【技術(shù)實現(xiàn)步驟摘要】
本專利技術(shù)涉及血藥檢測，尤其涉及高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜檢測人血漿中阿伐曲泊帕濃度的方法。
技術(shù)介紹
1、原發(fā)性免疫性血小板減少(itp)是一種常見的以血小板減少為特征的自身免疫性疾病，以血小板的破壞增多和生成減少為特點。腫瘤化療所致血小板減少癥(cit)是指抗腫瘤化療藥物對骨髓巨核系細胞產(chǎn)生抑制作用，導(dǎo)致血小板生成不足和過度破壞，致使外周血中血小板計數(shù)低于正常值。上述均為臨床病人血小板減少的原因。促血小板生成素受體(tpo)是人體內(nèi)調(diào)節(jié)血小板生成的主要物質(zhì)，其作用是通過促進巨核細胞血小板生成實現(xiàn)的，其受體(tpo-r)在干細胞、產(chǎn)板巨核細胞、成熟的血小板表面均有表達。tpo-r激動劑的出現(xiàn)為血小板減少癥的治療帶來了革命，是目前itp臨床二線治療首選以及cit治療常用藥物。
2、目前，阿伐曲波帕廣泛應(yīng)用于臨床的tpo-ra藥物，盡管臨床前研究和臨床研究都顯示了這些藥物的的良好療效，但目前仍缺乏藥物濃度監(jiān)測及具體的個性化指導(dǎo)治療方案。
3、高效液相色譜法(high?performance?liquid?chromatography，hplc)是目前臨床上用于監(jiān)測血藥濃度常用的、最有前景的方法，在現(xiàn)有文獻中，采用hplc法監(jiān)測抗癲癇藥物的血藥濃度在所有方法中達到80％以上。這種方法檢測靈敏度、精密度高，專一性強。并且hplc法應(yīng)用范圍廣，可用于藥物研究的很多領(lǐng)域，目前已越來越普及。其原理為流動相通過高壓泵進入系統(tǒng)，樣品溶液通過注射器進入流動相，流動相加載到色譜柱(固定相)中。由于樣品溶液中各組分在兩相中的分配系
4、液-質(zhì)聯(lián)用技術(shù)的發(fā)展為樣品分析提供了廣闊的空間，質(zhì)譜的聯(lián)用為色譜的進一步發(fā)展提供了更為靈敏、準(zhǔn)確的技術(shù)支持，在很大程度上擴展了液相色譜的應(yīng)用范圍，如監(jiān)測血清中替米沙坦的濃度時，單用液相色譜法監(jiān)測時，低檢測限為20μg/l，但當(dāng)應(yīng)用液-質(zhì)聯(lián)用進行監(jiān)測時，可將靈敏度提高到0.5μg/l。
5、因此，有必要開發(fā)液-質(zhì)聯(lián)用技術(shù)檢測血漿中阿伐曲泊帕濃度的方法，以便于合理調(diào)整藥物使用劑量，為患者提供更為安全和有效的個體化用藥方案。
技術(shù)實現(xiàn)思路
1、本專利技術(shù)提供了高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜檢測人血漿中阿伐曲泊帕濃度的方法，以實現(xiàn)藥物濃度監(jiān)測，合理調(diào)整藥物使用劑量，為患者提供更為安全和有效的個體化用藥方案。
2、為實現(xiàn)上述目的，本專利技術(shù)的方案如下：
3、本專利技術(shù)提出，高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜檢測人血漿中阿伐曲泊帕濃度的方法，包括如下步驟：
4、s1.向血漿樣本中加入內(nèi)標(biāo)、沉淀劑后混勻離心取上清；
5、s2.取上清液進行高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜檢測，結(jié)合標(biāo)準(zhǔn)曲線方程分析計算得到人血漿中阿伐曲泊帕濃度；
6、所述高效液相色譜分析條件為：venusil?c18?plus色譜柱，規(guī)格：2.1mm×100mm，3.0μm；0.1％v/v甲酸水溶液為流動相a，乙腈為流動相b，總流速0.45ml/min，梯度洗脫；進樣器溫度4-10℃；柱溫30-40℃；進樣體積10μl；
7、所述質(zhì)譜條件為：電噴霧電離正離子模式；掃描方式為多反應(yīng)監(jiān)測；阿伐曲泊帕的監(jiān)測離子對為m/z?649.20→267.10，內(nèi)標(biāo)的監(jiān)測離子對為m/z659.40→267.10。
8、進一步地，步驟s1中，所述內(nèi)標(biāo)為阿伐曲泊帕-d8。
9、優(yōu)選地，所述內(nèi)標(biāo)所用的溶劑為所述內(nèi)標(biāo)所用的溶劑為dmso、甲醇和水；所述內(nèi)標(biāo)濃度為1×10?-6g/ml。
10、進一步地，步驟s1中，所述沉淀劑為甲醇或乙腈。
11、進一步地，所述標(biāo)準(zhǔn)曲線方程制作過程為，以阿伐曲泊帕校準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)，阿伐曲泊帕與內(nèi)標(biāo)的峰面積比為縱坐標(biāo)，回歸制得相應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)曲線方程；所述血漿中阿伐曲泊帕的濃度分析計算過程為，將阿伐曲泊帕峰面積與相應(yīng)內(nèi)標(biāo)峰面積的比值代入擬合的標(biāo)準(zhǔn)曲線方程中，計算得到待測血漿中阿伐曲泊帕的濃度。
12、進一步地，步驟s2中，所述梯度洗脫條件如下：
13、
