【技術實現步驟摘要】
本專利技術涉及生物的，更具體地說，涉及一種無菌腐食酪螨純螨體過敏原原材料的制備方法。
技術介紹
1、腐食酪螨tyrophagus?putrescentiae隸屬于蛛形綱arachnida，蜱螨亞綱acari，無氣門目astigmata，粉螨科acaridae，食酪螨屬tyrophagus，是儲藏物螨類的一種，大量滋生于稻谷、大米、大麥、小麥、面粉、麩皮、米糠、黃豆等倉貯藏糧食中和脂肪、蛋白質含量高的食品如蛋粉、火腿、肉干、干酪、瓜子仁、杏仁、花生等食品中，并以此為食料。其可借助風力、老鼠、昆蟲以及人的衣服、鞋襪和檢查工具等的接觸而傳播。
2、腐食酪螨在中國各省(區)都有分布，為中國貯藏食品螨類中危害最嚴重的一種，也是室內過敏原的主要來源之一，可導致人類皮炎和呼吸道過敏。是繼屋塵螨、粉塵螨之后又一重要致敏螨種。
3、目前，唯一能阻止過敏疾病進程的方式是脫敏治療。脫敏治療是將過敏原制劑通過反復皮下注射的方式進入體內而誘導免疫耐受，使過敏個體再次接觸該過敏原后不再出現癥狀或癥狀減輕。過敏原免疫治療是目前世界衛生組織(who)和世界過敏組織(wao)公認的過敏性疾病唯一對因治療的方法，可改變過敏性疾病的自然進程并阻止過敏性鼻炎發展為哮喘，有預防和治療的雙重作用。由于其具有的長期療效和降低并發癥的作用，過敏原的免疫治療可顯著提高社會生產效率，節約衛生經濟支出。目前我國臨床能夠開展脫敏治療的制劑非常有限，遠遠不能滿足臨床需求。
4、過敏原免疫治療的療效和安全性依賴于精準的過敏原診斷及高質量的脫敏治療制劑，
5、基于上述問題，我們提供了一種無菌腐食酪螨純螨體過敏原原材料的制備方法。該制備方法能夠制備得到無菌腐食酪螨純螨體過敏原原材料。本方法培養腐食酪螨操作簡單、成本低廉，并且腐食酪螨生長繁殖速度快，蟲體密度大。本方法采用標準的三級種子批培養純化腐食酪螨螨種，原材料純度高達95％～99％。可規模化高產量高標準培養得到無菌的腐食酪螨培養物。制備的無菌腐食酪螨純螨體過敏原原材料可以用于生產過敏原制劑，也可以用于科研，還可以用于特異性ige體外檢測。
6、本
技術介紹
所公開的上述信息僅僅用于增加對本專利技術
技術介紹
的理解，因此，其可能包括不構成本領域普通技術人員已知的現有技術。
技術實現思路
1、為了解決上述
技術介紹
中提出的問題，本專利技術提供一種無菌腐食酪螨純螨體過敏原原材料的制備方法。
2、本專利技術提供的一種無菌腐食酪螨純螨體過敏原原材料的制備方法采用如下的技術方案：
3、一種無菌腐食酪螨純螨體過敏原原材料的制備方法，包括以下步驟：
4、步驟一、初始螨種收集：從久置儲藏物糧食中如面粉、大米、稻谷、玉米、飼料、干果等中收集儲藏物樣本；將收集的儲藏物樣本過篩后平鋪于培養皿中，撫平表面，置于避光陰涼潮濕處，定時觀察。當發現有小凸起時，挑起少許凸起處制片，進行形態學鑒定。
5、步驟二、螨種純化：在無菌條件下，利用解剖鏡用接種針挑選出活躍度高、生長狀況良好的雌雄均有腐食酪螨，接種至裝有腐食酪螨培養基的無菌細胞培養瓶內，按此方法在25℃、相對濕度75％的恒溫培養箱中純化培養兩代后，且無雜螨及真菌污染，方可作為初始種群。
6、步驟三、原始種子批培養：在無菌條件下，取純化后的腐食酪螨螨種與培養基重量比約1:25的接種比例，接種至裝有腐食酪螨培養基的無菌細胞培養瓶內，擰緊瓶蓋。在25℃、相對濕度75％的恒溫培養箱中培養，每天記錄溫度、相對濕度，每周至少一次在解剖鏡下對腐食酪螨的純度、雜螨污染、真菌污染進行監控，培養過程中，及時挑出受到真菌和雜螨污染的培養瓶。培養2～3個月，螨蟲密度達到約1萬只每公斤，經過形態學和生物學鑒定可作為原始種子批。
7、步驟四、主種子批培養：在無菌條件下，取原始種子批腐食酪螨螨種與培養基重量比約1:25的接種比例，接種至裝有腐食酪螨培養基的無菌細胞培養瓶內，擰緊瓶蓋。在25℃、相對濕度75％的恒溫培養箱中培養，每天記錄溫度、相對濕度，每周至少一次在解剖鏡下對腐食酪螨的純度、雜螨污染、真菌污染進行監控，培養過程中，及時挑出受到真菌和雜螨污染的培養瓶。培養2～3個月，螨蟲密度達到約10萬只每公斤，經過形態學和生物學鑒定可作為主種子批。
