【技術實現步驟摘要】
技術介紹
技術實現思路
1、本專利技術的一個目的是提供兩個調控水稻重要農藝性狀(如株高、有效分蘗數、穗長、劍葉長、粒長、粒寬或千粒重等)以及角質層發育的基因oscyp86a10和oscyp86a11及其編碼蛋白。
2、其中基因oscyp86a10和oscyp86a11的核苷酸序列分別如seq?id?no:2或4所示，其編碼的蛋白質oscyp86a10和oscyp86a11的序列分別如seq?id?no:1和3所示。
3、本專利技術的又一個目的是提供一種使水稻植株產生矮小表型或角質層發育異常的方法。通過基因編輯對oscyp86a10和oscyp86a11進行定點敲除，獲得了功能缺失突變體oscyp86a10和oscyp86a11。其中，oscyp86a10突變體是在atg后的第493位堿基處缺失一個鳥嘌呤(g),導致蛋白發生移碼突變；oscyp86a11突變體是在atg后的第1124位堿基后，缺失6個堿基cctcaa，導致突變序列在此處形成終止子taa，從而使蛋白提前終止。
4、本專利技術所闡述的兩個基因oscyp86a10和oscyp86a11分別編碼序列表中seq?idno：1和3所示的氨基酸序列的蛋白質。序列表中的seq?id?no：1氨基酸序列由533個氨基酸殘基組成，其oscyp86a10突變體的蛋白是在第164位氨基酸后發生了移碼突變；序列表中的seq?id?no：3氨基酸序列由546個氨基酸殘基組成，其oscyp86a11突變體的蛋白是在第37
5、編碼上述蛋白質的基因可以是所述基因的cdna序列，如序列表中seq?id?no：2和seq?id?no：4所示的核苷酸序列。在oscyp86a10突變體中，第493位堿基鳥嘌呤(g)缺失；在oscyp86a11突變體中，第1124位堿基后，缺失6個堿基cctcaa。
6、本專利技術的又一個目的是提供一種獲得水稻植株矮小表型或角質層發育異常突變體的方法。通過基因編輯對oscyp86a10和oscyp86a11進行定點敲除，獲得了功能缺失突變體oscyp86a10和oscyp86a11。其中，oscyp86a10突變體是在atg后的第493位堿基處缺失一個鳥嘌呤(g),導致蛋白發生移碼突變，其核酸序列如序列表seq?id?no：6所示，蛋白序列如序列表seq?id?no：5所示；oscyp86a11突變體是在atg后的第1124位堿基后，缺失6個堿基cctcaa，導致突變序列在此處形成終止子taa，從而使蛋白提前終止，其核酸序列如序列表seq?id?no：8所示，蛋白序列如序列表seq?id?no：7所示。
7、本專利技術所闡述的兩個基因oscyp86a10和oscyp86a11分別編碼序列表中seq?idno：1和seq?id?no：3所示的氨基酸序列的蛋白質。序列表中的seq?id?no：1氨基酸序列由533個氨基酸殘基組成，其oscyp86a10突變體的蛋白是在第164位氨基酸后發生了移碼突變，蛋白序列如序列表seq?id?no：5所示；序列表中的seq?id?no：3氨基酸序列由546個氨基酸殘基組成，其oscyp86a11突變體的蛋白是在第375位氨基酸處終止，導致蛋白提前終止，蛋白序列如序列表seq?id?no：7所示。
8、編碼上述蛋白質的基因可以是所述基因的cdna序列，如序列表中seq?id?no：2和seq?id?no：4所示的核苷酸序列。在oscyp86a10突變體中，第493位堿基鳥嘌呤(g)缺失；在oscyp86a11突變體中，第1124位堿基后，缺失6個堿基cctcaa。
9、本專利技術發現了oscyp86a10突變體植株的株高、穗長、劍葉長、粒長以及千粒重相比野生型均明顯降低；oscyp86a11突變體對植株的宏觀表型無影響；當oscyp86a10為純合突變、oscyp86a11為雜合突變時，植株的株高、有效分蘗數、穗長、劍葉長、粒長、粒寬以及千粒重相比oscyp86a10突變體受抑制更嚴重；當oscyp86a10為純合突變、oscyp86a11也為純合突變時，植株矮小，難存活。
10、本專利技術所闡述的兩個水稻基因，其突變后影響水稻角質層的滲透性：當oscyp86a10為純合突變、oscyp86a11為雜合突變時，與野生型、oscyp86a10和oscyp86a11兩個單突變體相比，其葉片失水率更快，甲苯胺藍染色更深以及葉綠素浸出速度快。
