【技術實現步驟摘要】
本專利技術涉及春砂仁純化多糖制備，具體為一種增強肌肉功能的春砂仁純化多糖制備方法與應用。
技術介紹
1、春砂仁，廣東省陽春市特產，中國國家地理標志產品，其花、果、根、莖、葉均可入藥，尤以果實最為珍貴，春砂仁果形呈橢圓形或卵圓形，表面棕褐色，密生刺狀突起，果皮薄而軟，種子富含揮發油，具有“飽滿結實、氣味芬烈、五味俱全”的獨特品質；中醫理論認為春砂仁性溫味辛，歸脾、胃、腎經，功效顯著，主要包括行氣調中和胃醒脾、化濕消滯、止痛安胎等，臨床上有效緩解脾胃虛寒、胃氣上逆等癥狀，對治療脘腹脹滿、胃果食滯、噎膈嘔吐等病癥有顯著療效，春砂仁多糖作為春砂仁的活性成分，具有改善脂代謝、抗氧化應激、調理胃腸功能及潛在安胎作用，能夠顯著降低血脂、增強抗氧化酶活性、促進胃腸健康，具有良好的開發前景。
2、目前人們采用超聲提取法和酶解法來實現對春砂仁多糖的提取，超聲提取法是通過超聲波產生的空化效應增加溶劑穿透力，以促進目標成分提取的方法，具有提取溫度低、效率高、時間短的優點，能有效保護春砂仁多糖的功能成分。
3、但是上述關于現有春砂仁多糖的提取與應用在實際使用過程中還存在以下問題：春砂仁多糖的提取率仍然較低，而且要么耗時長，要么產量低，要么成本高；春砂仁多糖的結構研究側重于單糖組成、側鏈位置等，對于高級結構、構效關系等研究較少，不同提取方法所得的多糖組成及分子量分布有很大差異，無法滿足市場需求，也不利于春砂仁多糖在營養領域的推廣與應用。
4、所以我們提出了一種增強肌肉功能的春砂仁純化多糖制備方法與應用，以便于解決上述中提
技術實現思路
1、本專利技術的目的在于提供一種增強肌肉功能的春砂仁純化多糖制備方法與應用，為解決目前春砂仁多糖的提取率仍然較低，而且要么耗時長，要么產量低，要么成本高；春砂仁多糖的結構研究側重于單糖組成、側鏈位置等，對于高級結構、構效關系等研究較少，不同提取方法所得的多糖組成及分子量分布有很大差異，無法滿足市場需求，也不利于春砂仁多糖在營養領域的推廣與應用的問題。
2、為實現上述目的，本專利技術提供如下技術方案：一種增強肌肉功能的春砂仁純化多糖制備方法與應用，包括以下操作步驟：
3、s1：春砂仁多糖粗提；
4、制備所需的材料準備：洗凈后切片干燥的春砂仁根、超純水、破碎機、無水乙醇、超聲波提取器、旋轉蒸發儀、真空冷凍干燥機以及干燥存儲罐；
5、s2：春砂仁多糖粗提的方法；
6、s21：將春砂仁根洗凈后切片干燥，用破碎機將其研磨成粉末備用，春砂仁粉末和超純水按1:60比例充分混勻；
7、s22：在超聲環境下浸提，隨后轉入90℃環境下反應3小時，將反應液離心，取上清液濃縮后加入一定量無水乙醇，使溶液中乙醇的終體積分數為80%，置于4℃中靜置24h；
8、s23：過夜沉淀后反應液離心，保留沉淀得到春砂仁粗多糖，并利用旋轉蒸發儀除去粗多糖殘留的有機溶劑；
9、s24：將粗多糖放入真空冷凍干燥機凍干24h，放入干燥罐中保存；
10、s3：春砂仁多糖的純化；
11、s31：首先用sevage法除去春砂仁粗多糖中的蛋白質，配制一定濃度的廣佛手粗多糖溶液和sevage溶液（氯仿：正丁醇=4:1），向春砂仁多糖溶液加入其體積1/4的sevage溶液充分混勻30min-60min后離心，上清溶液為多糖，中間層為蛋白質，下層溶液為有機溶劑；
12、s32：吸取上清后重復上述步驟，直至沒有中間層，剩余有機溶劑倒入分液漏斗中靜置過夜后方可重復利用；
13、s33：除凈蛋白質后的春砂仁多糖溶液倒入旋轉蒸發儀的茄形瓶中，40℃真空蒸發出樣液中的有機溶劑；
14、s34：利用透析袋將多糖中的小分子物質和鹽分析出，得到較純凈的春砂仁多糖；
