【技術(shù)實現(xiàn)步驟摘要】
本專利技術(shù)涉及抗體領(lǐng)域，更具體地，涉及與人cd22抗原蛋白和細胞膜表面天然狀態(tài)的cd22抗原特異性結(jié)合的全人源抗體或其單域抗體或片段。
技術(shù)介紹
1、目前，全球已有九款car-t藥物獲批上市。cd19作為car-t治療的熱門靶點之一，適應癥是b淋巴細胞腫瘤。由于其療效確定，副作用可控，在目前已上市和在研中的產(chǎn)品中是最多的。以cd19為靶點的car-t療法更是業(yè)界公認的b細胞惡性腫瘤的完美解決方案。但隨著臨床研究的深入，越來越多的證據(jù)表明，隨著時間的延長，大約50%的病人會復發(fā)。復發(fā)的原因很多，主要分為cd19抗原陰性的復發(fā)和陽性的復發(fā)。一些原本表達cd19的癌細胞，會在car-t療法的壓力下，轉(zhuǎn)而表達cd22蛋白。
2、cd22，又名siglec-2，是siglec家族的凝集素，由7個類似于igg的胞外結(jié)構(gòu)域組成。cd22是b細胞抗原家族的另一個成員，其組織分布類似于cd19。cd22在b細胞表面的表達起始于pre-b細胞階段，并持續(xù)地表達在成熟的b細胞上，cd22在漿細胞上沒有表達。cd22蛋白是分子量為140?kda的i型跨膜蛋白，且cd22也是唾液酸結(jié)合免疫球蛋白樣凝集素（siglecs）家族的一個成員，同時也是b細胞表面抑制性輔助受體之一，它與b細胞的發(fā)展、分化和功能密切相關(guān)。cd22限制性地表達于成熟b細胞和大多數(shù)惡性b淋巴瘤細胞表面，使其成為了自身免疫疾病和b細胞惡性腫瘤治療的熱門靶點之一，目前，以cd22為靶點的免疫治療藥物種類有單克隆抗體藥物，抗體偶聯(lián)物（adc）以及car-t療法。
3、
4、鑒于cd22在b細胞惡性腫瘤中作為治療靶點的有效性，本領(lǐng)域亟待開發(fā)新的不同形式的cd22特異性結(jié)合分子。
技術(shù)實現(xiàn)思路
1、本專利技術(shù)的目的就是提供一種靶向cd22的全人源抗體及其應用。
2、在本專利技術(shù)的第一方面，提供了一種抗cd22的單域抗體或其抗原結(jié)合片段，所述單域抗體或其抗原結(jié)合片段包括重鏈可變區(qū)，所述重鏈可變區(qū)包括：
3、如seq?id?no:?1所示的hcdr1；
4、如seq?id?no:?2所示的hcdr2；和
5、如seq?id?no:?3所示的hcdr3；
6、或者，所述抗體或其抗原結(jié)合片段包括所述cdr序列的變體，其中與所述cdr序列相比，所述變體具有至少90%的序列一致性，或在cdr序列上共包含至少1個且不超過10，或不超過5、4、3、2或1個氨基酸改變。
7、在另一優(yōu)選例中，上述氨基酸序列中任意一種氨基酸序列還包括任選地經(jīng)過添加、缺失、修飾和/或取代至少一個（如1-3個）氨基酸并能保留與cd22特異性結(jié)合能力的衍生序列。
8、在另一優(yōu)選例中，所述重鏈可變區(qū)的氨基酸序列如seq?id?no:?5所示或與其有至少90%序列一致性。
9、在另一優(yōu)選例中，所述重鏈可變區(qū)的氨基酸序列如seq?id?no:?5所示。
10、在另一優(yōu)選例中，所述抗體或其抗原結(jié)合片段還包括框架區(qū)fr。
11、在另一優(yōu)選例中，所述cdr1、cdr2和cdr3由框架區(qū)fr1、fr2、fr3和fr4所隔開。
12、在另一優(yōu)選例中，所述抗體或其抗原結(jié)合片段包括單體、二價抗體、和/或多價抗體。
13、在另一優(yōu)選例中，所述二價抗體是雙特異性抗體。
14、在另一優(yōu)選例中，所述多價抗體是多特異性抗體。
15、在另一優(yōu)選例中，所述抗原結(jié)合片段包括單域片段。
16、在另一優(yōu)選例中，所述抗體或其抗原結(jié)合片段包含重鏈恒定區(qū)。
17、在另一優(yōu)選例中，所述的重鏈恒定區(qū)選自人igg1、igg2、igg3或igg4的重鏈恒定區(qū)。
18、在本專利技術(shù)的第二方面，提供了一種重組蛋白，所述重組蛋白具有：
19、(i)?如本專利技術(shù)第一方面所述的單域抗體或其抗原結(jié)合片段；和
20、(ii)?任選的協(xié)助表達和/或純化的標簽序列。
21、在另一優(yōu)選例中，所述標簽序列包括fc標簽、ha標簽、gggs序列、flag標簽、myc標簽、6his標簽，或其組合。
22、在另一優(yōu)選例中，所述重組蛋白包括融合蛋白。
23、在另一優(yōu)選例中，所述重組蛋白為單體、二聚體，或多聚體。
24、在本專利技術(shù)的第三方面，提供了一種分離的核酸分子，所述核酸分子編碼如本專利技術(shù)第一方面所述的單域抗體或其抗原結(jié)合片段，或如本專利技術(shù)第二方面所述的重組蛋白。
25、在另一優(yōu)選例中，所述核酸分子選自rna（如mrna）、dna（如cdna）。
26、在另一優(yōu)選例中，所述核酸分子包括seq?id?no:?4所示的核苷酸序列。
