【技術(shù)實現(xiàn)步驟摘要】
本專利技術(shù)屬于生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域，涉及一種檢測耳聾基因的引物-探針組及其應(yīng)用。
技術(shù)介紹
1、耳聾是最為常見的交流障礙疾病，對個人的生活和社會發(fā)展都有重大影響。約60％的耳聾是由于遺傳因素導(dǎo)致的，其余為環(huán)境因素或環(huán)境因素與遺傳因素共同作用導(dǎo)致的。耳聾按照疾病發(fā)生時間和機制分為先天性耳聾、遲發(fā)性耳聾和藥物性耳聾；先天性耳聾通常是指出生時或者學(xué)語前即罹患耳聾；遲發(fā)性耳聾則是進行性的或需要某些誘導(dǎo)因素誘導(dǎo)才會發(fā)病，比如，大前庭水管綜合癥患者幼時可能表現(xiàn)為聽力正常，但是劇烈運動或者受到意外碰撞后或者感冒噴嚏等都可能會誘發(fā)耳聾發(fā)生；藥物性耳聾最常見的是氨基糖苷類藥物誘發(fā)型耳聾，該類型患者對糖苷類藥物的藥毒性較正常人敏感，使用此類藥物容易引發(fā)藥物性耳聾。據(jù)大規(guī)模耳聾分子流行病學(xué)研究顯示，gjb2、gjb3是我國最常見的致病基因。因此，涵蓋這2種基因的高頻致病位點極具檢測價值。
2、單核苷酸多態(tài)性(single?nucleotide?polymorphism，snp)在全基因組分布廣，密度大，遺傳穩(wěn)定，且可實現(xiàn)自動化檢測。因此，snp標(biāo)記是目前研究較多，有廣闊前景的分子標(biāo)記，其在遺傳圖譜構(gòu)建、關(guān)聯(lián)分析、分子標(biāo)記輔助選擇育種以及種植資源篩選等方面具有重要的意義。對于海量的snp位點，有很多的檢測方法，包括基因芯片技術(shù)、熒光能量轉(zhuǎn)移法、taqman探針技術(shù)和焦磷酸測序技術(shù)等，雖然這些方法能夠高通量分型snp，但它們都需要專門的檢測設(shè)備或復(fù)雜的技術(shù)且費用昂貴。而等位基因特異pcr(as-pcr)彌補了上述缺陷，在簡單的分子實驗室僅僅需要一個電
技術(shù)實現(xiàn)思路
1、本專利技術(shù)旨在提供一種方法簡便，效率高，檢測效果好的耳聾基因檢測試劑盒及其應(yīng)用，該試劑盒能夠有效地降低野生型模板的擴增，提高野生型背景中突變型dna模板的檢出能力。
2、為了實現(xiàn)上述目的，本專利技術(shù)所采用的技術(shù)方案是：
3、一種檢測耳聾基因的引物-探針組，包括：檢測gjb3?538c>t突變的引物-探針組合a，檢測gjb2109g>a突變的引物-探針組合b、檢測gjb2?ivs1+1g>a突變的引物-探針組合c、檢測gjb2?235突變的引物-探針組合d，檢測gjb2?299-300突變的引物-探針組合e和檢測gjb2?176-191突變的引物-探針組合f。
4、在其中一個優(yōu)選的實施例中，檢測gjb3?538c>t突變的引物-探針組合a包括：野生上游引物、野生封閉引物、突變上游引物、下游引物和探針，野生上游引物的序列如seq?idno:1所示，野生封閉引物的序列如seq?id?no:2所示，突變上游引物的序列如seq?id?no:3所示，下游引物的序列如seq?id?no:4所示，探針的序列如seq?id?no:5所示。
5、在其中一個優(yōu)選的實施例中，檢測gjb2?109g>a突變的引物-探針組合b包括：野生上游引物、野生封閉引物、突變上游引物、下游引物和探針，野生上游引物的序列如seq?idno:6所示，野生封閉引物的序列如seq?id?no:7所示，突變上游引物的序列如seq?id?no:8所示，下游引物的序列如seq?id?no:9所示，探針的序列如seq?id?no:10所示。
6、在其中一個優(yōu)選的實施例中，檢測gjb2?ivs1+1g>a突變的引物-探針組合c包括：野生上游引物、野生封閉引物、突變上游引物、下游引物和探針，野生上游引物的序列如seqid?no:11所示，野生封閉引物的序列如seq?id?no:12所示，突變上游引物的序列如seq?idno:13所示，下游引物的序列如seq?id?no:14所示，探針的序列如seq?id?no:15所示。
7、在其中一個優(yōu)選的實施例中，檢測gjb2?235突變的引物-探針組合d包括：野生上游引物、野生封閉引物、突變上游引物、下游引物和探針，野生上游引物的序列如seq?idno:42所示，野生封閉引物的序列如seq?id?no:43所示，突變上游引物的序列如seq?id?no:44所示，下游引物的序列如seq?id?no:45所示，探針的序列如seq?id?no:46所示。
8、在其中一個優(yōu)選的實施例中，檢測gjb2?299-300突變的引物-探針組合e包括：野生上游引物、野生封閉引物、突變上游引物、下游引物和探針，野生上游引物的序列如seqid?no:47所示，野生封閉引物的序列如seq?id?no:48所示，突變上游引物的序列如seq?idno:49所示，下游引物的序列如seq?id?no:50所示，探針的序列如seq?id?no:51所示。