11、利用本專利技術提供的植物表型相關的蛋白oscyp86a10和oscyp86a11及其編碼基因能調控植物株高、穗長、劍葉長、粒長以及千粒重等表型，這些農藝性狀對水稻分子育種具有重要意義。oscyp86a10和oscyp86a11突變后，影響了葉片角質層的積累，為后期選育抗旱水稻新品種提供參考。
本文檔來自技高網...【技術保護點】
1.一種使水稻植株產生矮小表型或角質層發育異常的方法，其特征在于，通過同時突變蛋白質OsCYP86A10和OsCYP86A11，其中所述蛋白質OsCYP86A10和OsCYP86A11的氨基酸序列分別如SEQ?ID?NO:?1和3所示。
2.?權利要求1所述，蛋白質OsCYP86A10的編碼基因序列如SEQ?ID?NO:?2所示，蛋白質OsCYP86A11的編碼基因序列如SEQ?ID?NO:?4所示。
3.權利要求1所述，同時突變蛋白質OsCYP86A10和OsCYP86A11為利用基因工程手段，同時敲除水稻中的OsCYP86A10和OsCYP86A11基因，其中，基因序列如權利要求2所述。
4.權利要求3所述，其特征在于，基因工程手段為以基因OsCYP86A10和OsCYP86A11為靶標，設計基于CRISPR/Cas9的sgRNA序列，將含有編碼所述sgRNA序列的DNA片段連接到攜帶CRISPR/Cas的載體中，轉化水稻，獲得這兩個基因功能缺失的轉基因水稻。
5.權利要求4所述，其特征在于，OsCYP86A10基因的sgRNA
6.?一種獲得水稻植株矮小表型或角質層發育異常突變體的方法，其特征在于，通過同時突變蛋白質OsCYP86A10和OsCYP86A11，其中所述蛋白質OsCYP86A10和OsCYP86A11的氨基酸序列分別如SEQ?ID?NO:?1和3所示。
7.?權利要求6所述，蛋白質OsCYP86A10的編碼基因序列如SEQ?ID?NO:?2所示，蛋白質OsCYP86A11的編碼基因序列如SEQ?ID?NO:?4所示。
8.權利要求6所述，同時突變蛋白質OsCYP86A10和OsCYP86A11為利用基因工程手段，同時敲除水稻中的OsCYP86A10和OsCYP86A11基因，其中，基因序列如權利要求7所述。
9.權利要求8所述，其特征在于，基因工程手段為以基因OsCYP86A10和OsCYP86A11為靶標，設計基于CRISPR/Cas9的sgRNA序列，將含有編碼所述sgRNA序列的DNA片段連接到攜帶CRISPR/Cas的載體中，轉化水稻，獲得這兩個基因功能缺失的轉基因水稻。
10.權利要求9所述，其特征在于，
...【技術特征摘要】
1.一種使水稻植株產生矮小表型或角質層發育異常的方法，其特征在于，通過同時突變蛋白質oscyp86a10和oscyp86a11，其中所述蛋白質oscyp86a10和oscyp86a11的氨基酸序列分別如seq?id?no:?1和3所示。
2.?權利要求1所述，蛋白質oscyp86a10的編碼基因序列如seq?id?no:?2所示，蛋白質oscyp86a11的編碼基因序列如seq?id?no:?4所示。
3.權利要求1所述，同時突變蛋白質oscyp86a10和oscyp86a11為利用基因工程手段，同時敲除水稻中的oscyp86a10和oscyp86a11基因，其中，基因序列如權利要求2所述。
4.權利要求3所述，其特征在于，基因工程手段為以基因oscyp86a10和oscyp86a11為靶標，設計基于crispr/cas9的sgrna序列，將含有編碼所述sgrna序列的dna片段連接到攜帶crispr/cas的載體中，轉化水稻，獲得這兩個基因功能缺失的轉基因水稻。
5.權利要求4所述，其特征在于，oscyp86a10基因的sgrna作用位點的核苷酸序列為5’-gctgcccatcctggacgacg-3’，oscyp8...
【專利技術屬性】
技術研發人員：黃小燕，吳建新，唐曉艷，李伊琪，王志奎，趙德琪，許純玨，
申請(專利權)人：華南師范大學，
類型：發明
國別省市：
還沒有人留言評論。發表了對其他瀏覽者有用的留言會獲得科技券。