【技術實現步驟摘要】
本專利技術涉及一種粗肽的純化方法，尤其涉及一種glp-1類似物粗肽的純化方法。
技術介紹
1、glp-1類似物是一類重要的藥物，主要用于治療2型糖尿病，并具有減重效果。胰高血糖素樣肽-1(glp-1)是一種主要由腸道l細胞所產生的激素，屬于腸促胰素。glp-1受體激動劑(glp-1ra)是近年來的新型降糖藥，通過激活glp-1受體，以葡萄糖濃度依賴的方式增強胰島素分泌，抑制胰高血糖素分泌，并能夠延緩胃排空，通過中樞性的食欲抑制減少進食量，從而達到降低血糖和減肥的效果。glp-1類似物不僅用于治療2型糖尿病，還在心血管保護方面表現出優勢，能夠降低心血管疾病的風險。
2、目前glp-1類似物藥物的市場競爭激烈，各大廠家為了壓低成本，在上游合成或修飾階段產出的一部分質量稍差、雜質偏大的一些產物，其下游純化難度更大。通常在分析圖中表現為目標物主峰前后附近存在一些占比較大的單雜，經過多輪純化也不能很好地去除。由于glp-1類似物的序列相近，主要差異在于側鏈修飾，合成期間引入的難以去除的雜質，通常是極性與主峰很相近的缺失肽雜質，如缺失肽ser和缺失肽ile，缺失肽gly以及加gly等雜質，因此，新的glp-1類似物粗肽的純化方法亟待開發。
技術實現思路
1、專利技術目的：本專利技術的目的是提供一種操作簡便、回收率高、成本低的glp-1類似物粗肽的純化方法。
2、技術方案：本專利技術公開了一種glp-1類似物粗肽的純化方法，包括以下步驟：
3、(1)一純樣品處
4、(2)一純流動相：a相為酸性溶液，包括tfa、醋酸或磷酸，b相為添加了ph調節劑的有機溶劑，包括乙腈或甲醇，所述ph調節劑包括tfa、醋酸、磷酸、氨水或三乙胺；
5、(3)一純純化過程：平衡，使用80-95％a相平衡色譜柱，優選為90％；上樣，處理好的樣品進行上樣；后平衡，用80-95％a相平衡色譜柱，優選為90％；洗脫，a相和b相作為流動相洗脫，逐步提高b相比例進行梯度洗脫，即完成純化。
6、上述純化方法，在一純梯度洗脫后取一純洗脫液合樣，進行二純純化，所述二純純化包括以下步驟：
7、(4)二純樣品處理：取一純洗脫液合樣，調節ph，水稀釋后過濾待用；
8、(5)二純流動相：a相為弱堿性溶液，包括銨鹽或鈉鹽，b相為添加了ph調節劑的有機溶劑，包括乙腈或甲醇，所述ph調節劑包括tfa、醋酸、磷酸、氨水或三乙胺；
9、(6)二純純化：平衡，使用80-95％a相平衡色譜柱，優選為90％；上樣，處理好的樣品進行上樣；后平衡，用80-95％a相平衡色譜柱，優選為90％；洗脫，a相和b相作為流動相洗脫，逐步提高b相比例進行梯度洗脫，即完成純化。
10、其中，所述glp-1類似物粗肽，包括司美格魯肽或替爾泊肽。
11、其中，所述純化方法，采用的色譜柱為sepax?bio-c8或sepax?br-c18，填料粒徑為8μm或10μm，孔徑為或
12、其中，步驟(1)中，一純樣品處理，具體為，取glp-1類似物粗肽，使用10％乙腈水溶解，使用10％氨水調節ph至8-9，濃度為5-15mg/ml，0.22μm有機濾膜過濾后待用。
13、其中，步驟(2)中，所述b相，ph調節劑在有機溶劑中的體積分數為0.1％～1％。
14、其中，步驟(3)中，所述梯度洗脫，具體為：
15、 時間(min) 流動相b(％) 流動相a(％) 0 10 90 10 15 85 135 40 60 135.01 80 20 145 80 20
16、或者為：
17、 時間(min) 流動相b(％) 流動相a(％) 0 10 90 10 20 80 210 40 60
18、或者為：
19、 時間(min) 流動相b(％) 流動相a(％) 0 10 90 5 34 66 6 34 66 88 39 61
20、其中，步驟(4)中，二純樣品處理具體為：一純洗脫液合樣，使用10％氨水調節ph至8-9，再使用純化水稀釋一倍后，0.22μm有機濾膜過濾后待用。
21、其中，步驟(5)中，所述b相，ph調節劑在有機溶劑中的體積本文檔來自技高網...
【技術保護點】
1.一種GLP-1類似物粗肽的純化方法，其特征在于，包括以下步驟：
2.一種權利要求1所述的純化方法，其特征在于，一純梯度洗脫后取一純洗脫液合樣，進行二純純化，所述二純純化包括以下步驟：
3.根據權利要求1或2所述的純化方法，其特征在于，所述GLP-1類似物粗肽，包括司美格魯肽或替爾泊肽。
4.根據權利要求1或2所述的純化方法，其特征在于，所述純化方法，采用的色譜柱為Sepax?Bio-C8或Sepax?BR-C18，填料粒徑為8μm或10μm，孔徑為或
5.根據權利要求1所述的純化方法，其特征在于，步驟(1)中，一純樣品處理，具體為，取GLP-1類似物粗肽，使用10％-20％乙腈水溶解，使用10％-20％氨水調節pH至8-9，濃度為5-15mg/mL，有機濾膜過濾后待用。
6.根據權利要求1所述的純化方法，其特征在于，步驟(2)中，所述B相，pH調節劑在有機溶劑中的體積分數為0.1％～1％。
7.根據權利要求2所述的純化方法，其特征在于，步驟(4)中，二純樣品處理，具體為，取一純洗脫液合樣，使用10％-20
8.根據權利要求2所述的純化方法，其特征在于，步驟(5)中，所述B相，pH調節劑在有機溶劑中的體積分數為0.1％～1％。
...【技術特征摘要】
1.一種glp-1類似物粗肽的純化方法，其特征在于，包括以下步驟：
2.一種權利要求1所述的純化方法，其特征在于，一純梯度洗脫后取一純洗脫液合樣，進行二純純化，所述二純純化包括以下步驟：
3.根據權利要求1或2所述的純化方法，其特征在于，所述glp-1類似物粗肽，包括司美格魯肽或替爾泊肽。
4.根據權利要求1或2所述的純化方法，其特征在于，所述純化方法，采用的色譜柱為sepax?bio-c8或sepax?br-c18，填料粒徑為8μm或10μm，孔徑為或
5.根據權利要求1所述的純化方法，其特征在于，步驟(1)中，一純樣品處理，具體為，取glp...
【專利技術屬性】
技術研發人員：汪棟，任愛君，高凱龍，
申請(專利權)人：蘇州賽分科技股份有限公司，
類型：發明
國別省市：
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