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【技術實現步驟摘要】
本專利技術屬于食品摻假檢測,具體地涉及一種用于lamp檢測肉制品摻假的海藻纖維素納米纖維氣凝膠材料及其制備和應用。
技術介紹
1、在食品安全領域,肉制品摻假是一個長期存在的問題,不僅損害了消費者的權益,還可能對公眾健康構成威脅。為了應對這一挑戰,科研人員不斷探索和開發新的檢測技術,其中環介導等溫擴增(lamp)技術因其高效、快速和簡便的特點而受到廣泛關注。
2、環介導等溫擴增lamp技術是一種在等溫條件下擴增目標dna的核酸擴增技術,它不需要熱循環器,反應時間較短,通常可以在一小時內完成,并且具有高度的特異性和靈敏度。這些特點使得lamp技術在現場快速檢測方面具有顯著優勢。在lamp檢測過程中,sybrgreen?i染料作為lamp產物分析時最常用的顯色劑,若將染料提前加入lamp反應體系,會嚴重抑制lamp反應,而在反應后加入顯色劑,高濃度的擴增產物在進行開管操作時極易造成氣溶膠污染。氣溶膠是由懸浮在空氣中的固態或液態顆粒與dna等生物分子組成的分散系統,其中dna本身是帶負電的,這種氣溶膠污染不僅會導致檢測結果假陽性高,還可能對實驗環境和人員造成潛在的生物安全風險。
3、為了解決這一問題,科研人員正在積極探索和改進lamp技術的檢測流程和方法,通過優化顯色劑的加入方式和時間、改進反應體系的組成和穩定性、加強實驗環境的清潔和消毒等措施,來降低氣溶膠污染的風險和影響。同時,也在積極研發和應用更加安全、高效、便捷的lamp檢測技術,以更好地服務于食品安全領域的快速檢測需求。海藻纖維素納米纖維是以海藻纖維素為
技術實現思路
1、針對現有環介導等溫擴增檢測方法中易被環境中的氣溶膠污染而導致出現假陽性的問題,陽離子型海藻纖維素納米纖維應用于lamp檢測吸附氣溶膠中dna易受lamp反應體系的干擾和影響,造成穩定性差、吸附能力不佳的技術問題,本專利技術旨在于提供一種用于lamp檢測肉制品摻假的海藻纖維素納米纖維氣凝膠材料及其制備和應用。
2、為達到上述目的,本專利技術采用的技術方案為:
3、本專利技術提供一種用于lamp檢測肉制品摻假的海藻纖維素納米纖維氣凝膠材料的制備方法,包括如下步驟:將β-環糊精加入陽離子型海藻纖維素納米纖維中加熱攪拌,獲得混合懸浮液,吸取混合懸浮液真空冷凍干燥,得到海藻纖維素納米纖維氣凝膠材料。
4、所述陽離子型海藻纖維素納米纖維采用如下步驟獲得:海藻纖維素中依次加入氫氧化鈉溶液、蒸餾水和2,3-環氧丙基三甲基氯化銨,獲得海藻纖維素混合物,調節ph值,氧化,清洗,均質,得到陽離子型海藻纖維素納米纖維。
5、進一步地,所述氫氧化鈉溶液添加量為海藻纖維素質量的20%~25%,所述蒸餾水的添加量為海藻纖維素質量30%~40%,所述2,3-環氧丙基三甲基氯化銨的添加量為海藻纖維素質量的20%~30%,于60~80℃攪拌8~10h獲得海藻纖維素混合物。
6、進一步地,所述ph值調節至4~5,所述氧化采用質量濃度為1%~2%的naclo2溶液于70~90℃攪拌3~5h。
7、更進一步地,所述ph值調節至4.6,所述氧化采用質量濃度為1%的naclo2溶液于80℃攪拌4h。
8、所述β-環糊精與陽離子型海藻纖維素納米纖維的摩爾比為1:1~2,所述加熱溫度為55~65℃,所述攪拌時間為4~6h。
9、進一步地,所述吸取混合懸浮液體積為100~200μl于96孔酶標板真空冷凍干燥。
10、更進一步地,所述吸取混合懸浮液體積為200μl于96孔酶標板真空冷凍干燥。
11、本專利技術提供采用上述制備方法獲得的用于lamp檢測肉制品摻假的海藻纖維素納米纖維氣凝膠材料。
12、本專利技術提供一種lamp檢測試劑盒,所述lamp檢測試劑盒包括上述海藻纖維素納米纖維氣凝膠材料。
13、所述lamp檢測試劑盒還包括lamp反應混合液和核酸染料。
14、進一步地,所述lamp反應混合液包括目標dna模板、目標dna引物、緩沖液和bstdna聚合酶。
15、本專利技術提供上述海藻纖維素納米纖維氣凝膠材料或上述lamp檢測試劑盒在lamp檢測肉制品摻假中的應用。
16、本專利技術提供一種lamp檢測肉制品摻假方法,將上述海藻纖維素納米纖維氣凝膠材料置于pcr管口,用于吸附和固定環境中的氣溶膠顆粒進入檢測體系,減少假陽性結果的出現。
17、所述lamp檢測肉制品摻假,將待測肉制品dna和lamp反應混合液加入pcr管,pcr管蓋內壁加入核酸染料,反應后觀察pcr管中液體的顏色變化,若變色,則待測肉制品摻假;若不變色,則待測肉制品未摻假。
18、所述lamp反應條件為60~70℃孵育30~50min,80~90℃加熱5min終止反應。
19、相對于現有技術,本專利技術的有益效果為:
20、本專利技術提供的用于lamp檢測肉制品摻假的海藻纖維素納米纖維氣凝膠材料的制備方法,通過加入氫氧化鈉溶液、蒸餾水和2,3-環氧丙基三甲基氯化銨,并調節ph值、氧化和均質,成功制備了陽離子型海藻纖維素納米纖維,不僅賦予了纖維帶正電荷的特性,還增強了其在水中的分散性和穩定性;引入β-環糊精并通過加熱攪拌的方式,使得陽離子型海藻纖維素納米纖維表面接枝了疏水空腔,這一創新步驟不僅提高了材料的吸附能力,還使得吸附的dna更牢固地束縛在疏水空腔內,從而有效防止了dna的釋放和污染;海藻纖維素納米纖維的來源廣泛且價格低廉,這降低了制備成本,制備過程相對簡單且易于控制,無需復雜的儀器設備和繁瑣的操作步驟,進一步提高了成本效益。
21、本專利技術提供的用于lamp檢測肉制品摻假的海藻纖維素納米纖維氣凝膠材料,陽離子型海藻纖維素納米纖維相互交織,形成了穩定且多孔的三維網絡結構,為整個材料提供了堅實的支撐,β-環糊精分子通過化學鍵或物理作用接枝在陽離子型海藻纖維素納米纖維的表面,形成了具有疏水空腔的功能層,這些疏水空腔本文檔來自技高網...
