【技術實現步驟摘要】
本專利技術屬于生物醫學診斷標志物領域，特別涉及一種可用于篩查、診斷冠狀動脈粥樣硬化的環狀circtmcc1分子及應用。
技術介紹
1、環狀rna（circrna）是一種反向剪接，在結構上形成閉環的內源性非編碼rna。circrnas的表達具有組織特異性且相對穩定，這是因為其閉環結構可防止它們被rna外切酶降解。circrnas具有多種細胞功能，circrna的功能機制如下：1.circrna可作為m?irna-ago2復合物的海綿，削弱mirna的功能。2.?外顯子內含子環狀rna(eicirnas)與eicirnas宿主基因啟動子區的u1?snrnp和聚合酶ii相互作用，誘導其轉錄（底部）；3.circrnas可作為蛋白質的誘餌，調節其功能。4.circrnas可作為可翻譯的rna編碼多肽。5.反向剪接和線性剪接相互競爭產生circrna或mrna。環狀rna表達的變化與多種病理生理的發生和發展有關。
2、circrnas的調控機制和網絡是復雜和立體的。它可以在多個水平上與dna、rna和蛋白質結合，在基因轉錄和翻譯等不同階段調控基因表達。鑒于circrnas功能的復雜性，它可以調控多種mirnas的功能和蛋白表達，因此改變一種circrna的表達可能同時激活多種血管生長因子介導的信號通路，從而促進血管生成和成熟。由于其組織特異性和功能復雜性，circrna在治療血管生成方面具有廣闊的前景，可能成為冠心病新的治療靶點和潛在的生物標志物。
3、近年來，研究者們發現環狀rna可參與多種心血管疾病的發生發展。
技術實現思路
1、本專利技術的目的是提供一種冠狀動脈粥樣硬化的診斷標志物circrna。該環狀rna在冠狀動脈粥樣硬化的篩選、診斷、預后評估中發揮用途。
2、為了實現上述目的，本專利技術采用以下技術方案：一種環狀rna基因circtmcc1，所述circtmcc1的核苷酸序列如seqid?no?.1所示。
3、檢測環狀rna基因circtmcc1的制劑在在制備以下任一項產品中應用，
4、（1）在制備篩查冠狀動脈粥樣硬化的診斷試劑中的應用；
5、（2）在制備診斷冠狀動脈粥樣硬化的診斷試劑中的應用；
6、（3）在制備初步判斷冠狀動脈粥樣硬化嚴重程度的診斷試劑中的應用；
7、（4）在制備冠狀動脈粥樣硬化預后評價的診斷試劑中的應用。
8、進一步的，制劑用于檢測檢測被試者pbmc?細胞中circtmcc1的表達量，或特異性識別circtmcc1。
9、診斷冠狀動脈粥樣硬化的標志物，所述標志物為環狀rna基因circtmcc1，核苷酸序列如seqid?no?.1所示。
10、一種冠狀動脈粥樣硬化的診斷試劑，包括：檢測環狀rna基因circtmcc1表達量的制劑，所述circtmcc1的核苷酸序列如seqid?no?.1所示。
11、一種冠狀動脈粥樣硬化的診斷試劑盒，所述診斷試劑盒中包括權利要求5?所述的診斷試劑。
12、進一步的，診斷試劑盒采用以下步驟進行檢測：
13、（1）從待測血標本樣品中分離pbmcs，并提取rna置于-80℃；
14、（2）步驟1得到的rna逆轉錄得到cdna，加入設計的circtmcc1擴增引物，進行qpcr實驗；
15、（3）步驟2得到的擴增產物進行sanger測序、rnaser抗性、放線菌素d處理及瓊脂糖凝膠電泳驗證circtmcc1成環；
16、（4）根據步驟4的circtmcc1表達水平與正常對照組相比，分析待測樣品中是否存在該基因差異表達。
17、進一步的，擴增引物為特異性引物，其中正向引物核苷酸序列如seq?id?no?.2?所示，反向引物核苷酸序列如seq?id?no?.3?所示。
