本發(fā)明專利技術(shù)涉及一種連接子?藥物的制備方法，具體提供了目標(biāo)化合物的制備方法，該制備方法包括：將式a所示的化合物與路易斯酸發(fā)生反應(yīng)，獲得粗產(chǎn)物；所述粗產(chǎn)物經(jīng)過純化得到式A所示化合物。該制備方法能夠達(dá)到產(chǎn)品的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)。
【技術(shù)實現(xiàn)步驟摘要】
本專利技術(shù)涉及醫(yī)藥領(lǐng)域，具體涉及一種連接子-藥物的制備方法。
技術(shù)介紹
1、抗體-藥物偶聯(lián)物(antibody-drug?conjugates，adc)是將有細(xì)胞殺傷效果的小分子毒素通過連接子連接于抗體上得到的具有特異靶向性殺傷作用的分子，主要用于腫瘤的治療和其他疾病的治療?？贵w-藥物偶聯(lián)藥物所使用的抗體能特異性地與腫瘤細(xì)胞表面的蛋白質(zhì)結(jié)合，因此具有傳統(tǒng)藥物所達(dá)不到的腫瘤特異性和潛力。目前，全球已經(jīng)有12款adc藥物獲得上市批準(zhǔn)，并有上百個項目正在進(jìn)行臨床試驗。
2、連接子-藥物是連接子與小分子毒素連接形成的化合物，是制備adc的中間體，在決定抗體-藥物偶聯(lián)物的整體成功方面起著關(guān)鍵作用。
技術(shù)實現(xiàn)思路
1、本專利技術(shù)的目的在于提供一種式a所示的連接子-藥物的新的制備方法。
2、
3、具體地，在本專利技術(shù)的第一方面，本專利技術(shù)提供了一種制備式a所示化合物的方法，其包括：
4、
5、將式a所示的化合物與路易斯酸發(fā)生反應(yīng)，獲得粗產(chǎn)物；所述粗產(chǎn)物經(jīng)過純化得到式a所示化合物；
6、
7、在一些實施方案中，所述路易斯酸為溴化物、tmsi(三甲基碘硅烷)或tmsotf(三氟甲磺酸三甲基硅酯)。
8、在一些實施方案中，所述路易斯酸為溴化鋅。
9、專利技術(shù)人發(fā)現(xiàn)，化合物a在酸性脫保護(hù)試劑作用下，可能產(chǎn)生的雜質(zhì)包括：
10、1)單脫產(chǎn)物雜質(zhì)
11、2)化合物a雜質(zhì)
12、3)藥物單元雜質(zhì)
13、以上雜質(zhì)的產(chǎn)生均會影響最終制備的adc載藥量(dar)，由此，在目標(biāo)化合物成品生產(chǎn)工序中，需嚴(yán)格控制以上雜質(zhì)的含量(單脫產(chǎn)物需控制在10％以內(nèi)，化合物a需控制在2％以內(nèi)，藥物單元需控制在5％以內(nèi))，方能保證目標(biāo)化合物與抗體的偶聯(lián)效果。
14、本申請專利技術(shù)人通過實驗研究后發(fā)現(xiàn)，以上反應(yīng)中，相比于非路易斯酸(如三氟乙酸等)作為酸性脫保護(hù)試劑，路易斯酸(如溴化鋅)作為酸性脫保護(hù)試劑時，雜質(zhì)含量顯著降低，尤其是藥物單元雜質(zhì)的含量，可以低至不超過5％，甚至低至不超過2％，滿足質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)，甚至遠(yuǎn)優(yōu)于質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)。尤其是，當(dāng)溴化鋅作為酸性脫保護(hù)試劑時，雜質(zhì)含量顯著降低，遠(yuǎn)優(yōu)于質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)。
15、進(jìn)一步地，以上反應(yīng)結(jié)束后，所述粗產(chǎn)物進(jìn)行純化時，專利技術(shù)人發(fā)現(xiàn)，可能產(chǎn)生的雜質(zhì)包括：
16、
17、1)藥物單元雜質(zhì)
18、2)連接頭開環(huán)產(chǎn)物雜質(zhì)
19、以上雜質(zhì)的產(chǎn)生會顯著影響最終制備的adc載藥量(dar)(具體地，一方面，式a所示連接子-藥物的連接頭中含有的丁二酰亞胺結(jié)構(gòu)通過雙鍵與抗體巰基發(fā)生邁克爾加成，形成adc?？梢?，產(chǎn)生的開環(huán)產(chǎn)物雜質(zhì)不能再與抗體偶聯(lián)，進(jìn)而影響載藥量。另一方面，藥物單元雜質(zhì)的產(chǎn)生使得其與連接子分離，分離的連接子仍然會與抗體進(jìn)行偶聯(lián)但卻不再產(chǎn)生藥效，進(jìn)而影響載藥量)，由此，在目標(biāo)化合物成品生產(chǎn)工序中，需嚴(yán)格控制以上雜質(zhì)的含量(開環(huán)產(chǎn)物控制在10％以內(nèi)，藥物單元需控制在5％以內(nèi))，方能保證目標(biāo)化合物與抗體的偶聯(lián)效果。
20、本申請專利技術(shù)人通過實驗研究后發(fā)現(xiàn)，以上純化中，通過將一定條件的制備型液相色譜純化與納濾步驟相結(jié)合，雜質(zhì)含量顯著降低，能夠達(dá)到產(chǎn)品的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)(開環(huán)產(chǎn)物控制在10％以內(nèi)，藥物單元控制在5％以內(nèi))，甚至遠(yuǎn)優(yōu)于該質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)(開環(huán)產(chǎn)物低至3％以內(nèi)，藥物單元低至2％以內(nèi))。