27、在本專利技術(shù)的第四方面，提供了一種表達載體，所述表達載體含有如本專利技術(shù)第三方面所述的核酸分子。
28、在另一優(yōu)選例中，所述表達載體選自下組：dna、rna、病毒載體、質(zhì)粒、轉(zhuǎn)座子、其他基因轉(zhuǎn)移系統(tǒng)，或其組合。
29、在另一優(yōu)選例中，所述表達載體包括病毒載體，如慢病毒、腺病毒、aav病毒、逆轉(zhuǎn)錄病毒，或其組合。
30、在另一優(yōu)選例中，所述表達載體為質(zhì)粒、逆轉(zhuǎn)錄病毒和慢病毒載體。
31、在另一優(yōu)選例中，所述表達載體選自下組：ptomo慢病毒載體、plenti、plvth、pljm1、phcmv、plbs.cag、phr、plv等。
32、在另一優(yōu)選例中，所述表達載體中還包括選自下組的元件：啟動子、轉(zhuǎn)錄增強元件wpre、長末端重復序列l(wèi)tr等。
33、在本專利技術(shù)的第五方面，提供了一種宿主細胞，所述宿主細胞含有如本專利技術(shù)第四方面所述的表達載體，或其基因組中整合有如本專利技術(shù)第三方面所述的核酸分子。
34、在另一優(yōu)選例中，所述宿主細胞包括原核細胞或真核細胞。
35、在另一優(yōu)選例中，所述宿主細胞選自下組：大腸桿菌、酵母細胞、哺乳動物細胞。
36、在本專利技術(shù)的第六方面，提供了一種嵌合抗原受體car，所述car的抗原結(jié)合區(qū)特異性結(jié)合cd22，并且所述抗原結(jié)合區(qū)包括如本專利技術(shù)第一方面所述的單域抗體或其抗原結(jié)合片段。
37、在另一優(yōu)選例中，所述抗原結(jié)合區(qū)包含如seq?id?no:?5所示或與其有至少90%序列一致性的氨基酸序列。
38、在另一優(yōu)選例中，所述抗原結(jié)合區(qū)包含如seq?id?no:?5所示的氨基酸序列。
39、在另一優(yōu)選例中，所述car還包括信號肽。
40、在另一優(yōu)選例中，所述car還包括其他的外源蛋白。
41、在另一優(yōu)選例中，所述car具本文檔來自技高網(wǎng)...
【技術(shù)保護點】
1.一種抗CD22的單域抗體或其抗原結(jié)合片段，其特征在于，所述單域抗體或其抗原結(jié)合片段包括重鏈可變區(qū)，所述重鏈可變區(qū)包括：
2.?如權(quán)利要求1所述的單域抗體或其抗原結(jié)合片段，其特征在于，所述重鏈可變區(qū)的氨基酸序列如SEQ?ID?NO:?5所示。
3.?一種重組蛋白，其特征在于，所述重組蛋白具有：
4.一種分離的核酸分子，其特征在于，所述核酸分子編碼如權(quán)利要求1所述的單域抗體或其抗原結(jié)合片段，或如權(quán)利要求3所述的重組蛋白。
5.一種表達載體，其特征在于，所述表達載體含有如權(quán)利要求4所述的核酸分子。
6.一種宿主細胞，其特征在于，所述宿主細胞含有如權(quán)利要求5所述的表達載體，或其基因組中整合有如權(quán)利要求4所述的核酸分子。
7.一種嵌合抗原受體CAR，其特征在于，所述CAR的抗原結(jié)合區(qū)特異性結(jié)合CD22，并且所述抗原結(jié)合區(qū)包括如權(quán)利要求1所述的單域抗體或其抗原結(jié)合片段。
8.一種工程化免疫細胞，其特征在于，所述工程化免疫細胞表達外源的如權(quán)利要求7所述的CAR。
9.一種產(chǎn)生靶向CD22的單域抗
10.?一種免疫偶聯(lián)物，其特征在于，所述免疫偶聯(lián)物含有：
11.?一種藥物組合物，其特征在于，所述藥物組合物含有：
12.一種體外檢測樣品中CD22蛋白或其片段的方法，其特征在于，所述方法包括步驟：
13.?一種試劑盒，其特征在于，所述試劑盒包括：
...【技術(shù)特征摘要】
1.一種抗cd22的單域抗體或其抗原結(jié)合片段，其特征在于，所述單域抗體或其抗原結(jié)合片段包括重鏈可變區(qū)，所述重鏈可變區(qū)包括：
2.?如權(quán)利要求1所述的單域抗體或其抗原結(jié)合片段，其特征在于，所述重鏈可變區(qū)的氨基酸序列如seq?id?no:?5所示。
3.?一種重組蛋白，其特征在于，所述重組蛋白具有：
4.一種分離的核酸分子，其特征在于，所述核酸分子編碼如權(quán)利要求1所述的單域抗體或其抗原結(jié)合片段，或如權(quán)利要求3所述的重組蛋白。
5.一種表達載體，其特征在于，所述表達載體含有如權(quán)利要求4所述的核酸分子。
6.一種宿主細胞，其特征在于，所述宿主細胞含有如權(quán)利要求5所述的表達載體，或其基因組中整合有如權(quán)利要求4所述...
【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：魏巧娥，劉建偉，賈向印，謝萌，
申請(專利權(quán))人：上海馴鹿生物技術(shù)有限公司，
類型：發(fā)明
國別省市：
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