【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】
本專利技術(shù)涉及生殖毒性檢測(cè)方法領(lǐng)域，具體是一種基于小鼠體外受精的環(huán)境污染物生殖毒性檢測(cè)方法。
技術(shù)介紹
1、隨著社會(huì)發(fā)展，食品、藥品和洗護(hù)產(chǎn)品添加劑成分加劇，環(huán)境污染問題加劇，污染物通過食物鏈傳遞，對(duì)人體健康構(gòu)成威脅。人們每天接觸顆粒污染物、重金屬、食品包裝化合物和納米材料等，這些物質(zhì)被腸道吸收后，通過血液循環(huán)影響全身，包括生殖系統(tǒng)。對(duì)于備孕男性和孕期女性，污染物的影響尤為顯著。
2、體外受精（ivf）是將精子或卵子取出體外，經(jīng)過處理或培養(yǎng)成胚胎后，再植入母體內(nèi)的一種輔助生殖技術(shù)。在體內(nèi)，胚胎是處于一個(gè)低氧、無光、恒溫和恒濕的微環(huán)境中，并受到母體保護(hù)的環(huán)境中發(fā)育。但是體外受精操作是將胚胎置于體外環(huán)境的操作，胚胎應(yīng)對(duì)溫度、濕度、ph及滲透壓等變化時(shí)削弱了自身的發(fā)育潛能。因此，對(duì)體外受精操作環(huán)境的要求必須嚴(yán)格。目前，環(huán)境污染物毒性檢測(cè)實(shí)驗(yàn)一般采用鼠胚實(shí)驗(yàn)。鼠胚實(shí)驗(yàn)不僅需要飼養(yǎng)小鼠，并且需要進(jìn)行促排，過程繁瑣，尤其是對(duì)于沒有動(dòng)物房的生殖中心來說更為艱難。
3、當(dāng)前用于研究物質(zhì)毒性的模型包括2d細(xì)胞模型、動(dòng)物模型和類器官模型。但是，2d細(xì)胞模型細(xì)胞單一，動(dòng)物模型受到倫理、時(shí)間長(zhǎng)等諸多的限制，而類器官缺乏整體性：類器官模型通常只能模擬某一特定器官或組織的結(jié)構(gòu)和功能，環(huán)境污染物在真實(shí)生物體內(nèi)可能會(huì)發(fā)生代謝轉(zhuǎn)化、分布和排泄等過程，類器官模型往往無法模擬這些全身效應(yīng)，此外，不同的類器官模型在細(xì)胞來源、培養(yǎng)條件等方面存在差異，導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可重復(fù)性和可比性受到影響；缺乏長(zhǎng)期效應(yīng)，類器官研究往往集中在短期暴露下的毒性效應(yīng)，而
4、生殖器官含關(guān)鍵性的生殖細(xì)胞類型，包括精子、卵母細(xì)胞，在體外能夠再現(xiàn)體內(nèi)生殖的過程。位于生殖器官內(nèi)活躍的精子和卵母細(xì)胞能夠在體外進(jìn)行受精，發(fā)育，并可重現(xiàn)體內(nèi)受精功能。生殖器官在毒理學(xué)中的應(yīng)用主要是研究小分子化合物以及藥物的毒性，將精子和卵母細(xì)胞置于體外進(jìn)行受精，直接暴露于環(huán)境污染物三氯生中，使得利用體外受精研究三氯生毒性變得更容易。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
1、本專利技術(shù)提供了一種基于小鼠體外受精的環(huán)境污染物生殖毒性檢測(cè)方法，以解決現(xiàn)有技術(shù)環(huán)境污染物生殖毒性檢測(cè)方法存在的難以模擬長(zhǎng)期效應(yīng)的問題。
2、為了達(dá)到上述目的，本專利技術(shù)所采用的技術(shù)方案為：
3、一種基于小鼠體外受精的環(huán)境污染物生殖毒性檢測(cè)方法，包括以下步驟：
4、步驟1、獲取雌小鼠的卵母細(xì)胞、雄小鼠的精子，準(zhǔn)備多個(gè)體外受精培養(yǎng)皿，并向各個(gè)體外受精培養(yǎng)皿中的培養(yǎng)液加入不同濃度的環(huán)境污染物；
5、步驟2、將卵母細(xì)胞置于每個(gè)加入環(huán)境污染物后的體外受精培養(yǎng)皿的培養(yǎng)液中，再將精子加入每個(gè)已有卵母細(xì)胞的體外受精培養(yǎng)皿的培養(yǎng)液中，由此在各個(gè)體外受精培養(yǎng)皿中進(jìn)行受精；
6、步驟3、對(duì)各個(gè)體外受精培養(yǎng)皿中受精后的受精卵進(jìn)行培養(yǎng)，觀察每個(gè)體外受精培養(yǎng)皿中受精卵的發(fā)育情況以及受精卵形態(tài)變化，并統(tǒng)計(jì)各個(gè)體外受精培養(yǎng)皿中受精卵的受精率和細(xì)胞發(fā)育率、囊胚發(fā)育率，由此得到生殖毒性檢測(cè)結(jié)果。
7、進(jìn)一步的步驟1中，所述卵母細(xì)胞為雌小鼠超排處理后分離的卵母細(xì)胞。
