【技術實現步驟摘要】
本專利技術屬于多肽及多肽檢測，具體涉及一種定量共有多肽的篩選方法及其應用。
技術介紹
1、肉及肉制品是我國居民飲食結構中的重要組成部分，深受消費者的喜愛。目前，市面上的肉制品多存在實際肉用料和標注肉用料不相符的情況，導致肉制品的質量參差不齊，肉制品的真實性難以判定。
2、蛋白質組學技術可以通過測定物種專屬性多肽進行物種定性分析，目前已廣泛應用至肉制品真實性判定分析中。共有多肽是多個物種中均含有的相同氨基酸序列，可來源于同一個蛋白，也可來源于不同蛋白。定量共有多肽是可作為參照物用于校正物種含量分析的共有多肽，在不同物種中的含量沒有顯著性差異。因此，開發定量共有多肽的快速篩選方法可為解決物種準確定量的難題提供參照物。然而，目前一些現有研究中雖然提出了共有多肽的概念，但是關于定量共有多肽的概念、應用以及如何快速篩選定量共有多肽的方法卻并未曾被提出。
技術實現思路
1、本專利技術的目的在于提供一種定量共有多肽的篩選方法及其應用，所述篩選方法可以快速篩選獲得不同物種中的定量共有多肽，方法簡便易操作。
2、本專利技術提供了一種定量共有多肽的篩選方法，包括如下步驟：
3、將待測樣品和多個純物種樣品進行蛋白提取、酶解及凈化處理，分別得到待測樣品肽段和純物種樣品肽段；
4、將所述純物種樣品肽段進行高分辨質譜全掃描分析，獲得純物種樣品的原始檢測數據；
5、將所述純物種樣品的原始檢測數據對uniprot數據庫進行搜庫，得到不同物種的蛋白和多肽信
6、將所述不同物種的蛋白和多肽信息進行共有多肽篩選，得到共有多肽；
7、將所述共有多肽的序列信息導入高分辨質譜中，并對所述待測樣品肽段進行高分辨質譜prm數據采集，得到多肽定量數據；
8、對所述多肽定量數據進行定量數據分析，得到初篩定量共有多肽；所述定量數據分析的方法包括：以待測樣品含量為x軸，多肽定量信息中的多肽響應強度為y軸，構建待測樣品含量與峰強度關系的標準曲線，篩選不同待測樣品含量下響應強度相同的多肽；
9、將所述初篩定量共有多肽的氨基酸序列信息轉化為離子對信息，并對所述待測樣品進行液相色譜串聯質譜mrm數據采集，篩選在不同待測樣品含量下響應強度無顯著差異的共有多肽，得到所述定量共有多肽。
10、優選的，所述高分辨質譜的色譜條件包括：色譜柱為hypersil?gold?c18；流動相包括a相和b相，所述a相為甲酸和水，所述a相中甲酸的體積濃度為0.1%，所述b相為甲酸和乙腈，所述b相中甲酸的體積濃度為0.1%；色譜梯度為0~0.2?min，3%~10%?b；0.2~16?min，10%~40%?b；16~17?min，40%~80%?b；17~19.5?min，80%?b；19.5~19.6?min，80~3%?b；19.6~25min，3%?b；流速為0.2?ml/min；
11、所述高分辨質譜檢測的質譜參數包括：噴霧電壓為3400?v；毛細管溫度為320?℃；鞘氣為40?arb；輔助氣為15?arb；全掃描分辨率為120000；質量掃描范圍為150~2000?m/z，自動增益值為3×106，注入時間為100?ms；二級掃描的分辨率為30000，自動增益值為2×106，注入時間為50?ms，碰撞能量為30?v。
12、優選的，所述待測樣品包括兩種或多種肉制品。
13、優選的，所述多個純物種樣品包括豬、牛、羊、雞、鴨和馬中的一種或多種。
14、優選的，所述共有多肽篩選包括去除多肽氨基酸序列中非末端含有賴氨酸和/或精氨酸的多肽，及篩選各個物種均檢出的多肽，得到共有多肽。
15、優選的，所述液相色譜串聯質譜的色譜參數包括：色譜柱為hypersil?gold?c18；流動相包括a相和b相，所述a相為甲酸和水，所述a相中甲酸的體積濃度為0.1%，所述b相為甲酸和乙腈，所述b相中甲酸的體積濃度為0.1%；色譜梯度為0~0.2?min，3%~10%?b；0.2~16min，10%~40%?b；16~17?min，40%~80%?b；17~19.5?min，80%?b；19.5~19.6?min，80~3%?b；19.6~25?min，3%?b；流速為0.2?ml/min；
16、所述液相色譜串聯質譜的質譜參數包括：噴霧電壓為3500?v；鞘氣為38?arb；輔氣為15?arb；離子傳輸管溫度為275℃；離子源霧化溫度為380℃；碰撞氣為?1.5?mtorr；q1和q3分辨率均為0.7，正模式。