9、在其中一個優(yōu)選的實施例中，檢測gjb2?176-191突變的引物-探針組合f包括：野生上游引物、野生封閉引物、突變上游引物、下游引物和探針，野生上游引物的序列如seqid?no:52所示，野生封閉引物的序列如seq?id?no:53所示，突變上游引物的序列如seq?idno:54所示，下游引物的序列如seq?id?no:55所示，探針的序列如seq?id?no:56所示。
10、在其中一個優(yōu)選的實施例中，檢測耳聾基因的引物-探針組還包括內(nèi)參引物-探針組。
11、在其中一個優(yōu)選的實施例中，內(nèi)參引物-探針組的序列包括：內(nèi)參上游引物、內(nèi)參下游引物和內(nèi)參探針，內(nèi)參上游引物的序列如seq?id?no:16所示，內(nèi)參下游引物的序列如seq?id?no:17所示，內(nèi)參探針的序列如seq?id?no:18所示。
12、本專利技術(shù)還要求保護所述檢測耳聾基因的引物-探針組在制備檢測耳聾基因的試劑中的應(yīng)用。
13、一種耳聾基因檢測試劑盒，包括引物-探針組a-g中的任意一組或多組。
14、在其中一個優(yōu)選的實施例中，所述試劑盒中還包括：陽性質(zhì)控和陰性質(zhì)控。
15、在其中一個優(yōu)選的實施例中，所述陰性質(zhì)控為如seq?id?no:30、seq?id?no:32、seq?id?no:34、seq?id?no:36、seq?id?no:38、seq?id?no:40所示的野生型質(zhì)粒。
16、在其中一個優(yōu)選的實施例中，所述陽性質(zhì)控為如seq?id?no:31、seq?id?no:33、seq?id?no:35、seq?id?no:37、seq?id?no:39、seq?id?no:41所示的突變型質(zhì)粒。
17、在其中一個優(yōu)選的實施例中，所述試劑盒中，引物-探針組a-g預(yù)先混合于一個pcr反應(yīng)管內(nèi)。
18、在其中一個本文檔來自技高網(wǎng)...
【技術(shù)保護點】
1.一種檢測耳聾基因的引物-探針組，其特征在于，包括：檢測?GJB3?538C>T突變的引物-探針組合A，檢測?GJB2?109G>A突變的引物-探針組合B、檢測?GJB2?IVS1+1G>A突變的引物-探針組合C、檢測GJB2?235突變的引物-探針組合D，檢測GJB2?299-300突變的引物-探針組合E和檢測GJB2?176-191突變的引物-探針組合F。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測耳聾基因的引物-探針組，其特征在于，所述檢測?GJB3538C>T突變的引物-探針組合A包括：野生上游引物、野生封閉引物、突變上游引物、下游引物和探針，野生上游引物的序列如SEQ?ID?NO:1所示，野生封閉引物的序列如SEQ?ID?NO:2所示，突變上游引物的序列如SEQ?ID?NO:3所示，下游引物的序列如SEQ?ID?NO:4所示，探針的序列如SEQ?ID?NO:5所示。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測耳聾基因的引物-探針組，其特征在于，檢測?GJB2?109G>A突變的引物-探針組合B包括：野生上游引物、野生封閉引物、突變上游引物、下
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測耳聾基因的引物-探針組，其特征在于，檢測?GJB2?IVS1+1G>A突變的引物-探針組合C包括：野生上游引物、野生封閉引物、突變上游引物、下游引物和探針，野生上游引物的序列如SEQ?ID?NO:11所示，野生封閉引物的序列如SEQ?ID?NO:12所示，突變上游引物的序列如SEQ?ID?NO:13所示，下游引物的序列如SEQ?ID?NO:14所示，探針的序列如SEQ?ID?NO:15所示。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測耳聾基因的引物-探針組，其特征在于，檢測GJB2?235突變的引物-探針組合D包括：野生上游引物、野生封閉引物、突變上游引物、下游引物和探針，野生上游引物的序列如SEQ?ID?NO:42所示，野生封閉引物的序列如SEQ?ID?NO:43所示，突變上游引物的序列如SEQ?ID?NO:44所示，下游引物的序列如SEQ?ID?NO:45所示，探針的序列如SEQ?ID?NO:46所示。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測耳聾基因的引物-探針組，其特征在于，檢測GJB2?299-300突變的引物-探針組合E包括：野生上游引物、野生封閉引物、突變上游引物、下游引物和探針，野生上游引物的序列如SEQ?ID?NO:47所示，野生封閉引物的序列如SEQ?ID?NO:48所示，突變上游引物的序列如SEQ?ID?NO:49所示，下游引物的序列如SEQ?ID?NO:50所示，探針的序列如SEQ?ID?NO:51所示。