【技術實現步驟摘要】
本專利技術屬于生物醫藥，具體地說是一種不同連接臂數peg修飾藥用多肽的制備方法與活性評價。
技術介紹
1、多肽是由多個氨基酸通過肽鍵連接而形成的一類化合物。與小分子藥物相比，多肽與靶點的親和力強、特異性高、副作用小；與大分子藥物相比，多肽藥物具有免疫原性低、生產成本低等明顯優勢。但多肽藥物的缺點也很明顯，多肽類藥物的物理化學性質不穩定、容易被氧化和水解、容易發生團聚、半衰期較短、清除速率快。
2、毒素肽是一類具有毒性的天然多肽產物，多來源于有毒動物，比如蜜蜂、蜘蛛、蝎子、蛇等，常應用于抗腫瘤、抗菌和抗病毒等生物醫藥領域。盡管毒素肽種類很多，但開發用于治療的多肽類型仍比較少，主要由于毒素肽存在藥動學穩定性差、免疫原性高、生物利用度低的問題。特別是單獨的毒素肽對細胞的毒性過高，在發揮抗腫瘤、抗菌和抗病毒作用的同時，對異常細胞和正常細胞進行無差別的攻擊和殺傷，常造成全身毒性的副作用，限制了其臨床實際應用。
3、化學修飾是一種常見的改善多肽分子性能的方法，包括末端修飾、殘基修飾和骨架修飾等。其中末端修飾可以考慮在氮端和碳端引入功能性基團進行結構優化和性能改造，在增強多肽的藥動學穩定性、延長半衰期等方面具有重要的意義。聚乙二醇(peg)是一種穩定性高、生物相容性良好的高分子，廣泛應用于蛋白質和多肽的末端修飾，能夠有效延長蛋白質和多肽的半衰期、降低或消除免疫原性、減少毒副作用，并提高其化學和生物穩定性等。
4、由于單純毒素肽存在細胞毒性過高、體內易降解等諸多局限性，因此提出了在毒素肽的末端連接不同臂數量的
技術實現思路
1、為了解決上述技術問題，本專利技術提供一種不同連接臂數peg修飾藥用多肽的制備方法與活性評價，以解決現有毒素肽的生物穩定性差、全身毒副作用大的不足，提供在毒素肽的末端修飾不同連接臂數量peg的合成方法，提高毒素肽的藥動學穩定性，降低毒素肽對細胞的毒性，有助于推動蜂毒肽的臨床應用。
2、根據本公開的第一方面，提出了一種不同連接臂數peg修飾藥用多肽的制備方法，包括以下步驟：
3、s1、以n二氯樹脂為載體加入二氯甲烷dcm溶脹半小時，再抽掉dcm，加入序列中2n的第一個氨基酸，加入2n的二異丙基乙胺diea和二甲基甲酰胺dmf及dcm；二異丙基乙胺diea、二甲基甲酰胺dmf、dcm，氮氣鼓泡反應60min；加入甲醇，反應半小時，抽掉反應液，用dmf、meoh洗凈；
4、s2、往反應器中加入序列中第二個氨基酸2n，2n的1－羥基，苯并，三氯唑四甲基六氟磷酸鹽hbtu及diea，n2鼓泡反應半小時，洗掉液體，茚三酮檢測；再用吡啶和乙酸酐封端；洗凈，加入脫帽液去除9-芴甲氧羰基fmoc保護基，洗凈，茚三酮檢測；
5、s3、按照s2步驟依次加入序列中不同的氨基酸并進行修飾；
6、s4、將樹脂用氮氣吹干后從反應柱中取下，倒入燒瓶中，再往燒瓶中加入切割液，震蕩，濾掉樹脂；得到濾液，再向濾液中加入乙醚，析出粗產物，然后離心，清洗即得到序列的粗產物；用高效液相色譜將粗品提純，并進行質譜測定修飾肽的成功合成。
7、優選的，所述步驟s1中加入序列中2n的第一個氨基酸，加入2n的二異丙基乙胺diea和二甲基甲酰胺dmf及dcm時，二甲基甲酰胺dmf及dcm的量能夠使樹脂充分鼓動起來。
8、優選的，所述s4加入的切割液的量按照與樹脂的比例為10ml/克進行添加。
9、優選的，所述切割液的組成是95％tfa，2％乙二硫醇，2％三異丙基硅烷，1％水。
10、根據本公開的第二方面，提出了一種不同連接臂數peg修飾藥用多肽的活性評價，采用藥用多肽為具有毒副作用的抗腫瘤多肽和抗菌肽，包括毒素肽；利用固相合成將不同數量的peg連接臂修飾在毒素肽的n端，最終形成不同類型化學修飾的毒素肽鏈。
11、優選的，所述多肽修飾鏈的peg臂數為2-16。
12、與現有技術相比，本專利技術具有如下有益效果：
13、1、本專利技術基于多肽固相合成技術合成不同連接臂peg數量修飾的毒素肽，操作簡單、易于生產。
14、2、本專利技術所制備的毒素肽多肽藥物，在n端修飾不同連接臂數量的peg，提高毒素肽在體內的穩定性；其中n端修飾的peg可以有效降低毒素肽對細胞的毒性，并隨著peg連接臂數量的增加，其毒性逐漸減小。
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1.一種不同連接臂數PEG修飾藥用多肽的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：
2.如權利要求1所述一種不同連接臂數PEG修飾藥用多肽的制備方法，其特征在于：所述步驟S1中加入序列中2n的第一個氨基酸，加入2n的二異丙基乙胺DIEA和二甲基甲酰胺DMF及DCM時，二甲基甲酰胺DMF及DCM的量能夠使樹脂充分鼓動起來。
3.如權利要求1所述一種不同連接臂數PEG修飾藥用多肽的制備方法，其特征在于：所述S4加入的切割液的量按照與樹脂的比例為10mL/克進行添加。
4.如權利要求3所述一種不同連接臂數PEG修飾藥用多肽的制備方法，其特征在于：所述切割液的組成是95％TFA，2％乙二硫醇，2％三異丙基硅烷，1％水。
5.一種不同連接臂數PEG修飾藥用多肽的活性評價，根據權利要求1-4任一所述的制備方法制得修飾肽，其特征在于：采用藥用多肽為具有毒副作用的抗腫瘤多肽和抗菌肽，包括毒素肽；利用固相合成將不同數量的PEG連接臂修飾在毒素肽的N端，最終形成不同類型化學修飾的毒素肽鏈。
6.如權利要求5所述一種不同連接臂數PEG修飾藥用多肽的
...【技術特征摘要】
1.一種不同連接臂數peg修飾藥用多肽的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：
2.如權利要求1所述一種不同連接臂數peg修飾藥用多肽的制備方法，其特征在于：所述步驟s1中加入序列中2n的第一個氨基酸，加入2n的二異丙基乙胺diea和二甲基甲酰胺dmf及dcm時，二甲基甲酰胺dmf及dcm的量能夠使樹脂充分鼓動起來。
3.如權利要求1所述一種不同連接臂數peg修飾藥用多肽的制備方法，其特征在于：所述s4加入的切割液的量按照與樹脂的比例為10ml/克進行添加。
4.如權利要求3所述一種不同連...
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