【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】
本專(zhuān)利技術(shù)屬于生物藥物，具體涉及基于鐵硫簇合成蛋白為靶點(diǎn)的新型生物納米防蚊藥物。
技術(shù)介紹
1、蚊子是眾多蚊媒疾病病毒的傳播者。截至目前，這些蚊媒疾病已在全球范圍內(nèi)造成了多起重大公共衛(wèi)生事件。由于多數(shù)蚊媒疾病病毒缺乏有效的疫苗，因此人們主要采取各類(lèi)防蚊抑蚊手段來(lái)應(yīng)對(duì)蚊媒疾病給公共衛(wèi)生體系帶來(lái)的威脅和壓力。由于殺蟲(chóng)劑可能對(duì)環(huán)境造成污染，并威脅人類(lèi)健康，且越來(lái)越多的蚊子物種開(kāi)始發(fā)展出對(duì)于各種殺蟲(chóng)劑的抗藥性，研究者開(kāi)始探索其它的防蚊策略。近年來(lái)，基于遺傳方法的防蚊策略因其種屬特異性、低毒性而越來(lái)越受人們的關(guān)注。基于雙鏈rna（dsrna）的rna干擾是一種已被成功應(yīng)用于昆蟲(chóng)的基因沉默策略。然而，將dsrna成功應(yīng)用于現(xiàn)實(shí)的防蚊策略中必須解決三個(gè)主要問(wèn)題:（1）如何高效、低成本地將這些核苷酸遞送到蚊子體內(nèi)?（2）如何維持這些核苷酸在環(huán)境和蚊子體內(nèi)的穩(wěn)定性?（3）如何能夠利用dsrna同時(shí)抑制蚊子的飛行、吸血和生殖能力？有研究表明殼聚糖-三聚磷酸鈉納米體系可以作為一個(gè)低成本輸運(yùn)體系有效提高dsrna在環(huán)境和蚊子體內(nèi)的穩(wěn)定性，從而解決了前兩個(gè)問(wèn)題。但如何同時(shí)抑制蚊子的飛行、吸血和生殖能力一直是一個(gè)尚未解決的問(wèn)題。
2、鐵硫簇在細(xì)胞呼吸和代謝中扮演著重要的角色。在哺乳動(dòng)物中，鐵硫簇合成障礙可以抑制細(xì)胞呼吸，從而抑制肌肉的功能。由于蚊子的飛行和吸血行為均依賴(lài)于肌肉的功能，破壞蚊子肌肉組織中的鐵硫簇生物合成可以同時(shí)抑制其飛行和吸血能力，而吸血能力的降低又可以進(jìn)一步抑制蚊子的生殖能力。因此，蚊子肌肉組織的鐵硫簇生物合成是一個(gè)理想的防蚊靶
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
1、本專(zhuān)利技術(shù)的目的是為了解決上述問(wèn)題，而提供基于鐵硫簇合成蛋白為靶點(diǎn)的新型生物納米防蚊藥物。
2、一種對(duì)白紋伊蚊的防治藥物，是以鐵硫簇合成核心蛋白aalbnfs1為靶點(diǎn)的dsrna；所述的aalbnfs1其核酸序列如序列表seq?id?no:1所示。
3、所述的dsrna的核甘酸序列如seq?id?no:2；
4、dsnfs1，構(gòu)建成殼聚糖-三聚磷酸鈉-dsnfs1生物納米藥物；
5、所述的殼聚糖-三聚磷酸鈉-dsnfs1是由下述方法制備：
6、1）制備三聚磷酸鈉tpp溶液，?ph值調(diào)為4.0-5.0；
7、2）tpp溶液與cs和dsnfs1藕聯(lián)；
8、3）離心，取沉淀，分散；
9、步驟3）所述的藕聯(lián)，是在600轉(zhuǎn)/每分鐘的磁力攪拌下，在tpp溶液中依次加入dsnfs1、殼聚糖溶液，反應(yīng)；
10、所述的生物納米藥物，殼聚糖、三聚磷酸鈉和dsnfs1?的重量比為5:1:0.0064；
11、所述的離心是在4℃條件下12000?g離心5分鐘，所得沉淀物用去離子水清洗三次，分散在去離子水中，置于4℃冰箱中保存。
12、所述的反應(yīng)時(shí)間為60分鐘。
13、本專(zhuān)利技術(shù)提供了一種針對(duì)白紋伊蚊的新型生物納米防治藥物，尤其是對(duì)白紋伊蚊鐵硫簇合成核心蛋白aalbnfs1的鑒定，是首次鑒定；并且首次以鐵硫簇合成蛋白aalbnfs1為靶點(diǎn)，通過(guò)構(gòu)建生物納米體系來(lái)防治白紋伊蚊。結(jié)果顯示以aalbnfs1為靶點(diǎn)的殼聚糖-三聚磷酸鈉-dsnfs1生物納米藥物可顯著抑制白紋伊蚊的飛行、吸血和生殖行為，從而達(dá)到良好的白紋伊蚊防治效果。
