，所述反義鏈與SEQ?ID?NO.1的核苷酸序列中的15個、16個、17個、18個、19個、20個、21個、22個或23個連續核苷酸互補或基本互補，所述基本互補指在互補區域的錯配不超過3個核苷酸。
3.根據權利要求1所述的雙鏈寡核苷酸，其特征在于，所述正義鏈包含SEQ?ID?NO.1序列中的15個、16個、17個、18個、19個或20個連續核苷酸或者與所述連續核苷酸之間具有不超過2個核苷酸差異的核苷酸序列；
4.一種抑制LPA基因表達的雙鏈寡核苷酸，其特征在于，所述雙鏈寡核苷酸包含正義鏈和反義鏈；
5.根據權利要求4所述的雙鏈寡核苷酸，其特征在于，所述反義鏈的核苷酸序列包含SEQ?ID?NO.147～291中任一序列中的至少15個、至少16個、至少17個、至少18個、至少19個、至少20個或至少21個連續核苷酸，或者與所述連續核苷酸之間具有1、2或3個核苷酸差異的核苷酸序列；
6.根
7.根據權利要求4所述的雙鏈寡核苷酸，其特征在于，所述雙鏈寡核苷酸選自表1中RN001001～RN001145中任一編號所示的修飾或未修飾雙鏈寡核苷酸；
8.根據權利要求4所述的雙鏈寡核苷酸，其特征在于，所述雙鏈寡核苷酸中的每個核苷酸獨立地選自未修飾或經修飾的核苷酸；
9.根據權利要求8所述的雙鏈寡核苷酸，其特征在于，所述正義鏈和/或所述反義鏈含有至少一個2'-O-(CH2)n-O-R1修飾的核苷酸或2'-O-Si(R2)3修飾的核苷酸；
10.根據權利要求4所述的雙鏈寡核苷酸，其特征在于，所述正義鏈或所述反義鏈包含具有至少1個核苷酸的3'突出端；
11.根據權利要求4-10任一項所述的雙鏈寡核苷酸，其特征在于，所述雙鏈體區的結構如式(101)所示：
12.根據權利要求11所述的雙鏈寡核苷酸，其特征在于，所述雙鏈寡核苷酸的每個核苷酸獨立地選自經修飾的核苷酸，且所述正義鏈選自下列A1～A11中的任意一種；和/或，所述反義鏈選自下列B1～B41中的任意一種：
13.根據權利要求4所述的雙鏈寡核苷酸，其特征在于，所述雙寡鏈核苷酸選自siRNA。
14.綴合物，其特征在于，所述綴合物包含權利要求1-13中任一項所述的雙鏈寡核苷酸以及一個或多個能夠與細胞表面受體結合的配體；
15.根據權利要求14所述的綴合物，其特征在于，所述綴合物的結構如式(201)所示：
16.根據權利要求15所述的綴合物，其特征在于，每個Rligand各自獨立地選自如式(301)所示的結構或其藥學上可接受的鹽或其立體異構體：
17.根據權利要求15所述的綴合物，其特征在于，所述Nu選自RX001149～RX001192中的任意一種；
18.權利要求1-13任一項所述的雙鏈寡核苷酸或權利要求14-17任一項所述的綴合物在制備用于緩解、預防和/或治療由LPA基因介導的疾病或病癥的藥物中的應用；
19.藥物組合物，其特征在于，包含權利要求1-13任一項所述的雙鏈寡核苷酸和/或權利要求14-17任一項所述綴合物。
20.試劑盒，其特征在于，所述試劑盒包含權利要求1-13任一項所述的雙鏈寡核苷酸，和/或權利要求14-17任一項所述的綴合物，和/或權利要求19所述的藥物組合物。
21.一種抑制LPA基因表達的方法，其特征在于，包括向受試者施用權利要求1-13任一項所述的雙鏈寡核苷酸，和/或權利要求14-17任一項所述的綴合物，和/或權利要求19所述的藥物組合物；
22.一種緩解、治療和/或預防LPA介導的疾病或病癥的方法，其特征在于，其包括向受試者施用權利要求1-13任一項所述的雙鏈寡核苷酸，和/或權利要求14-17任一項所述的綴合物，和/或權利要求19所述的藥物組合物；
...【技術特征摘要】
1.一種抑制lpa基因表達的雙鏈寡核苷酸，其特征在于，所述雙鏈寡核苷酸包括正義鏈和反義鏈；
2.根據權利要求1所述的雙鏈寡核苷酸，其特征在于，所述反義鏈與seq?id?no.1的核苷酸序列中的15個、16個、17個、18個、19個、20個、21個、22個或23個連續核苷酸互補或基本互補，所述基本互補指在互補區域的錯配不超過3個核苷酸。
3.根據權利要求1所述的雙鏈寡核苷酸，其特征在于，所述正義鏈包含seq?id?no.1序列中的15個、16個、17個、18個、19個或20個連續核苷酸或者與所述連續核苷酸之間具有不超過2個核苷酸差異的核苷酸序列；
4.一種抑制lpa基因表達的雙鏈寡核苷酸，其特征在于，所述雙鏈寡核苷酸包含正義鏈和反義鏈；
5.根據權利要求4所述的雙鏈寡核苷酸，其特征在于，所述反義鏈的核苷酸序列包含seq?id?no.147～291中任一序列中的至少15個、至少16個、至少17個、至少18個、至少19個、至少20個或至少21個連續核苷酸，或者與所述連續核苷酸之間具有1、2或3個核苷酸差異的核苷酸序列；
6.根據權利要求4所述的雙鏈寡核苷酸，其特征在于，所述正義鏈的核苷酸序列包含seq?id?no.2～146的任一條的至少15個、至少16個、至少17個、至少18個或至少19個連續核苷酸，或者與所述連續核苷酸之間相異1、2或3個核苷酸；
7.根據權利要求4所述的雙鏈寡核苷酸，其特征在于，所述雙鏈寡核苷酸選自表1中rn001001～rn001145中任一編號所示的修飾或未修飾雙鏈寡核苷酸；
8.根據權利要求4所述的雙鏈寡核苷酸，其特征在于，所述雙鏈寡核苷酸中的每個核苷酸獨立地選自未修飾或經修飾的核苷酸；
9.根據權利要求8所述的雙鏈寡核苷酸，其特征在于，所述正義鏈和/或所述反義鏈含有至少一個2'-o-(ch2)n-o-r1修飾的核苷酸或2'-o-si(r2)3修飾的核苷酸；
10.根據權利要求4所述的雙鏈寡核苷酸，其特征在于，所述正義鏈或所述反義鏈包含具有至少1個核苷酸的3'突出端；
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【專利技術屬性】
技術研發人員：黃淵余，孔麗娜，
申請(專利權)人：蘇州炫景生物科技有限公司，
類型：發明
國別省市：
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