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測耳聾基因的引物-探針組，其特征在于，檢測GJB2?176-191突變的引物-探針組合F包括：野生上游引物、野生封閉引物、突變上游引物、下游引物和探針，野生上游引物的序列如SEQ?ID?NO:52所示，野生封閉引物的序列如SEQ?ID?NO:53所示，突變上游引物的序列如SEQ?ID?NO:54所示，下游引物的序列如SEQ?ID?NO:55所示，探針的序列如SEQ?ID?NO:56所示。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測耳聾基因的引物-探針組，其特征在于，檢測耳聾基因的引物-探針組還包括內(nèi)參引物-探針組；優(yōu)選的，內(nèi)參引物-探針組的序列包括：內(nèi)參上游引物、內(nèi)參下游引物和內(nèi)參探針，內(nèi)參上游引物的序列如SEQ?ID?NO:16所示，內(nèi)參下游引物的序列如SEQ?ID?NO:17所示，內(nèi)參探針的序列如SEQ?ID?NO:18所示。
9.根據(jù)權(quán)利要求1-8任一項所述的檢測耳聾基因的引物-探針組在制備檢測耳聾基因的試劑中的應(yīng)用。
10.一種耳聾基因檢測試劑盒，其特征在于，包括引物-探針組A-G中的任意一組或多組。
11.根據(jù)權(quán)利要求10所述的耳聾基因檢測試劑盒，其特征在于，所述試劑盒中還包括：陽性質(zhì)控和陰性質(zhì)控；優(yōu)選的，所述陰性質(zhì)控為如SEQ?ID?NO:30、SEQ?ID?NO:32、SEQ?IDNO:34、SEQ?ID?NO:36、SEQ?ID?NO:38、SEQ?ID?NO:40所示的野生型質(zhì)粒；所述陽性質(zhì)控為如SEQ?ID?NO:31、SEQ?ID?NO:33、SEQ?ID?NO:35、SEQ?ID?NO:37、SEQ?ID?NO:39、SEQ?ID?NO:41...
【技術(shù)特征摘要】
1.一種檢測耳聾基因的引物-探針組，其特征在于，包括：檢測?gjb3?538c>t突變的引物-探針組合a，檢測?gjb2?109g>a突變的引物-探針組合b、檢測?gjb2?ivs1+1g>a突變的引物-探針組合c、檢測gjb2?235突變的引物-探針組合d，檢測gjb2?299-300突變的引物-探針組合e和檢測gjb2?176-191突變的引物-探針組合f。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測耳聾基因的引物-探針組，其特征在于，所述檢測?gjb3538c>t突變的引物-探針組合a包括：野生上游引物、野生封閉引物、突變上游引物、下游引物和探針，野生上游引物的序列如seq?id?no:1所示，野生封閉引物的序列如seq?id?no:2所示，突變上游引物的序列如seq?id?no:3所示，下游引物的序列如seq?id?no:4所示，探針的序列如seq?id?no:5所示。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測耳聾基因的引物-探針組，其特征在于，檢測?gjb2?109g>a突變的引物-探針組合b包括：野生上游引物、野生封閉引物、突變上游引物、下游引物和探針，野生上游引物的序列如seq?id?no:6所示，野生封閉引物的序列如seq?id?no:7所示，突變上游引物的序列如seq?id?no:8所示，下游引物的序列如seq?id?no:9所示，探針的序列如seq?id?no:10所示。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測耳聾基因的引物-探針組，其特征在于，檢測?gjb2?ivs1+1g>a突變的引物-探針組合c包括：野生上游引物、野生封閉引物、突變上游引物、下游引物和探針，野生上游引物的序列如seq?id?no:11所示，野生封閉引物的序列如seq?id?no:12所示，突變上游引物的序列如seq?id?no:13所示，下游引物的序列如seq?id?no:14所示，探針的序列如seq?id?no:15所示。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測耳聾基因的引物-探針組，其特征在于，檢測gjb2?235突變的引物-探針組合d包括：野生上游引物、野生封閉引物、突變上游引物、下游引物和探針，野生上游引物的序列如seq?id?no:42所示，野生封閉引物的序列如seq?id?no:43所示，突變上游引物的序列如seq?id?no:4...
【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：陳杉莎，唐先友，付亞成，
申請(專利權(quán))人：可孚醫(yī)療科技股份有限公司，
類型：發(fā)明
國別省市：
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