15、s4：春砂仁多糖的分離；
16、s41：將事先活化好的deae-葡聚糖凝膠a-25裝填于柱子中，平衡一段時間后，將特定濃度的春砂仁粗多糖溶液緩慢加到凝膠柱上；
17、s42：打開恒流泵，設置流速，用部分收集器收集洗脫液，每三分鐘收集一管，流動相離子特定濃度的nacl溶液，并隔管洗脫液用苯酚-硫酸法測定多糖含量；
18、s43：以管數為橫坐標，以吸光度為縱坐標，得到多糖的洗脫曲線，分析洗脫曲線數據后根據峰值和洗脫液濃度劃分純化組分，對應同一純化組分的管子合并洗脫液，濃縮至一定體積后，轉移至透析袋中用蒸餾水透析3天，以去除各組分中的鹽分雜質，透析完畢后收集各組分進行冷凍干燥；
19、s44：葡聚糖凝膠g-200也是同樣的方法裝柱、平衡、上樣洗脫測定、透析、凍干，得到純化春砂仁多糖。
20、一種增強肌肉功能的春砂仁純化多糖的應用，細胞的培養與分化：利用c2c12成肌細胞開展體外實驗，c2c12細胞采用含有10%胎牛血清、1%青霉素-鏈霉素溶液的dmem培養基，37℃，5%co2培養箱中培養，細胞生長至80%左右，用含有2%馬血清、1%青霉素-鏈霉素溶液的dmem培養基誘導肌管分化，每天更換培養基，連續誘導5d至肌管形成。
21、優選的，所述春砂仁多糖干預：使用提純后的春砂仁多糖以不同濃度梯度干預細胞24小時。
22、優選的，所述觀察c2c12肌管形態；檢測肌管細胞內的atp水平。
23、與現有技術相比，本專利技術的有益效果是：該一種增強肌肉功能的春砂仁純化多糖制備方法與應用，不僅可將春砂仁多糖應用到提高肌肉功能上，更使用了純化后結構清晰的春砂仁多糖，明確證實了春砂仁多糖在肌萎縮中的應用，其具體內容如下：
24、1.驗證了其在緩解肌萎縮方面的效果，為緩解肌萎縮的藥物治療提供新思路，為春砂仁多糖在營養補劑市場的應用提供技術支持。
25、2.通過spss24.0軟件進行處理，計量資料以（x±s）表示，多組間比較采用單因素方差分析，進一步兩兩比較采用lsd檢驗，p<0.05表示差異有統計學意義。
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1.一種增強肌肉功能的春砂仁純化多糖的制備方法，其特征在于，包括以下操作步驟：
2.一種增強肌肉功能的春砂仁純化多糖的應用，其特征在于：細胞的培養與分化：利用C2C12成肌細胞開展體外實驗，C2C12細胞采用含有10%胎牛血清、1%青霉素-鏈霉素溶液的DMEM培養基，37℃，5%CO2培養箱中培養，細胞生長至80%左右，用含有2%馬血清、1%青霉素-鏈霉素溶液的DMEM培養基誘導肌管分化，每天更換培養基，連續誘導5d至肌管形成。
3.根據權利要求2所述的一種增強肌肉功能的春砂仁純化多糖的應用，其特征在于，春砂仁多糖干預：使用提純后的春砂仁多糖以不同濃度梯度干預細胞24小時。
4.根據權利要求2所述的一種增強肌肉功能的春砂仁純化多糖的應用，其特征在于，指標檢測：觀察C2C12肌管形態；檢測肌管細胞內的ATP水平。
【技術特征摘要】
1.一種增強肌肉功能的春砂仁純化多糖的制備方法，其特征在于，包括以下操作步驟：
2.一種增強肌肉功能的春砂仁純化多糖的應用，其特征在于：細胞的培養與分化：利用c2c12成肌細胞開展體外實驗，c2c12細胞采用含有10%胎牛血清、1%青霉素-鏈霉素溶液的dmem培養基，37℃，5%co2培養箱中培養，細胞生長至80%左右，用含有2%馬血清、1%青霉素-鏈霉素溶液的d...
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