【技術保護點】
1.一種用于LAMP檢測肉制品摻假的海藻纖維素納米纖維氣凝膠材料的制備方法,其特征在于,包括如下步驟:將β-環糊精加入陽離子型海藻纖維素納米纖維中加熱攪拌,獲得混合懸浮液,吸取混合懸浮液真空冷凍干燥,得到海藻纖維素納米纖維氣凝膠材料。
2.根據權利要求1所述海藻纖維素納米纖維氣凝膠材料的制備方法,其特征在于,所述陽離子型海藻纖維素納米纖維采用如下步驟獲得:海藻纖維素中依次加入氫氧化鈉溶液、蒸餾水和2,3-環氧丙基三甲基氯化銨,獲得海藻纖維素混合物,調節pH值,氧化,清洗,均質,得到陽離子型海藻纖維素納米纖維。
3.根據權利要求2所述海藻纖維素納米纖維氣凝膠材料的制備方法,其特征在于,所述pH值調節至4~5,所述氧化采用質量濃度為1%~2%的NaClO2溶液于70~90℃攪拌3~5h。
4.根據權利要求1所述海藻纖維素納米纖維氣凝膠材料的制備方法,其特征在于,所述β-環糊精與陽離子型海藻纖維素納米纖維的摩爾比為1:1~2,所述加熱溫度為55~65℃,所述攪拌時間為4~6h。
5.采用權利要求1~4任意一項所述制備方法獲得的用于LAMP
6.一種LAMP檢測試劑盒,其特征在于,所述LAMP檢測試劑盒包括權利要求5所述用于LAMP檢測肉制品摻假的海藻纖維素納米纖維氣凝膠材料。
7.根據權利要求6所述LAMP檢測試劑盒,其特征在于,所述LAMP檢測試劑盒還包括LAMP反應混合液和核酸染料。
8.權利要求5所述用于LAMP檢測肉制品摻假的海藻纖維素納米纖維氣凝膠材料,或權利要求6~7任意一項所述LAMP檢測試劑盒在LAMP檢測肉制品摻假中的應用。
9.一種LAMP檢測肉制品摻假的方法,其特征在于,將權利要求5所述用于LAMP檢測肉制品摻假的海藻纖維素納米纖維氣凝膠材料置于PCR管口,用于吸附和固定環境中的氣溶膠顆粒進入檢測體系,減少LAMP檢測假陽性結果的出現。
10.根據權利要求9所述LAMP檢測肉制品摻假的方法,其特征在于,所述LAMP檢測肉制品摻假,將待測肉制品DNA和LAMP反應混合液加入PCR管,PCR管蓋內壁加入核酸染料,反應后觀察PCR管中液體的顏色變化,若變色,則待測肉制品摻假;若不變色,則待測肉制品未摻假。
...【技術特征摘要】
1.一種用于lamp檢測肉制品摻假的海藻纖維素納米纖維氣凝膠材料的制備方法,其特征在于,包括如下步驟:將β-環糊精加入陽離子型海藻纖維素納米纖維中加熱攪拌,獲得混合懸浮液,吸取混合懸浮液真空冷凍干燥,得到海藻纖維素納米纖維氣凝膠材料。
2.根據權利要求1所述海藻纖維素納米纖維氣凝膠材料的制備方法,其特征在于,所述陽離子型海藻纖維素納米纖維采用如下步驟獲得:海藻纖維素中依次加入氫氧化鈉溶液、蒸餾水和2,3-環氧丙基三甲基氯化銨,獲得海藻纖維素混合物,調節ph值,氧化,清洗,均質,得到陽離子型海藻纖維素納米纖維。
3.根據權利要求2所述海藻纖維素納米纖維氣凝膠材料的制備方法,其特征在于,所述ph值調節至4~5,所述氧化采用質量濃度為1%~2%的naclo2溶液于70~90℃攪拌3~5h。
4.根據權利要求1所述海藻纖維素納米纖維氣凝膠材料的制備方法,其特征在于,所述β-環糊精與陽離子型海藻纖維素納米纖維的摩爾比為1:1~2,所述加熱溫度為55~65℃,所述攪拌時間為4~6h。
5.采用權利要求1~4任意一項所述制備方法獲得的用于lamp檢測肉制品摻假的海藻纖維素納米纖維氣凝膠材料,其特征在于,所述海藻纖維素納米纖維氣凝膠...
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