21、在一些實施方案中，所述純化包括以下步驟：
22、(2-1)將所述粗產(chǎn)物用制備型液相色譜進(jìn)行純化，獲得制備液；
23、(2-2)將所述制備液進(jìn)行濃縮、干燥，獲得式a所示化合物；
24、任選地，在步驟(2-1)獲得所述制備液之后，步驟(2-2)之前，還包括萃取的步驟；
25、任選地，在步驟(2-1)獲得所述制備液之后，步驟(2-2)之前，還包括以下步驟：
26、(2-i)采用有機(jī)溶劑萃取所述制備液，棄去有機(jī)相，獲得水相；
27、其中，步驟(2-1)中，用制備型液相色譜進(jìn)行純化時，流動相a為tfa/水，流動相b為tfa/乙腈；步驟(2-2)中，所述濃縮是納濾濃縮。
28、本領(lǐng)域技術(shù)人員可以理解，步驟(2-i)獲得水相后，后續(xù)的步驟(2-2)便會適應(yīng)性調(diào)整為：將所述水相進(jìn)行濃縮、干燥，獲得式a所示化合物。
29、在一些實施方案中，所述純化包括以下步驟：
30、(2-1)將所述粗產(chǎn)物用制備型液相色譜進(jìn)行純化，獲得制備液；
31、(2-2)將所述制備液進(jìn)行濃縮、干燥，獲得式a所示化合物；
32、其中，步驟(2-1)中，用制備型液相色譜進(jìn)行純化時，流動相a為tfa/水，流動相b為tfa/乙腈；步驟(2-2)中，所述濃縮是納濾濃縮。
33、在一些實施方案中，所述純化包括以下步驟：
34、(2-1)將所述粗產(chǎn)物用制備型液相色譜進(jìn)行純化，獲得制備液；
35、(2-i)采用有機(jī)溶劑萃取所述制備液，棄去有機(jī)相，獲得水相；
36、(2-2)將所述水相進(jìn)行濃縮、干燥，獲得式a所示化合物；
37、其中，步驟(2-1)中，用制備型液相色譜進(jìn)行純化時，流動相a為tfa/水，流動相b為tfa/乙腈；步驟(2-2)中，所述濃縮是納濾濃縮。
38、在一些實施方案中，步驟(2-1)中，用制備型液相色譜進(jìn)行純化時，流動相a為0.2％tfa/水，流動相b為0.1％tfa/乙腈；步驟(2-2)中，所述濃縮是納濾濃縮。
39、在一些實施方案中，步驟(2-1)中，用制備型液相色譜進(jìn)行純化時，采用梯度洗脫。
40、在一些實施方案中，梯度條件為：
41、
時間/min
流動相a/％
流動相b/％
0～5
90～75
10～25
5～32
75～60
25～40
32～39
10～0
90～100
39～50
90～75
10～25
42、。
43、在一些實施方案中，梯度條件為：
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【技術(shù)保護(hù)點】
1.一種制備式A所示化合物的方法，其包括：
2.權(quán)利要求1所述的方法，其中，所述純化包括以下步驟：
3.權(quán)利要求2所述的方法，其中，所述方法還具有選自以下(i)-(iii)中的一項或多項技術(shù)特征:
4.權(quán)利要求2-3任一項所述的方法，其中，所述方法還具有選自以下(i)-(ii)中的一項或多項技術(shù)特征：
5.權(quán)利要求1-4任一項所述的方法，其中，所述方法還具有選自以下(i)-(iv)中的一項或多項技術(shù)特征：
6.權(quán)利要求1-5任一項所述的方法，其中，將式a所示的化合物與路易斯酸發(fā)生反應(yīng)后，純化前，還包括后處理的步驟；
7.權(quán)利要求1-6任一項所述的方法，其中，式a所示的化合物是通過如下方法制備得到的：
8.權(quán)利要求7所述的方法，其中，式b所示化合物是通過如下方法制備的：
9.權(quán)利要求8所述的方法，其中，步驟(4-1)是通過如下方式進(jìn)行的：
10.權(quán)利要求8所述的方法，其中，步驟(4-4)是通過如下方式進(jìn)行的：
11.權(quán)利要求8所述的方法，其中，步驟(4-5)是通過如下方式進(jìn)行的：
...
【技術(shù)特征摘要】
1.一種制備式a所示化合物的方法，其包括：
2.權(quán)利要求1所述的方法，其中，所述純化包括以下步驟：
3.權(quán)利要求2所述的方法，其中，所述方法還具有選自以下(i)-(iii)中的一項或多項技術(shù)特征:
4.權(quán)利要求2-3任一項所述的方法，其中，所述方法還具有選自以下(i)-(ii)中的一項或多項技術(shù)特征：
5.權(quán)利要求1-4任一項所述的方法，其中，所述方法還具有選自以下(i)-(iv)中的一項或多項技術(shù)特征：
6.權(quán)利要求1-5任一項所述的方法，...
【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：朱義，萬維李，張宜英，朱貴莉，肖捷，
申請(專利權(quán))人：成都精西藥業(yè)有限責(zé)任公司，
類型：發(fā)明
國別省市：
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