【技術實現步驟摘要】
本專利技術屬于中藥成分分析，尤其涉及一種同時測定防己黃芪湯中低含量活性化學成分的方法。
技術介紹
1、防己黃芪湯由粉防己、黃芪、白術及炙甘草四味藥組成，具有益氣祛濕、健脾利水的功效，是中醫臨床益氣利水的代表方。因為其療效顯著且臨床應用安全性良好，目前被廣泛應用于治療腎病綜合征、各類型水腫以及類風濕性關節炎等。現有技術中，關于防己黃芪湯化學成分的研究還十分有限，無論在深度與廣度上均不夠全面。防己黃芪湯的化學組成豐富且復雜，化合物分屬于不同的基本結構類別，傳統的檢測技術如hplc-dad、uv、hplc-elsd等由于檢測器的局限性，存在靈敏度低、運行時間長、無法對不同類別化學結構的成分進行同時含量測定等弊端，尤其無法對于方劑內一些低豐度小含量的成分實現準確定量。大量基礎研究表明，中藥成分的低豐度并不等同于低效能，但由于檢測手段的無力而不能對一些含量低的活性組分進行準確分析測定，無疑會直接影響中藥復方的質量控制，無法保障其臨床用藥的安全有效。
2、毛蕊異黃酮、美迪紫檀素、芒柄花素以及白術內酯ⅱ4種成分被大量現代藥效學文獻報道具有多種活性和藥用價值。但是，截止目前，受到現有分析方法靈敏度不足的技術限制，仍無法實現防己黃芪湯中對于以上4種活性成分的準確含量測定。
3、因此，如何提供一種檢測防己黃芪湯毛蕊異黃酮、美迪紫檀素、芒柄花素以及白術內酯ⅱ的含量的方法是本領域技術人員亟需解決的技術問題。
技術實現思路
1、為解決上述技術問題，本專利技術提出了一種同時測定防己黃芪
2、為實現上述目的，本專利技術提供了以下技術方案：
3、一種同時測定防己黃芪湯中低含量活性化學成分的方法，包括以下步驟：
4、將防己黃芪湯的原料用水煎煮后，再利用甲醇溶液超聲提取，得到供試品溶液，再采用uhplc-ms/ms法分別精密吸取混合對照品溶液和供試品溶液注入分析儀器進行測定；
5、所述uhplc-ms/ms法中色譜的條件為：
6、c18agilentbds色譜柱(2.1mm×50mm,1.8μm)；
7、流速：0.3ml/min；
8、柱溫：40℃；
9、進樣量：3μl；
10、梯度洗脫條件：流動相為甲酸和四氫呋喃的水溶液與甲醇的混合物，0～5min，甲醇的體積分數從10％線性增加至85％，甲酸和四氫呋喃的水溶液的體積分數從90％線性減少至15％，5～6min，甲醇的體積分數保持在85％，甲酸和四氫呋喃的水溶液的體積分數保持在15％，6～7min，甲醇的體積分數線性減少至10％，甲酸和四氫呋喃的水溶液的體積分數線性增加至90％，7～8min，甲醇的體積分數保持在10％，甲酸和四氫呋喃的水溶液的體積分數保持在90％。
11、優選的，所述供試品溶液的制備方法具體包括以下步驟：
12、精密稱取粉防己6g、黃芪7.5g、白術4.5g、炙甘草3g置于500ml圓底燒瓶中，先加210ml的水，浸泡30min，武火煮沸后，利用文火保持微沸狀態煎煮30min，然后以四層紗布濾出藥液，所得藥渣再加168ml水武火煮沸后，繼續利用文火保持微沸狀態煎煮30min，然后利用四層紗布濾出藥液，合并兩次藥液，并加水定容至500ml，精密移取藥液2ml置于50ml量瓶中，加60％甲醇溶液15ml，超聲15min，放冷，用60％甲醇溶液稀釋至刻度，13000r/min離心8min，吸取上清并用0.22μm微孔濾膜過濾，得到所述供試品溶液。
13、優選的，所述低含量活性化學成分為毛蕊異黃酮、美迪紫檀素、芒柄花素和白術內酯ⅱ。
14、優選的，所述甲醇溶液的濃度為60％。
15、優選的，所述混合對照品溶液為毛蕊異黃酮、美迪紫檀素、芒柄花素和白術內酯ⅱ溶解于60％甲醇溶液后得到；