8、步驟五、工作種子批培養：在無菌條件下，取主種子批的腐食酪螨螨種與培養基重量比約1:25的接種比例，接種至裝有腐食酪螨培養基的無菌細胞培養瓶內，擰緊瓶蓋。在25℃、相對濕度75％的恒溫培養箱中培養，每天記錄溫度、相對濕度，每周至少一次在解剖鏡下對腐食酪螨的純度、雜螨污染、真菌污染進行監控，培養過程中，及時挑出受到真菌和雜螨污染的培養瓶。培養2～3個月，螨蟲密度達到約100萬只每公斤，經過形態學和生物學鑒定可作為工作種子批。
9、步驟六、批量接種培養：在無菌條件下，取工作種子批的腐食酪螨種與培養基重量比約1:25的接種比例接入至裝有腐食酪螨培養基的無菌細胞培養瓶內，擰緊瓶蓋。在25℃、相對濕度75％的恒溫培養箱中培養，每天記錄溫度、相對濕度，每周至少一次在解剖鏡下對腐食酪螨的純度、雜螨污染、真菌污染進行監控。培養過程中，及時挑出受到真菌和雜螨污染的培養瓶，培養2～3個月，蟲體密度達到約30～50只/mg培養物即可收獲。
10、步驟七、收獲：將培養好腐食酪螨的細胞培養瓶封口放入冰箱，在-18℃冷凍且保持24小時以上；
11、步驟八、純化：將腐食酪螨培養物根據螨與飼料的物理性質不同、比重不同而逐層分離純化，重復4～5次此項操作，鏡檢腐食酪螨含量達95％～99％；
12、步驟九、除菌與脫脂：將收集得到的腐食酪螨原材料用無水乙醇清洗除菌，再用多層紗布濾除溶劑，后加入脫脂溶劑反復浸洗進行脫脂處理；
13、步驟十、干燥：將脫脂后的腐食酪螨均勻攤開，采用室溫、真空或流化床進行干燥處理，得到腐食酪螨過敏原原材料；
14、步驟十一、保存：將腐食酪螨過敏原原材料進行冷凍保存；
15、通過采用上述技術方案，能夠制備得到無菌腐食酪螨純螨體過敏原原材料。
16、優選的，在步驟二、三、四、五、六中，培養基組分為小麥全麥粉31％，玉米粉40％，蛋白粉23.7％，礦物質混合物4.8％，復合維生素0.3％，酵母粉0.2％，培養基經過劑量為10kgy-20kgy鈷60輻射滅菌處理。
17、優選的，在步驟九中，腐食酪螨過敏原原材料用無水乙醇清洗除菌后加脫脂溶劑反復浸洗進行脫脂處理的過程包括：將無水乙醇加入到腐食酪螨原材料中，反復攪拌浸泡30分鐘后，用多層紗布過濾去除溶劑，所述過敏原原材料與無水乙醇的重量體積比為1:3～1:1；將過濾后的腐食酪螨原材料置容器中，加入脫脂溶劑，并攪拌或振蕩脫本文檔來自技高網...
【技術保護點】
1.一種無菌腐食酪螨純螨體過敏原原材料的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：
2.根據權利要求1所述的一種無菌腐食酪螨純螨體過敏原原材料的制備方法，其特征在于：在步驟二、三、四、五、六中，培養基組分為小麥全麥粉31％，玉米粉40％，蛋白粉23.7％，礦物質混合物4.8％，復合維生素0.3％，酵母粉0.2％，培養基經過劑量為10KGy-20KGy鈷60輻射滅菌處理。
3.根據權利要求1所述的一種無菌腐食酪螨純螨體過敏原原材料的制備方法，其特征在于：在步驟九中，腐食酪螨過敏原原材料用無水乙醇清洗除菌后加脫脂溶劑反復浸洗進行脫脂處理的過程包括：將無水乙醇加入到腐食酪螨原材料中，反復攪拌浸泡30分鐘后，用多層紗布過濾去除溶劑，所述過敏原原材料與無水乙醇的重量體積比為1:3～1:1；將過濾后的腐食酪螨原材料置容器中，加入脫脂溶劑，并攪拌或振蕩脫脂1～3小時，然后靜置分層，倒出上層液，加入新的脫脂溶劑，重復脫脂至上層液體澄清，所述過敏原原材料與脫脂溶劑的重量體積比為1:5～1:1，所述脫脂溶劑為丙酮、石油醚、乙醇、甲醇或環己烷中的至少一種。
4.根據權利要
...【技術特征摘要】
1.一種無菌腐食酪螨純螨體過敏原原材料的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：
2.根據權利要求1所述的一種無菌腐食酪螨純螨體過敏原原材料的制備方法，其特征在于：在步驟二、三、四、五、六中，培養基組分為小麥全麥粉31％，玉米粉40％，蛋白粉23.7％，礦物質混合物4.8％，復合維生素0.3％，酵母粉0.2％，培養基經過劑量為10kgy-20kgy鈷60輻射滅菌處理。
3.根據權利要求1所述的一種無菌腐食酪螨純螨體過敏原原材料的制備方法，其特征在于：在步驟九中，腐食酪螨過敏原原材料用無水乙醇清洗除菌后加脫脂溶劑反復浸洗進行脫脂處理的過程...
【專利技術屬性】
技術研發人員：蘇繼姣，王雅玲，朱杰麟，
申請(專利權)人：深圳市華仁醫學科技有限公司，
類型：發明
國別省市：
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