14、進一步地，步驟s2中，所述質(zhì)譜條件包括：霧化器流量3l/min，干燥氣流量5l/min，接口電壓3kv，接口電流9ua，接口溫度300℃，dl溫度150℃，加熱塊溫度為300℃，轉(zhuǎn)換打拿極電壓為10kv，檢測器電壓為1.75kv，cid氣壓為270kpa。
15、進一步地，所述血漿樣本為新鮮血漿或凍融血漿。
16、與現(xiàn)有技術(shù)相比，本專利技術(shù)具備以下有益效果：
17、本專利技術(shù)所述檢測人血漿中阿伐曲泊帕濃度的方法，通過特異性、準(zhǔn)確度、精密度、基質(zhì)效應(yīng)、稀釋可靠性、殘留、穩(wěn)定性等方法學(xué)驗證，可直接運用于臨床患者阿伐曲泊帕血漿樣本的檢測分析及藥代動力學(xué)研究，以便于合理調(diào)整藥物使用劑量，為患者提供更為安全和有效的個體化用藥方案。
18、本專利技術(shù)所述檢測人血漿中阿伐曲泊帕濃度的方法相比高效液相色譜檢測時間大幅縮短，更加適用于臨床檢驗；采用內(nèi)標(biāo)法定量，準(zhǔn)確度和穩(wěn)定性更高。所述檢測方法對樣本前處理操作簡單，無需昂貴的試劑，血樣用量少，成本低，適合常規(guī)藥物濃度監(jiān)測及相關(guān)臨床研究，具有顯著的應(yīng)用前景。
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1.高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜檢測人血漿中阿伐曲泊帕濃度的方法，其特征在于，包括如下步驟：
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測人血漿中阿伐曲泊帕濃度的方法，其特征在于，步驟S1中，所述內(nèi)標(biāo)為阿伐曲泊帕-D8。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的檢測人血漿中阿伐曲泊帕濃度的方法，其特征在于，所述內(nèi)標(biāo)所用的溶劑為DMSO、甲醇和水；所述內(nèi)標(biāo)濃度為1×10-6g/mL。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測人血漿中阿伐曲泊帕濃度的方法，其特征在于，步驟S1中，所述沉淀劑為甲醇或乙腈。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測人血漿中阿伐曲泊帕濃度的方法，其特征在于，所述標(biāo)準(zhǔn)曲線方程制作過程為，以阿伐曲泊帕校準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)，阿伐曲泊帕與內(nèi)標(biāo)的峰面積比為縱坐標(biāo)，回歸制得相應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)曲線方程；所述血漿中阿伐曲泊帕的濃度分析計算過程為，將阿伐曲泊帕峰面積與相應(yīng)內(nèi)標(biāo)峰面積的比值代入擬合的標(biāo)準(zhǔn)曲線方程中，計算得到待測血漿中阿伐曲泊帕的濃度。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測人血漿中阿伐曲泊帕濃度的方法，其特征在于，步驟S2中，所述梯度洗脫條件如下：
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測人血漿中阿伐曲泊帕濃度的方法，其特征在于，所述血漿樣本為新鮮血漿或凍融血漿。
...【技術(shù)特征摘要】
1.高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜檢測人血漿中阿伐曲泊帕濃度的方法，其特征在于，包括如下步驟：
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測人血漿中阿伐曲泊帕濃度的方法，其特征在于，步驟s1中，所述內(nèi)標(biāo)為阿伐曲泊帕-d8。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的檢測人血漿中阿伐曲泊帕濃度的方法，其特征在于，所述內(nèi)標(biāo)所用的溶劑為dmso、甲醇和水；所述內(nèi)標(biāo)濃度為1×10-6g/ml。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測人血漿中阿伐曲泊帕濃度的方法，其特征在于，步驟s1中，所述沉淀劑為甲醇或乙腈。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測人血漿中阿伐曲泊帕濃度的方法，其特征在于，所述標(biāo)準(zhǔn)曲線方程制作過程為，以阿伐曲泊帕校準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)，阿伐曲泊帕與內(nèi)標(biāo)的峰面積比為縱坐標(biāo)，回歸制得相應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)曲線方程；所述血漿...
【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：梅恒，束金輝，徐敏，周芬，
申請(專利權(quán))人：華中科技大學(xué)同濟醫(yī)學(xué)院附屬協(xié)和醫(yī)院，
類型：發(fā)明
國別省市：
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