18、進一步的，試劑盒還包括熒光染料和特異性檢測內參gapdh表達水平的擴增引物。
19、進一步的，熒光染料為chamq?universal?sybr?qpcr?master?mix，所述gapdh的特異性引物，其中正向引物核苷酸序列如seq?id?no?.4所示，反向引物核苷酸序列如seq?idno?.5?所示。
20、本專利技術提供了一種適用于冠狀動脈粥樣硬化的生物標記物circrna，通過檢測外周pbmcs中該基因的表達水平能有效的區分正常人和冠狀動脈粥樣硬化患者，應用該基因表達水平進行診斷，可以早期篩選冠心病患者并評估冠狀動脈粥樣硬化的嚴重程度，及時干預，降低冠心病死亡率，改善患者預后。收集患者外周血進行檢測的方案與目前的冠脈增強ct，冠脈造影等冠狀動脈粥樣硬化的檢測手段相比具有輻射小、危險性低，穩定性好的特點，并且可以減少創傷。本專利技術設計的標志物在冠狀動脈粥樣硬化診斷方面有較好的價值（auc=0.7557）?。
本文檔來自技高網...【技術保護點】
1.一種環狀RNA基因circTMCC1，其特征在于：所述circTMCC1的核苷酸序列如SEQ?IDNO.1所示。
2.檢測環狀RNA基因circTMCC1的制劑在在制備以下任一項產品中應用，其特征在于：
3.根據權利要求2所述的應用，其特征在于：所述制劑用于檢測被試者PBMC細胞中circTMCC1的表達量，或特異性識別circTMCC1試劑。
4.診斷冠狀動脈粥樣硬化的標志物，其特征在于：所述標志物為環狀RNA基因circTMCC1，核苷酸序列如SEQ?ID?NO.1所示。
5.一種冠狀動脈粥樣硬化的診斷試劑，其特征在于包括：檢測環狀RNA基因circTMCC1表達量的制劑，所述circTMCC1的核苷酸序列如SEQ?ID?NO.1所示。
6.一種冠狀動脈粥樣硬化的診斷試劑盒，其特征在于：所述診斷試劑盒中包括權利要求5所述的診斷試劑。
7.根據權利要求6所述的診斷試劑盒，其特征在于：所述診斷試劑盒采用以下步驟進行檢測：
8.根據權利要求7所述的診斷試劑盒，其特征在于：所述擴增引物為特異性引物
9.根據權利要求7所述的診斷試劑盒，其特征在于：所述試劑盒還包括熒光染料和特異性檢測內參GAPDH表達水平的擴增引物。
10.根據權利要求9所述的診斷試劑盒，其特征在于：所述熒光染料為ChamQ?UniversalSYBR?qPCR?Master?Mix，所述GAPDH的特異性引物，其中正向引物核苷酸序列如SEQ?IDNO.4所示，反向引物核苷酸序列如SEQ?ID?NO.5所示。
...【技術特征摘要】
1.一種環狀rna基因circtmcc1，其特征在于：所述circtmcc1的核苷酸序列如seq?idno.1所示。
2.檢測環狀rna基因circtmcc1的制劑在在制備以下任一項產品中應用，其特征在于：
3.根據權利要求2所述的應用，其特征在于：所述制劑用于檢測被試者pbmc細胞中circtmcc1的表達量，或特異性識別circtmcc1試劑。
4.診斷冠狀動脈粥樣硬化的標志物，其特征在于：所述標志物為環狀rna基因circtmcc1，核苷酸序列如seq?id?no.1所示。
5.一種冠狀動脈粥樣硬化的診斷試劑，其特征在于包括：檢測環狀rna基因circtmcc1表達量的制劑，所述circtmcc1的核苷酸序列如seq?id?no.1所示。
6.一種冠狀動脈粥樣硬化的診斷試劑盒，...
【專利技術屬性】
技術研發人員：賈恩志，任夢夢，韋鋒，何凱，趙震宇，何書，賈僑偉，遲博予，張鑫，符亞紅，李城城，周晗笑，
申請(專利權)人：江蘇省人民醫院南京醫科大學第一附屬醫院，
類型：發明
國別省市：
還沒有人留言評論。發表了對其他瀏覽者有用的留言會獲得科技券。