8、進(jìn)一步的步驟1中，所述精子為在雄小鼠附睪尾處取精得到的精子。
9、進(jìn)一步的步驟1中，每個(gè)體外受精培養(yǎng)皿中的培養(yǎng)液為htf覆蓋礦物油。
10、進(jìn)一步的步驟1中，污染物為三氯生。
11、進(jìn)一步的步驟2中，將精子先經(jīng)活化處理獲能后再加入已有卵母細(xì)胞的體外受精培養(yǎng)皿的培養(yǎng)液中。
12、進(jìn)一步的步驟3中，統(tǒng)計(jì)的細(xì)胞發(fā)育率包括4細(xì)胞發(fā)育率、8細(xì)胞發(fā)育率。
13、與現(xiàn)有技術(shù)相比，本專利技術(shù)優(yōu)點(diǎn)為：
14、本專利技術(shù)用過將環(huán)境污染物三氯生與體外受精培養(yǎng)基充分混勻后，進(jìn)行精子和卵母細(xì)胞的受精及培養(yǎng)，使得三氯生直接作用于精子和卵母細(xì)胞的受精作用；通過設(shè)置不同濃度的三氯生確定精子和卵母細(xì)胞受精及培養(yǎng)方法，隨環(huán)境污染物三氯生濃度上升，受精體系中精子的形態(tài)和活性開始下降，使得受精率、4細(xì)胞發(fā)育率、8細(xì)胞發(fā)育率、囊胚發(fā)育率出現(xiàn)嚴(yán)重下降，能夠模擬長(zhǎng)期效應(yīng)，為體外研究環(huán)境污染物三氯生毒性提供了一種新的方法。
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1.一種基于小鼠體外受精的環(huán)境污染物生殖毒性檢測(cè)方法，其特征在于，包括以下步驟：
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種基于小鼠體外受精的環(huán)境污染物生殖毒性檢測(cè)方法，其特征在于，步驟1中，所述卵母細(xì)胞為雌小鼠超排處理后分離的卵母細(xì)胞。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種基于小鼠體外受精的環(huán)境污染物生殖毒性檢測(cè)方法，其特征在于，步驟1中，所述精子為在雄小鼠附睪尾處取精得到的精子。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種基于小鼠體外受精的環(huán)境污染物生殖毒性檢測(cè)方法，其特征在于，步驟1中，每個(gè)體外受精培養(yǎng)皿中的培養(yǎng)液為HTF覆蓋礦物油。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種基于小鼠體外受精的環(huán)境污染物生殖毒性檢測(cè)方法，其特征在于，步驟1中，污染物為三氯生。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種基于小鼠體外受精的環(huán)境污染物生殖毒性檢測(cè)方法，其特征在于，步驟2中，將精子先經(jīng)活化處理獲能后再加入已有卵母細(xì)胞的體外受精培養(yǎng)皿的培養(yǎng)液中。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種基于小鼠體外受精的環(huán)境污染物生殖毒性檢測(cè)方法，其特征在于，步驟3中，統(tǒng)計(jì)的細(xì)胞發(fā)育率包括4細(xì)胞發(fā)育率
...【技術(shù)特征摘要】
1.一種基于小鼠體外受精的環(huán)境污染物生殖毒性檢測(cè)方法，其特征在于，包括以下步驟：
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種基于小鼠體外受精的環(huán)境污染物生殖毒性檢測(cè)方法，其特征在于，步驟1中，所述卵母細(xì)胞為雌小鼠超排處理后分離的卵母細(xì)胞。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種基于小鼠體外受精的環(huán)境污染物生殖毒性檢測(cè)方法，其特征在于，步驟1中，所述精子為在雄小鼠附睪尾處取精得到的精子。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種基于小鼠體外受精的環(huán)境污染物生殖毒性檢測(cè)方法，其特征在于，步驟1中，每個(gè)體外...
【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：秦曦明，宋志遠(yuǎn)，
申請(qǐng)(專利權(quán))人：安徽大學(xué)，
類型：發(fā)明
國(guó)別省市：
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