16、其中，毛蕊異黃酮的濃度為112.200ng/ml，美迪紫檀素的濃度為41.650ng/ml，芒柄花素的濃度為41.400ng/ml，白術內酯ⅱ的濃度為15.675ng/ml。
17、優選的，所述甲酸和四氫呋喃的水溶液中，甲酸的體積分數為0.1％，四氫呋喃的體積分數為1％。
18、優選的，所述uhplc-ms/ms法中質譜的掃描方式為多反應監測模式，分別在esi+和esi-兩種模式下進行質譜分析。
19、優選的，所述質譜的條件為：
20、離子源溫度：500℃；
21、q1/q3(m/z)：285.1/269.9；269.1/254.1；267.0/252.1；233.2/159.1；
22、去簇電壓(dp)：7.41；-135.07；-122.47；136.43v；
23、碰撞能量(ce)：30.92；-22.98；-27.12；28.60ev；
24、霧化氣：60psi；輔助加熱氣：60psi；氣簾氣：40psi；
25、氮氣作為噴霧輔助氣體。
26、與現有技術相比，本專利技術具有如下優點和技術效果：
27、利用本專利技術提供的檢測方法，防己黃芪湯中4個低含量化學成分在甲醇-(0.1％甲酸+1％四氫呋喃)水系統梯度洗脫條件下，于8min內即可達到有效分離，實現各個成分的含量準確精密的分析測定，方法準確度好，靈敏度極高。本專利技術中特定固定相與流動相組成的篩選與確定，是成功對防己黃芪湯中4個不同類型低含量活性化合物進行同時定量分析的關鍵因素。相比于傳統的紫外檢測器，本專利技術提供的方法能夠在準確測定成分含量的同時，精確給出待測物母離子與子離子的質量數信息，且不同于保留時間，質量數信息作為定性鑒別的依據更加穩定、可靠、專屬性高。
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1.一種同時測定防己黃芪湯中低含量活性化學成分的方法，其特征在于，包括以下步驟：
2.根據權利要求1所述的一種同時測定防己黃芪湯中低含量活性化學成分的方法，其特征在于，所述低含量活性化學成分為毛蕊異黃酮、美迪紫檀素、芒柄花素和白術內酯Ⅱ。
3.根據權利要求1所述的一種同時測定防己黃芪湯中低含量活性化學成分的方法，其特征在于，所述甲醇溶液的濃度為60％。
4.根據權利要求1所述的一種同時測定防己黃芪湯中低含量活性化學成分的方法，其特征在于，所述混合對照品溶液為毛蕊異黃酮、美迪紫檀素、芒柄花素和白術內酯Ⅱ溶解于60％甲醇溶液后得到；
5.根據權利要求1所述的一種同時測定防己黃芪湯中低含量活性化學成分的方法，其特征在于，所述甲酸和四氫呋喃的水溶液中，甲酸的體積分數為0.1％，四氫呋喃的體積分數為1％。
6.根據權利要求1所述的一種同時測定防己黃芪湯中低含量活性化學成分的方法，其特征在于，所述UHPLC-MS/MS法中質譜的掃描方式為多反應監測模式，分別在ESI+和ESI-兩種模式下進行質譜分析。
7.根據權利要求6
...【技術特征摘要】
1.一種同時測定防己黃芪湯中低含量活性化學成分的方法，其特征在于，包括以下步驟：
2.根據權利要求1所述的一種同時測定防己黃芪湯中低含量活性化學成分的方法，其特征在于，所述低含量活性化學成分為毛蕊異黃酮、美迪紫檀素、芒柄花素和白術內酯ⅱ。
3.根據權利要求1所述的一種同時測定防己黃芪湯中低含量活性化學成分的方法，其特征在于，所述甲醇溶液的濃度為60％。
4.根據權利要求1所述的一種同時測定防己黃芪湯中低含量活性化學成分的方法，其特征在于，所述混合對照品溶液為毛蕊異黃酮、美迪紫檀素、芒柄花素和白術內酯...
【專利技術屬性】
技術研發人員：劉曉，薛芳芳，朱慧，謝林彤，張霞，
申請(專利權)人：南京中醫藥大學，
類型：發明
國別省市：
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