14、本專(zhuān)利技術(shù)首次鑒定白紋伊蚊的鐵硫簇合成核心蛋白aalbnfs1，對(duì)此蛋白的生物學(xué)功能進(jìn)行了體內(nèi)研究，并首次將靶向aalbnfs1基因的dsrna（命名為dsnfs1）組裝到殼聚糖-三聚磷酸鈉納米體系中，形成殼聚糖-三聚磷酸鈉-dsnfs1（以下簡(jiǎn)稱(chēng)為cs-tpp-dsnfs1）生物納米體系。利用cs-tpp-dsnfs1飼喂白紋伊蚊幼蟲(chóng)，并在成蟲(chóng)階段考察其防蚊效果。結(jié)果顯示cs-tpp-dsnfs1生物納米體系可顯著抑制白紋伊蚊的飛行、吸血和生殖行為。將鑒定的白紋伊蚊鐵硫簇合成核心蛋白aalbnfs1用作dsrna靶點(diǎn)，并將靶向aalbnfs1基因的dsnfs1組裝為cs-tpp-dsnfs1生物納米體系用作防蚊藥物，是一種對(duì)白紋伊蚊進(jìn)行防治的新型藥物開(kāi)發(fā)。相比于已有防蚊策略，cs-tpp-dsnfs1生物納米體系具備以下優(yōu)勢(shì)：（1）相比于已有的基于遺傳學(xué)技術(shù)的防蚊方法，本方法不需要構(gòu)建基因缺陷的蚊子種群，也不需要擔(dān)心基因缺陷蚊子種群的生殖劣勢(shì)問(wèn)題，直接將cs-tpp-dsnfs1生物納米體系撒入水中即可達(dá)到同時(shí)抑制白紋伊蚊飛行、吸血和生殖行為的防蚊效果，省時(shí)省力、成本較低。（2）相比于殺蟲(chóng)劑，本方法具有高種屬特異性、低毒性、無(wú)污染、無(wú)抗藥性、成本較低等優(yōu)勢(shì)。（3）相比于滅蚊燈，本方法不需電力供應(yīng)且效果覆蓋范圍更廣，具有更好的普適性和易操作性。以下是該新型防蚊藥物開(kāi)發(fā)的研究過(guò)程：
本文檔來(lái)自技高網(wǎng)...【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】
1.一種對(duì)白紋伊蚊的防治藥物，其特在于：是以鐵硫簇合成核心蛋白AalbNFS1為靶點(diǎn)的dsRNA，所述的AalbNFS1其核酸序列如序列表SEQ?ID?NO:1所示。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種對(duì)白紋伊蚊的防治藥物，其特在于：所述的dsRNA的核甘酸序列如SEQ?ID?NO:2所示。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的一種對(duì)白紋伊蚊的防治藥物，其特在于：?dsNFS1，構(gòu)建成殼聚糖-三聚磷酸鈉-dsNFS1生物納米藥物。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種對(duì)白紋伊蚊的防治藥物，其特在于：所述的殼聚糖-三聚磷酸鈉-dsNFS1是由下述方法制備：
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的一種對(duì)白紋伊蚊的防治藥物，其特在于：步驟3）所述的藕聯(lián)，是在600轉(zhuǎn)/每分鐘的磁力攪拌下，在TPP溶液中依次加入dsNFS1、殼聚糖溶液，反應(yīng)。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的一種對(duì)白紋伊蚊的防治藥物，其特在于：所述的生物納米藥物，殼聚糖、三聚磷酸鈉和dsNFS1?的重量比為5:1:0.0064。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的一種對(duì)白紋伊蚊的防治藥物，其特在于：所述
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的一種對(duì)白紋伊蚊的防治藥物，其特在于：所述的反應(yīng)時(shí)間為60分鐘。
...【技術(shù)特征摘要】
1.一種對(duì)白紋伊蚊的防治藥物，其特在于：是以鐵硫簇合成核心蛋白aalbnfs1為靶點(diǎn)的dsrna，所述的aalbnfs1其核酸序列如序列表seq?id?no:1所示。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種對(duì)白紋伊蚊的防治藥物，其特在于：所述的dsrna的核甘酸序列如seq?id?no:2所示。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的一種對(duì)白紋伊蚊的防治藥物，其特在于：?dsnfs1，構(gòu)建成殼聚糖-三聚磷酸鈉-dsnfs1生物納米藥物。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種對(duì)白紋伊蚊的防治藥物，其特在于：所述的殼聚糖-三聚磷酸鈉-dsnfs1是由下述方法制備：
5.根據(jù)權(quán)利要求...
【專(zhuān)利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：江秀梅，王寅亮，劉罡，段詩(shī)文，高健敏，
申請(qǐng)(專(zhuān)利權(quán))人：東北師范大學(xué)，
類(lèi)型：發(fā)明
國(guó)別省市：
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