17、優選的，所述酶解的蛋白酶包括胰蛋白酶。
18、本專利技術還提供了上述技術方案所述的篩選方法篩選得到的定量共有多肽在肉制品中肉原料含量的檢測中的應用。
19、有益效果：
20、本專利技術提供了一種定量共有多肽的篩選方法，本專利技術結合高分辨質譜采集方法和液相色譜串聯質譜驗證的方式獲得多物種的定量共有多肽，該方法流程簡單且易操作，不需要花費較長的優化步驟。定量共有多肽在質譜上具有較高的響應強度，不受物種種類、物種含量及物種其他蛋白/多肽等的影響，可以減小加工生產工藝、樣品處理過程等因素的影響，還可依據其在質譜中的響應情況判斷質譜檢測過程的穩定性等，可作為參照物用于校正物種在多元復雜體系中的含量。
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1.一種定量共有多肽的篩選方法，其特征在于，包括如下步驟：
2.根據權利要求1所述的篩選方法，其特征在于，所述高分辨質譜的色譜條件包括：色譜柱為Hypersil?GOLD?C18；流動相包括A相和B相，所述A相為甲酸和水，所述A相中甲酸的體積濃度為0.1%，所述B相為甲酸和乙腈，所述B相中甲酸的體積濃度為0.1%；色譜梯度為0~0.2?min，3%~10%?B；0.2~16?min，10%~40%?B；16~17?min，40%~80%?B；17~19.5?min，80%?B；19.5~19.6?min，80~3%?B；19.6~25?min，3%?B；流速為0.2?mL/min；
3.根據權利要求1所述的篩選方法，其特征在于，所述待測樣品包括兩種或多種肉制品。
4.根據權利要求1或3所述的篩選方法，其特征在于，所述多個純物種樣品包括豬、牛、羊、雞、鴨和馬中的一種或多種。
5.根據權利要求1或2所述的篩選方法，其特征在于，所述共有多肽篩選包括去除多肽氨基酸序列中非末端含有賴氨酸和/或精氨酸的多肽，及篩選各個物種均檢出的多肽，得到共有
6.根據權利要求1所述的篩選方法，其特征在于，所述液相色譜串聯質譜的色譜參數包括：色譜柱為Hypersil?GOLD?C18；流動相包括A相和B相，所述A相為甲酸和水，所述A相中甲酸的體積濃度為0.1%，所述B相為甲酸和乙腈，所述B相中甲酸的體積濃度為0.1%；色譜梯度為0~0.2?min，3%~10%?B；0.2~16?min，10%~40%?B；16~17?min，40%~80%?B；17~19.5?min，80%B；19.5~19.6?min，80~3%?B；19.6~25?min，3%?B；流速為0.2?mL/min；
7.根據權利要求1所述的篩選方法，其特征在于，所述酶解的蛋白酶包括胰蛋白酶。
8.權利要求1~7任一項所述的篩選方法篩選得到的定量共有多肽在肉制品中肉原料含量的檢測中的應用。
...【技術特征摘要】
1.一種定量共有多肽的篩選方法，其特征在于，包括如下步驟：
2.根據權利要求1所述的篩選方法，其特征在于，所述高分辨質譜的色譜條件包括：色譜柱為hypersil?gold?c18；流動相包括a相和b相，所述a相為甲酸和水，所述a相中甲酸的體積濃度為0.1%，所述b相為甲酸和乙腈，所述b相中甲酸的體積濃度為0.1%；色譜梯度為0~0.2?min，3%~10%?b；0.2~16?min，10%~40%?b；16~17?min，40%~80%?b；17~19.5?min，80%?b；19.5~19.6?min，80~3%?b；19.6~25?min，3%?b；流速為0.2?ml/min；
3.根據權利要求1所述的篩選方法，其特征在于，所述待測樣品包括兩種或多種肉制品。
4.根據權利要求1或3所述的篩選方法，其特征在于，所述多個純物種樣品包括豬、牛、羊、雞、鴨和馬中的一種或多種。
5.根據權利要求1或2所述的篩選方法，其特...
【專利技術屬性】
技術研發人員：趙燕，康超娣，張穎穎，劉夢瑤，董雨馨，趙文濤，李瑩瑩，孔維恒，任南，王宣，張明悅，王守偉，郭文萍，
申請(專利權)人：中國肉類食品綜合研究中心，
類型：發明
國別省市：
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